Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas – Laboratorio de Bioquímica y Biología molecular Curva tipo de azucares reductores. Morales Ramírez Tania, Vela Vázquez Valeria/ Grupo: 3IM2/ Sección 3 •
Introducción
Los az Los azúc úcar ares es redu re duct ctor ores es so son n aque aq uell llos os azúcares que poseen su grupo carbonilo (grupo (grupo funcio funcional nal)) intact intacto, o, y que a trav través és del del mis mismo pued pueden en reacc eacciionar onar como reductores con con otra otras s molé molécu cula las. s. Una Una curv curva a tipo tipo o curv curva a de cali calibr brac ació ión n es una una representa representación ción grfica grfica entre entre la relación relación de conc concen entr trac ació ión n (e!e (e!e de las las absc abscis isas as)) y absorbancia (e!e de las ordenadas). "s necesario necesario ensayar varias soluciones soluciones de concen concentra tració ción n conoci conocida da y determ determin inar ar sus respectivas absorbancias, construyéndose la curva curva tipo, tipo, cuya cuya apari aparienci encia a es una recta. recta. #ara #ara medi medirr la abso absorb rbanc ancia ia se empl emplea ea un espectrofotómetro que realice lecturas a $%& nm. "l método ' (técnica de *iller) es una técn técnic ica a colo colori rimé métr tric ica a que que empl emplea ea cid cido o +,$d +,$din init itro rosa sali lici cili lico co para para la idr idrol olis isis is de polisacridos presentes en una muestra. "sta "sta técn técnic ica a sirv sirve e para para cuan cuanti tifi fica carr los azuc azucar ares es redu reduct ctor ores es prod produc ucid idos os en una una reac reacci ción ón enzim enzima a gener generan ando do un prod produc ucto to colore coloreado ado.. La intens intensida idad d de color color que se mide por métodos métodos espectrofo espectrofotomé tométric tricos os es proporcional a la concentración de azucares. •
Objetivo
-btene -btenerr una curva curva de calibr calibraci ación ón para para transformar las lecturas de absorbencia. -bten btener er la act activid ividad ad de la enz enzima invertasa. . •
Resultados
Tabla Ta bla 1. Curva tipo de azucares reductores
mL lucosa 1zúcar reductor &.&&$* / (2moles/3mL) 0ructosa &.&&&$* Blanco 0 0 1 0.1 1 0. ! 0." " " 0.# # $ 1.0 10 Tabla . %alores de &lucosa ' Fructosa en ()oles*)+. Tubo No.
4lculo de los 2moles/3mL
(
Glucosa 0.005 M
)+ Fructosa ( 0.005 M ) =0.01 M
0.01 mol= 1000 mL
x mo mol =0.1 mL
−6
por lo tanto x = 0.00001 mol =1 x 10 moles =1 µmol / 2 mL Figura 1. Resultados Curva tipo azucares reductores
necesario para que las recciones de ó9ido8 reducción se lleven a cabo. 4uando se a7ade el +,$ ' a la lucosa ; 0ructosa ocurre una reacción de ó9ido8 reducción en la cual el ' es reducido por la lucosa a cido +8amino8$8nitrosalic6lico, mientras que la glucosa se o9ida a cido '8 glucónoico.
&r,-ica 1. Curva tipo de azucar reductor.
1l realizar la grfica se obtuvo una l6nea recta por lo que podemos decir que la concentración de un azúcar reductor es directamente proporcional a la absorbancia obtenida en el espectrofotómetro, es decir que a mayor cantidad de glucosa y fructosa se obtiene una mayor absorbancia.
iscusión e llevó a cabo la preparación de tubos como se muestra en la tabla 5 se comenzó a observar la presencia de color cuando estos se somet6an a calentamiento a ba7o mar6a, el color va dependiendo de la cantidad de azúcar reductor (glucosa8fructuosa) que se le aya colocado. La sacarosa es un disacarido no reductor, que no se o9ida con facilidad debido a que sus tomos de carbono anomericos esta unidos a un enlace glicosidico. "l cido +,$8dinitrosalisilico reacciona solo con azucares reductores, cuando la sacarosa se idrolizo se libero lucosa y 0ructosa (ambos son azucares reductores) que reaccionarón con el +,$ ' a una temperatura dada durante un tiempo marcado para generar coloración y posteriormente ser observado en un espectrofotómetro a una longitud de onda de $%&nm. 1dems de permitir el desarrollo de color (un tono amarillo representa una o9idación y un tono ro!o cuando presenta una reducción) el ' proporciona el nivel de p:
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Conclusiónes
1 1 mayor cantidad de
µmol de azúcar
reductor mayor absorbencia refle!ada.
2 "l cido +,$8dinitrosalisilico nos permite observar el zucares.
•
poder
reductor
de
los
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