REPORTE 3- BIOQUIMICA

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE INGENIERÍA ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA ÁREA DE QUÍMICA LABORATORIO DE BIOQUÍMICA SECCIÓN B ING. ERWIN ORTÍZ

PRÁCTICA NO.3 PROPIEDADES QUÍMICAS DE PROTEÍNAS

BRENDA MARÍA MONTERROSO WAIGHT 200915024 GUATEMALA, 29 de agosto de 2011

A. OBJETIVOS

1. Identificar los distintos tipos de proteínas mediante pruebas cualitativas de color y/o coagulación. 2. Determinar a partir de las pruebas realizadas, un grupo en específico en las cadenas de las proteínas. proteínas. 3. Determinar el mecanismo de funcionamiento de las distintas pruebas cualitativas realizadas a las proteínas.

B. RESUMEN

En la práctica no. 3 se realizó distintas pruebas para identificar a los proteínas a partir de cambios colorimétricos y físicos. Para ello se realizaron 9 pruebas con 4 distintas proteínas: gelatina, caseína, clara de huevo y peptona. Estas pruebas fueron: Prueba de Elrich Diazo, de color o Biuret, Azufre Reducido, Test de Molish, precipitación con NaCl, precipitación de azúcares, precipitación por FeCl 3, precipitación por ácido clorhídrico y precipitación por ácido nítrico. Para determinar la positividad de cada reacción, se baso en los cambios de color esperados y en otros casos observar si hubo o no coagulación de la proteína, según la teoría esperada.

C. RESULTADOS a. Prueba Erich Diazo

Tabla no.1 “Prueba de Erich Diazo”

Proteína

Conclusión

Gelatina

Negativa

Caseína

Positiva

Clara de Huevo Peptona

Positiva Positiva Fuente: Pruebas de Identificación

b. Prueba de Color

Proteína Gelatina Caseína Clara de Huevo Peptona

Tabla no.2 “Prueba de Color” Conclusión Negativa Positiva Positiva negativa

Fuente: Pruebas de Identificación

c. Prueba de Azufre Reducido

Tabla no.3 “Prueba de Azufre Reducido” Proteína Conclusión Negativa Gelatina Negativa Caseína Positiva Clara de Huevo negativa Peptona Fuente: Pruebas de Identificación

d. Prueba de Molish


Tabla no.4 “Prueba de Molish” Conclusión Positiva Positiva Positiva Positiva


e. Prueba de NaCl al 5%


Tabla no.5 “Prueba deNaCl al 5%” Conclusión Negativa Negativa Positiva Negativa


f. Prueba de Precipitación de Azucares Tabla no.6 “Prueba de Precipitación de Azucares ” Proteína Conclusión Negativa. Gelatina Negativa Caseína Positiva Clara de Huevo positiva Peptona Fuente: Pruebas de Identificación

g. Prueba de Precipitación (FeCl3) Tabla no.7 “Prueba de Precipitación (FeCl3)” Proteína Conclusión Positiva. Gelatina Positiva Caseína Positiva Clara de Huevo Negativa Peptona Fuente: Pruebas de Identificación

h. Prueba de Ácido (HCl)


Tabla no.8 “Prueba de Ácido (HCl)” Conclusión Negativa. Positiva Positiva. Negativa


i. Prueba de Ácido (HNO3)


Tabla no.1 “Prueba de Ácido (HNO3)” Conclusión Positiva. Positiva Positiva Negativa


D. PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN Prueba no. 1 Nombre de la Prueba Erich Diazo Criterio de la Prueba La presencia de grupos imidazol o fenoles en una muestra se reconocen por la reacción con el ácido diazobencenosulfónico (diazida del ácido sulfanílico), y forman productos de sustitución de color rojo al alcalanizar la muestra. [Ref. no. 1, pág. 33] Reacción

[Ref. no. 1] Observación Gelatina

Se separo en dos fases.

Caseína

Cambio a color rojo.


Cambio a color rojo. Cambio a color rojo.

Conclusión

Gelatina

Negativa

Caseína

Positiva


Positiva Positiva

Prueba no. 2 Nombre de la Prueba Color Criterio de la Prueba Esta prueba se basa en la reacción de Sulfato de Cobre (CuSO 4) con compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos, en un medio alcalino (NaOH). El producto es un complejo de color violeta, cuya intensidad depende de la cantidad de enlaces peptídicos presentes. Este complejo de coordinación entre los iones CU+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Los dipéptidos y los aminoácidos dan esta prueba negativa. [Ref. no. 1 ] Reacción

Observación Gelatina

Color celeste dos fases.

Caseína

Color púrpura y otra fase azul.


Dos fases, violeta e incoloro. Color rojizo.

Conclusión

Gelatina

Negativa

Caseína

Positiva


Positiva negativa

Prueba no.3 Nombre de la Prueba Prueba de Azufre Reducido o grupos SH Criterio de la Prueba La proteína se separa mediante un álcali del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Si aparece una coloración negra (de sulfuro de plomo) en el precipitado, la reacción será positiva, indicando la presencia de azufre. [Ref. no. 4] Reacción


Dos fases: verde e incoloro

Caseína

Se formo precipitado blanco.


