CARLOS ALBERTO GARCIA MOGOLLÓN Ver 2.0
Contenido • Procedimientos
preliminares • Fundamento – Titulo
• Métodos – Curvas patrón
¿Tipo de CHO´s?
Mezcla de CHO´s Métodos de separación
CHO simple
Acondicionamiento
Específicos (Generales)
Específicos (Caracterización)
Procedimientos NO Específicos
Químicos Reductométricos
Enzimáticos
Instrumentales Densitometria Refractometría Polarimetría Sacarimetría
Cromatografía Electroforesis
Azúcares Reductores Complejación DNS
Degradación FCB, Lane Eynon, Munson Walker, Somogyi-Nelson, LuffSchoorl
Antrona Fenol-sulfuro
Fehling
Determinación del titulo Sln glucosa [conocida] = Xg de glucosa en 1000ml Sln.
Titulación
Xg. G T=------------Titulo 1000
Xg -------------- 1000ml T -------------- G
Titulación
Sln Muestra [desconocida] = Yg en 1000ml Sln. G´ -------------- T 1000ml ------------- Y
1000. T Y=------------= g AR/L sln. G´
Lane-Eynon (AOAC Method 923.09,920.183b)
FCB Fehling-Causse-Bonnans modificado (AOAC 1965, p. 495).
En el método FCB se titula con el reactivo de Fehling caliente en dos etapas, primero se añade una cantidad de reactivo de Fehling tal que se lleve a cabo la total reducción y después se determina el punto final con azul de metileno por goteo, es necesario un control de la temperatura y se sugieren dos titulaciones. (Pomeranz y Meloan 2000)
Solución de glucosa o azúcar invertido 0,5% 1. Titulación
Deben gastarse alrededor de 5-6 ml de la solución patrón para decolorar 10 ml de reactivo de FCB . Si el volumen gastado cae fuera de estos valores hay que modificar la velocidad de adición hasta lograr el valor indicado. La velocidad de goteo encontrada como óptima será la empleada al valorar las soluciones problema
2. Titulación
Valoración de Sln. muestra Se titulan 10 ml de reactivo FCB según el procedimiento seguido en a) pero esta vez cargando la bureta con la solución de azúcares solubles obtenida a partir de la muestra (filtrado). El gasto de esta valoración debe estar
comprendido entre 3 y 8 ml, si no es así hay que modificar la concentración de la solución de azúcares. Nota 1: Es conveniente que el agregado de solución de azúcares (patrón y problema) se haga al principio a razón de 1 gota/segundo y después del agregado de azul de metileno, a 1 gota/3 segundos. Nota 2: Se debe tener sumo cuidado en la observación del punto final de la titulación, pues la coloración amarilla cambia rápidamente a parda.
Luff-Schoorl Azúcar reductor
Fenol-Ácido sulfúrico (4, 7-9, AOAC Method 44.1.30)
Ácido sulfúrico
Fenol Color amarrillo-naranja
Absorbance is measured at 490 nm
Lane- Eynon (AOAC Method 923.09,920.183b)
Munson-Walker (AOAC Method 906.03)
SomogyiNelson
Based on reduction of copper(lI} ions in alkaline solution to copper(I) ions that precipitate as the brick-red oxide CU20.
The precipitate of cuprous oxide can be determined gravimetrically (AOAC Method 31.039, 14th ed.), bv titration with sodium thiosulfate (AOAC Method 31.040, 14th ed.), by titration with potassium permanganate (AOAC Method 31.042, l"th ed.)
Is based on reduction of Cu2+ ions to Cu" ions by reducing sugars. The Cut ions then reduce an arsenomolybdate complex, which is prepared by reacting ammonium molybdate [(NHJ~~24] and sodium arsenate (Na2HAs07) in sulfuric acid. Reduction of the arsenomolybdate complex produces an intense, stable, blue color that is measured spectrophotometrically 520nm
Antrona-Acido Sulfúrico La reacción de Antrona constituye la base de un método conveniente para la determinación de hexosas,
aldopentosas y ácidos hexourónicos,.
Tomar 2 mL de muestra y agregar 2 mL de reactivo de antrona
Agitar y tapar el tubo firmemente
Colocar en baño de agua a ebullición durante 15 min
Colocar en baño de agua a temperatura ambiente para equilibrar la y dejar en la oscuridad
Medir la absorbancia a 620 nm después de 20-30 min.
La solución azul verdosa muestra una absorción máxima de 625 nm aunque algunos carbohidratos pueden mostrar otros colores.
