UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICO FACULTA FACULTAD D DE D E QUÍMICA QUÍ MICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA METABÓLICA
PRÁCTICA No. 3 HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LIPIDOS DE LA L A LECHE
GRUPO: 3
No. DE EQUIPO: !A INTEGRANTES: DE "ESUS ESTANISLAO ISMAR LEON QUIRINO SILVIA SILVIA SANTOS GUADARRAMA ERANDI VIE#RA TORRES "UAN "OSÉ
PROFESORA: Q.F.B. DIANA $AREN CASTRO ESTRADA
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: T el: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
Toluca de Lerdo México a 5 de septiembre de 2016
PRÁCTICA No. 3 HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LIPIDOS DE LA LECHE
OB"ETIVO Adquirir las habilidades en el laboratorio para determinar una hidrólisis enzimtica de los l!pidos de la leche"
HIPÓTESIS MARCO TEÓRICO La hidrólisis enzimtica# realizada en condiciones moderadas de p$ % temperatura mantiene inalterada la calidad nutricional de los aminocidos& ésta presenta otras 'enta(as importantes respecto a los métodos )!sico*qu!micos# tales como la rapidez con que ocurren las reacciones % la alta especi)icidad de las enzimas que ase+uran e incrementan la e)icacia del proceso"
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
,n las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de di'ersos ésteres ha% di)erencia entre las lipasas % las esterasas" ,sta di)erencia se basa en su especi)icidad pre)erencial % +rasas# de cadena lar+a# mientras que los
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
substratos naturales de las esterasas# son los esteres sencillos de cidos de ba(o peso molecular" -in embar+o las dos clases de enzimas son sumamente inespec!)icas en cuanto a su acción# % la naturaleza del cido +raso o del alcohol tiene e)ecto no en la especi)icidad sino en la 'elocidad de reacción" La hidrólisis de los tri+licéridos que consumen animales superiores se lle'a a cabo principalmente en el intestino del+ado# por medio de enzimas lipol.ticas elaboradas en el pncreas" Las lipasas pancreticas existen en dos tipos/ las espec!)icas para romper la unión éster en la posición o de los tri+licéridos# % las espec!)icas para las uniones " La hidrólisis completa de los tri+licéridos procede por pasos" 3rimero se hidrolizan rpidamente las uniones al)a % al)a prima# lue+o lentamente se rompe las uniones beta" ,stas reacciones se aceleran con las sales biliares como taurocolato o +licocolato de sodio# que emulsi)ican % solubilizan a los l!pidos" Las sales biliares 'ienen en la bilis# secreción del h!+ado que pasa al intestino se pro'oca por la hormona colecistocinina# que se sintetiza en el intestino del+ado % se libera a la circulación en respuesta en presencia de l!pidos en el duodeno"
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
DIAGRAMA DEL PROCEDIMIENTO
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
4denti)icar los matraces colocndoles los nmeros del 1*5# % uno con el 7"
Adicionar a c8matraz 1"5mL de extracto neutro de 3ancreatina al 19"
Medir cuidadosamente con una pipeta 'olumétrica# 5mL de leche homo+enizada % 'erterlos en cada uno de los seis matraces ,rlenme%er de 125mL"
:olocar todos los matraces en ba;o Mar!a a <=:
Titular tan rpido como sea posible debido a que la di+estión realizada por la enzima continua durante la titulación"
>espués de 15 minutos# retirara del ba;o Mar!a el matraz 1 % adicionarle 12"5mL de etanol titulando ense+uida con ?@$ 0"05 usando )enol)taléina" BCD
Eepetir el procedimiento anterior# cacando el matraz 2 alos 0 minutos# el % 7 a los F5# el F a los 60 % el 5 a los <5 minutos"
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
CA+itar el matraz durante la titulación# tan 'i+orosamente como sea posible %a que la prote!na precipitada puede enmascarar los cidos +rasos libres"
3reparación de testi+o
A;adir en un matraz de 125mL# 5mL de leche homo+einizada % 1"5 mL de la solución de pancreatina her'ida pre'iamente por 6 minutos"
A+re+ar ense+uida 12"5mL de etanol# la )enol)tale!na % titular inmediatamente con ?@$ 0"5
RESULTADOS Matraz 1 2 F 5 Testi+o
p$
Golumen +astado de
Matraz*Testi+o
10"H1 10"5 10"HH 10"1< 10"< 10"5 10"5
?@$ BmLD H"F H"< I"5 F"I 10"6 I"< F"F
BGolumenD mL F F" 5"1 0"5 6"2 5" *