Se formo varias fases sólidas: café, negro y rojo. Formación de precipitado, color amarillo. Conclusión

Gelatina

Negativa

Caseína

Negativa


Positiva negativa

Prueba no. 4 Nombre de la Prueba Prueba o Test de Molish Criterio de la Prueba Reacción cualitativa entre el aminoácido con el -naftol y el ácido sulfúrico, dando como resultado positivo con un anillo violeta al determinar glúcidos. [Ref. no.7 ] Reacción


Se formó una fase morada.

Caseína

Se formo un anillo morado en la interfase.


Anillo morado en la interfase. Formación de anillo morado en la itnerfase. Conclusión

Gelatina

Positiva

Caseína

Positiva


Positiva Positiva

Prueba no. 5 Nombre de la Prueba NaCl al 5% Criterio de la Prueba De las proteínas globulares, las albúminas son solubles en agua pura, pero también son solubles en soluciones salinas. Las globulinas son insolubles en agua pura, pero se disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio. Para permanecer en solución las globulinas necesitan cierta cantidad de sal, al disminuir la concentración de sal, la globulina precipita. Las proteínas coaguladas son insolubles en agua, solución salina, ácidos y álcalis diluidos. [Ref. no. 3] Reacción

La reacción involucra un rompimiento de enlaces coordinados entre diferentes cadenas laterales de los aminoácidos constituyentes de la proteína en los cuales estos al romperse no regresan a su forma original lo que deriva en la perdida de la forma globular de la proteína. Observación

Gelatina

Se formó dos fases.

Caseína

No hubo cambios.


No hubo cambios. Se formo una fase de color amarillo.. Conclusión

Gelatina

Negativa

Caseína

Negativa


Positiva Negativa

Prueba no. 6 Nombre de la Prueba Precipitación de Azucares Criterio de la Prueba Si la proteína se encuentra en una solución a un pH mayor a su punto isoeléctrico, tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el producto (un proteinato del catión) precipita. En este caso al añadir el NaOH se incrementa el pH, al añadir el CuSO 4, la proteína reacciona y precipita. Calentar a 60oC, acelera la coagulación de las proteínas. [Ref. no. 1] Reacción

proteína-COO-1 + Cu+2

2proteína-COO-1Cu+2 (Precipitado) Observación

Gelatina

Dos fases, una amarilla y se formó precipitado. .

Caseína

Se oscureció (morado).


Presento precipitado morado en el fondo. Se formo precipitado morado. Conclusión

Gelatina

Negativa.

Caseína

Negativa


Positiva positiva

Prueba no. 7 Nombre de la Prueba Precipitación de FeCl 3 Criterio de la Prueba Si la proteína se encuentra en una solución a un pH mayor a su punto isoeléctrico, tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el producto (un proteinato del catión) precipita. Para este caso se añade FeCl 3 y se calienta a 60 [Ref. no.1] Observación Gelatina

Se formo precipitado amarillo.

Caseína



Dos fases, una transparente y otra naranja. En ambas fases hay partículas en suspensión. Amarillo claro. Conclusión

Gelatina

Positiva.

Caseína

Positiva


Positiva Negativa

Prueba no. 8 Nombre de la Prueba Ácido (HCl) Criterio de la Prueba Toda proteína si se encuentra a un pH por debajo del punto isoeléctrico, tiene carga positiva, y reacciona con aniones de ácidos. El producto es insoluble en la solución y precipita. [Ref. no.1] Observación Gelatina

Color amarillo verdoso, una sola fase

Caseína



Dos fases, una líquida y una sólida Una sola fase de color rojizo Conclusión

Gelatina

Negativa.

Caseína

Positiva


Positiva. Negativa

Prueba no. 9 Nombre de la Prueba Ácido HNO3 Criterio de la Prueba Toda proteína si se encuentra a un pH por debajo del punto isoeléctrico, tiene carga positiva, y reacciona con aniones de ácidos. El producto es insoluble en la solución y precipita. [Ref. no.1] Observación Gelatina

Dos fases: una sólida y una líquida, de color amarillo lechoso.

Caseína



Se formo espuma amarillo lechoso. Una sola fase de color amarillo claro. Conclusión

Gelatina

Positiva.