DNS Ácido 3,5-dinitrosalicílico
color amarillo café
MÉTODO
FUNDAMENTO
Luff-schoorl
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Los azúcares reductores en presencia Se diluye la muestra, hasta que tenga de de una solución de cobre (II), se 15-60mg de azucares reductores se oxidan y el exceso de cobre (II) se clarifica y se filtra valorará por yodometría.
Musson y Walker
Gravimetrico. El oxido cuproso se Clarificar separa por filtración y se pesa.
la muestra con acetato de
plomo y el exceso se precipita con oxalato.
Antrona
Se determinan azucares totales. Las Se realizan diluciones de manera que se azucares forman un complejo azul obtenga una concentración de azucares verdoso que se observa a 625nm.
DNS
en el rango de 5-50ppm.
El ácido 3,5-dinitrosalicílico se reduce Se realizan diluciones de manera que se a ácido 3-amino-5-nitrosalicílico en obtenga una concentración de azucares presencia de azucares reductores
Somogyi-Nelson
en el rango de 200-1000ppm
Utiliza el tartrato de cobre alcalino y Secado, diluir la muestra clarificar y filtrar el yodato de potasio. El exceso de yodo se valorará por yodometría.
MÉTODO
CONDICIONES OPERATIVAS
CÁLCULOS
Luff-Schoorl Muestra de 12-25ml
ml gastados
25ml del reactivo de luff
= Vblanco -Vmuestra
En la tabla de luff se determina los mg de
almidón al 1% Na2S2O3 0.1N
azucares presentes.
KI al 30%m-v H 2SO4 25ml al 25%
Musson y Walker
Feling 50ml, muestra 50ml, Éter
En las tablas de musson y walker
Antrona 2,5ml de la muestra, 200mg de antrona, Realizar curva estándar y mediante esta 100ml de H 2SO4 96% solución estándar de determinar la concentración de azucares glucosa
DNS 1ml de DNS, 1ml de la muestra solución Realizar curva estándar y mediante esta estándar
de
glucosa diluida de
200- determinar la concentración de azucares
1000ppm
Somogyi-Nelson Tartatro de cobre, KIO3 almidón al 1%, Na2S2O3 0.1N
DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES EN MIEL POR EL MÉTODO DE ÁCIDO DINITROSALICÍLICO (DNS).
Preparación de la muestra Miel Se peso en un beaker 50 ml en una balanza analítica y se adiciono 0.5gr de miel, luego se adiciono 40 ml de agua destilada, se tomaron 20ml de solución y se depositaron en un matraz y se aforo hasta 250 ml con agua destilada.
Jugo Tampico •Medimos 0.96 ml y 1.44 ml de jugo Tampico y adicionamos cada muestra a un matraz aforándolas con agua destilada hasta 500 ml, para reducir la concentración hasta 400 ppm y 600ppm respectivamente. • De la solución diluida tomamos 20 ml y agregamos a cada muestra 5 ml de agente clarificante (acetato de plomo). Y posteriormente filtramos.
Datos DNS: Jugo Tampico Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
(400ppm)
(400ppm)
(400ppm) (600ppm)
Cantidad de jugo u tilizado (ml.)
0.96
0.96
0.96
1.44
1.44
1.44
Cantidad de acetato de plomo (ml.)
5
5
5
5
5
Adición de agua destilada (ml.)
8
8
8
8
1
1
1
5
5
0.171
0.169
Reactivo DNS utilizado (ml.) Tiempo de ebullición (min.) Absorbancia medida (nm.)
Muestra 4
Muestra Muestra Muestra 5 6 7 (600ppm) (600ppm) (400ppm)
Muestra 8
Muestra 9
(400ppm)
(400ppm)
0.96
0.96
0.96
x
5
x
x
x
x
8
8
8
8
8
8
1
1
1
1
1
1
1
5
5
5
5
5
5
5
5
0.172
0.261
0.260
0.260
0.191
0.189
0.189
0
Blanco
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Solución estándar: Disolver 1 gr. de glucosa anhidra en 1000 ml de agua destilada, luego se realizaron las diluciones. Tubo
ml. de s/n estándar
ml. de agua destilada
Concentración final (ppm)
Absorbancia (575 nm)
1
0.0
1.0
0
-
2
0.2
0.8
200
-
3
0.4
0.6
400
-
4
0.6
0.4
600
-
5
0.8
0.2
800
-
6
1.0
0.0
1000
-
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Cálculos: DNS: Jugo Tampico
Taller de estudio