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO 1" ,xplicar el e)ecto de la adicción de -ales Jiliares sobre la acti'idad enzimtica suponiendo que la +rasa de la leche es Triestearina" Al adicionar sales biliares a la leche se acelera la reacción# pues emulsi)ican % solubilizan a los l!pidos que ésta contiene" La triesterina es un triacil+licerol simple que contiene tres restos de cido esterico" Los cidos +rasos se liberan de los triacil+liceroles por medio de la acción catal!tica de las lipasas# para realizar la di+estión de l!pidos se necesita la presencia de un deter+ente )uerte/ sales biliares" 3or lo tanto las sales biliares nos a%udaran a di+erir % absorber +rasas"
Las sales biliares se sintetizan en el h!+ado a partir de colesterol# se almacenan en la 'es!cula biliar % se liberan al intestino del+ado# después de la in+estión de una comida que conten+a +rasas" ,stos compuestos an)ipticos actan como deter+entes bioló+icos# con'irtiendo la +rasa de la dieta en micelas mixtas de cidos biliares % triacil+liceroles" La )ormación de micelas incrementa enormemente la )racción de moléculas de l!pidos accesibles a la acción de las lipasas hidrosolubles en el intestino# que con'ierte los triacil+liceroles en monoacil+liceroles % diacil+liceroles# cidos +rasos
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
libres % +licerol" ,stos productos de la acción de la lipasa se di)unden hacia el interior de las células epiteliales# que recubren la mucosa intestinal# donde se con'ierten de nue'o a triacil+liceroles % se empaquetan (unto con colesterol de la dieta % prote!nas espec!)icas para )ormar a+re+ados lipoproteicos denominados quilomicrones"
2" :alcular el nmero de mili+ramos de Triestearina hidrolizada por la lipasa en una hora# basndose en la cantidad de cido liberado durante ese inter'alo"
" ,scribir las )órmulas de los si+uientes compuestos/ Lecitina# 4solecitina# un +licol!pido % una ce)alina"
L%&'(')* T'+o ,% -+',o /*+o)'0'&*1-% +2%/%)(% %) (%',o/ *)'4*-%/ 5 6%7%(*-%/. F8)&'o)* &o4o %48-7%)(% 9(2*)/+o2(* -* /*)72% * 2'o)%/;.
I/o-%&'(')* G-'&o-+',o L+',o/ <8% &o)('%)%) *=>&*2. 9%/0')7o/')* ?@&',o 72*/o;
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
C%0*-')* Fo/0o-+',o +2%/%)(% %) -*/ 4%412*)*/ &%-8-*2%/ 4@/ *18),*)(% %) /%2%/ 84*)o/.
F" >escribir la composición de la leche" La leche es una combinación de di)erentes suspensiones de materia en a+ua" :ontiene/ •
-uspensiones coloidales de peque;as part!culas sólidas de case!na BmicelasD&
•
Kna emulsión de +lóbulos de +rasa de la leche % de 'itaminas liposolubles que se mantienen en suspensión&
•
Kna solución de lactosa# prote!nas solubles en a+ua# sales minerales % otras substancias"
Las micelas de case!na % los +lóbulos de +rasa le otor+an a la leche la ma%or!a de las caracter!sticas )!sicas Bestructura % colorD que se 'en en los productos lcteos"
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
P2o(%)*/ %) -* -%&% 3rote!nas séricas *case!na *case!na 1I9 F59 2F9 C*21o',2*(o/ 9474L; Lactosa lucosa alactosa M%oinosito * l 5000
1F
Tri+licéridos
12
F*5
>i+licéridos
acetil+lucosamina 11 L+',o/ 9; Mono+licéridos
*case!na 129 Ncido *
@li+osacridos
acetilneuraminic
de la lactosa
o F*5
0*10
Oos)ol!pidos
,steroles# esterolésteres carotenoides# etc"
I<
0"*0"5
0"2*0"F
1
0"*0"H
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
5" Pue tipos de deter+entes bioló+icos existen en el hombre"
E%2&'&'o/ ,% ')(%72*&') 1"
:on base en los clculos de las concentraciones de cidos +rasos liberados por acción de la Lipasa pancretica# elabore la representación doble rec!proca de LineQea'er % JurR % obten+a el ?m % la Gmax de la cinética enzimtica Breporte todos los clculos realizadosD"
2"
S3or qué es til +ra)icar los datos de 'elocidad para las reacciones enzimticas como una l!nea recta ms que como una cur'a
"
SJa(o qué condiciones se puede asumir que el ?m indica la a)inidad de la unión de la enzima con el sustrato
4nterprete el 'alor de ?m % Gmax obtenidos en la +r)ica"
REFERENCIAS Melo# G"# :uamatzi# @" B200isponible en/ http/88QQQ"uib"cat
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
Knión +anadera Ee+ional de Walisco" Bn"dD" Composición de la leche" U,n l!neaV" Eecuperado el 0 de septiembre de 2016" >isponible en/ QQQ"u+r("or+"mx Eeportes de qu!mica" B200HD" Pancreatina" U,n l!neaV" Eecuperado el 0 de septiembre
de
2016"
>isponible
en/
http/88reportesparaestudiantesdequimica"blo+spot"mx Kni'ersidad de -e'illa" B2000D" Jornada internacional sobre proteínas alimentarias" ,dit >, L@- ,>4T@E,-" p"p" 100*101
www.uaemex.mx Facultad de Química • Paseo Colón esq. Paseo Tollocan • Toluca, Estado de México Tel: 2!"#$% & Fax 2!"'(%$ & )quim*uaemex.mx