Caseína

Positiva


Positiva Negativa

E. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

En la práctica no. 3, se realizaron 9 pruebas cualitativas para identificar y estudiar las propiedades de 4 proteínas: gelatina, caseína, clara de huevo y peptona. Las proteínas son cadenas de distintas secuencias de aminoácidos. A los enlaces entre los distintos aminoácidos entre el grupo carboxilo y el grupo amino se le conoce como péptido. La primera prueba realizada fue la de Elrich Diazo, la cual se utiliza para identificar el grupo imidazol o fenol, provocando un cambio de color rojo. Por ello la prueba para la caseína, albúmina y peptona es positiva. La segunda prueba realizada fue la de color o Biuret. Esta prueba consiste en agregar CuSO4 a la proteína previamente alcanizada con NaOH. En esta prueba las muestras de caseína y albúminca (clara de huevo) se tornaron entre color morado y violeta por lo que se puede concluir que es positiva. Sin embargo para el caso de la gelatina y la peptona, no hubo cambio para la primera y el color cambio a rojizo para la segunda, por lo que la prueba es negativa. La tercera prueba es el test de azufre reducido, la cual identifica la presencia de enlaces de azufre en la proteína a partir del precipitado de sulfato de plomo de color negro-gris. Para este caso, la prueba es positiva solo para la albúmina de la clara de huevo. La prueba de Molisch es usado para la identificación de glúcidos y se manifiesta por medio de la formación de un anillo de color morado en la interfase. En la práctica la prueba es positiva para las 4 proteínas, lo que indica que la presencia de glúcidos o carbohidratos en su cadena. La prueba de NaCl, es una prueba de precipitación salina, que identifica a las proteínas a partir de su solubilidad. Si la proteína es albúmina: es soluble en una solución salina y por el contrario, si es globulina no es soluble en sal.

Las proteínas que son solubles en medio acuoso, forman puentes de hidrógeno. Al agregar sal, ésta libera las moléculas de agua unidas a la proteína y por lo que aumenta la interacción proteína – proteína y precipita. En la práctica, para el caso de la clara de huevo, el resultado es positivo, debido a que como es albúmina, soluble en solución salina, no presento cambio. Las pruebas de precipitación por metales, consiste en incrementar el pH de la solución, para que la proteína se cargue negativamente, y así los iones metálicos reaccionan con los grupos carboxilo de la proteína, los cuales la hidrolizan para una posterior precipitación. En la práctica en la prueba de precipitación de azucares se utilizo el sulfato de cobre con hidróxido de sodio; y además se calentó la muestra a 60oC. El proceso de calentamiento se utiliza para acelerar la coagulación de la proteína y así su precipitación, esto debido a que por sí sola, la proteína en presencia del sulfato de cobre no precipita inmediatamente, solo cambia a color violeta como se observa en la prueba de Biuret o de color. Por lo tanto esta prueba es positiva para la clara de huevo como para la peptona únicamente. En la prueba de precipitación con cloruro férrico, la prueba dio positivo para la gelatina, la caseína y la clara de huevo. Las pruebas de precipitación por ácidos fuertes, consisten en agregar el ácido a la proteína, para disminuir el pH debajo de su punto isoeléctrico para cargar positivamente la proteína y con ello hidrolizar la proteína y provocar una precipitación del producto entre la reacción con los aniones ácidos. Así para el caso de la práctica, al utilizar ácido clorhídrico, la prueba fue positiva para la caseína y la clara de huevo. En el caso del acido nítrico, la prueba fue positiva para la gelatina, caseína y clara de huevo.

F. CONCLUSIONES

1. Las pruebas realizadas para identificar proteínas son de carácter colorimétrico y de separación física. 2. La prueba de azufre reducido, se utiliza para identificar las proteínas que poseen azufre en los enlaces de las cadenas de aminoácidos. 3. La prueba de Molish, fue la única prueba positiva para las cuatro proteínas utilizadas en la práctica. 4. Las pruebas de precipitación al tratar con soluciones ácidas o bases, la proteína se disuelve y se hidroliza, por lo que los enlaces peptídicos se rompen para dar lugar a la coagulación de la proteína. En el caso de la precipitación salina, la sal provoca un aumento en las interacciones proteína-proteína por las cuales coagula.

5. OBSERVACIONES a. Prueba de Elrich Diazo

b. Prueba de Color

c. Prueba de Azufre Reducido

d. Prueba de Molish

e. Prueba de NaCl

f. Prueba de Precipitación de Azúcares

g. Prueba de Precipitación FeCl3

h. Prueba de Acido (HCl)

i. Prueba de Ácido (HNO3)

6. REFERENCIAS

1. Manual de Experimentos de Laboratorio para Bioquímica. [en línea] (28.08.11) http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=8SAtkthrFEkC&oi=fnd& pg=PR15&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos& ots=oDjjqoo078&sig=JjvU8yogKnjSTEDRJMfzkO9WhhI#v=onepage&q& f=true 2. Reconocimiento de Proteínas [en línea] (28.08.2011) http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Prot enas.htm 3. Prácticas de Bioquímica Descriptiva. [En línea] (28.08.2011) http://books.google.com.gt/books?id=xv8LNjwigGQC&pg=PA168&dq=pr ueba++de+acido+nitrico+en+proteinas&hl=es&ei=WyhbTpP4Jo6gtwe7vI G7Dg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=3&ved=0CDQQ6AEwA g#v=onepage&q&f=false 4. Laboratorio de Bioquímica: una visión práctica. [En línea] (28.08.2011) http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=dAbMDrXcTHsC&oi=fnd &pg=PA3&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos& ots=ZCV8JvHpAF&sig=m1LzfSytpXomURxPDhG5Adk3O4#v=onepage&q&f=false 5. Reacción de molish. [en línea] (28.08.11) http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch

REPORTE 3- BIOQUIMICA

Recommend Documents