pH y amortiguadores: tampones fisiológicos pH and shocks: physiological buffers
Alison Vanesa Benavides Garzón, Steven Ospina García Universidad del Quindío, Facultad de Ciencias Básicas y Tecnologías, Programa de Química, Laboratorio de Bioquímica 20 de marzo de 2017 Docente-Investigador: Clara María Mejía Doria
Resumen
En el presente informe se dará a conocer las biomoléculas que se encuentran en la leche. Se realizarán pruebas bioquímicas como la de biuret, benedict, felhing, xantoproteica y Sudán III, cada prueba reconoce diferentes tipos de biomoléculas (proteínas, lípidos, carbohidratos), básicamente se puede observar la presencia de estas biomoleculas por el viraje de la coloración en las soluciones y para corroborar el resultado obtenido se desarrollarán unas pruebas de control.
Palabras clave: biomoleculas- pruebas bioquímicas- proteínaspr oteínas- lípidos – carbohidratos. carbohidratos.
Abstract
In this report it will be released the biomolecules that are found in milk. Is will be tests biochemical as it of biuret, benedict, felhing, xantoproteica and Sudan III, each test recognizes different types of biomolecules (proteins, lipids, carbohydrates), basically is can observe the presence of these biomolecules by the turn of the coloration in them solutions and to corroborate the result retrieved is will develop some tests of control. Key words: Biomolecules- Biochemical tests- proteins-lipids-carbohydrates
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Introducción
Los amortiguadores químicos o tampones fisiológicos (buffers), son disoluciones formadas por un ácido débil y la sal de este ácido con una base fuerte, donde la concentración de hidrogeniones varía al adicionar ácidos o bases fuertes. La utilidad de los tampones, está precisamente en la posibilidad de mantener la concentración de iones hidrogeno dentro de límites tan estrechos, por lo que se puede considerar como invariable. El alcance de este taponamiento en una solución dada es función de la concentración de H+ inicial y de las constantes de disociación y concentraciones de los tampones presentes. Cuanto más cercano sea su constante de disociación (kα) a la concentración de H +, en la cual el tampón tiene que actuar, más eficaz será el taponamiento, porque en esta circunstancia hay la misma concentración de la forma ácida del tampón que de la forma básica, por consecuente existe la máxima capacidad para amortiguar cambios de acidez en cualquiera de los dos sentidos. Ala ecuación de disociación de cualquier tampón se puede aplicar la ley de acción de masas: V1 Ácido
Base- + H+
V2 Donde V1= K 1 [Á] y V2= + . Por lo tanto tenemos que: K=
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Materiales y métodos
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Los materiales y los reactivos empleados en la práctica de laboratorio fueron suministrados por los almacenes de materiales y reactivos del Programa de Química de la Universidad del Quindío.
Metodología.
Se procedió a realizar la reacción de la leche y el ácido acético (3), donde se formó un precipitado (coagulación de la leche) el cual indicó la formación de la proteína. Posteriormente se filtró el precipitado obtenido, con el objetivo de recolectar el suero para realizar las pruebas bioquímicas, principalmente las correspondientes a la identificación de proteínas. Consecutivamente se lavó el precipitado (obtenido anteriormente), con éter, para así efectuar las pruebas realizadas anteriormente, con un enfoque en aquellas que identificaran lípidos y carbohidratos. Seguidamente se realizaron diferentes pruebas bioquímicas a proteínas, carbohidratos y lípidos para así confirmar la presencia de biomoléculas; esto como una prueba de control al procedimiento ejecutado con la leche. Resultados pruebas
Benedict
Fehling
Biuret
xantoproteica
Sudan III
I II III IV
Se descarto Se descarto Se descarto Se descarto
Positiva Negativa Negativa Negativa
Negativa Positiva Negativa Negativa
Negativo positiva positiva positiva
Negativa Negativa Positiva positiva
Tabla 1. Pruebas bioquímicas para el reconocimiento de biomoleculas presentes en la leche. prueba
Benedict
Fehling
Biuret
xantoproteica
Sudan III
Lactosa Caseína Fenilalanina Aceite vegetal Glucosa Agua sacarosa
Se descarto Se descarto Se descarto Se descarto
Positiva Negativa Negativa Negativa
Negativa Positiva Negativa Negativa
Negativa Negativa Positiva Negativa
Negativa Negativa Negativa Positiva
Se descarto Se descarto Se descarto
Positiva Negativa negativa
Negativa Negativa negativa
Negativa Negativa negativa
Negativa Negativa Negativa
Tabla 2. Pruebas bioquímicas de control
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Discusión de resultados
En la tabla 1 se puede observar las diferentes pruebas bioquímicas que se le efectuaron a la leche. En el tubo I que contenía el suero, dio prueba positiva para la reacción con el reactivo de fehling debido a que en el suero está presente la lactosa, la cual es un azúcar reductor; reacción que también debe dar positiva con el reactivo de Benedict (esta prueba se descartó, ya que el reactivo presentaba interferencias), pues estas dos pruebas son específicamente para identificar azucares reductores. Con el reactivo de fehling se observó inicialmente una coloración azul, que al someterla a calentamiento viro a un color rojo ladrillo, debido al oxido de cobre. El tubo II, el cual tenía el sólido, arrojó prueba positiva para Biuret, la cual se fundamenta en el reconocimiento de proteínas como la caseína, presente en el precipitado obtenido. Dicha reacción procede porque los iones cúpricos generan un complejo de coordinación con los pares de electrones no enlazantes del N, el cual se encuentra en los aminoácidos de las proteínas, esto se puede observar por una coloración purpura. Además se contempló un resultado positivo con la prueba de xantoproteica que se basa en el reconocimiento de proteínas con aminoácidos que tengan en su estructura grupos radicales fenilo, como es el caso de la caseína. El tubo III y IV que contenían el precipitado previamente lavado con éter, dieron positivos para sudan III, este colorante es específicamente para reconocer los lípidos, por su baja polaridad puesto que posee más afinidad con los lípidos que con el solvente empleado para la disolución. Se confirma una prueba positiva por la coloración roja de la solución. Asimismo como se registró en la tabla 1 la prueba de xantoproteica da efectiva para ambos tubos, porque a pesar de haber lavado el precipitado con éter, quedaron trazas de caseína. En la tabla 2 se registraron diferentes pruebas bioquímicas, con el fin de corroborar la identificación de biomoleculas como azúcares (lactosa, glucosa y sacarosa), proteínas (caseína, fenilalanina) y lípidos (aceite vegetal), confirmando así un resultado positivo experimentalmente para las pruebas realizadas en la tabla 1. La fenilalanina presentó interferencias; esta es una proteína con un radical fenilo por lo que debe dar positiva para la prueba de xantoproteica. La sacarosa como se puede observar en la tabla 2, da negativa para todas las pruebas realizadas, puesto que Benedict y fehling son para azucares reductores y la sacarosa es un azúcar no reductor. Conclusión
Se determinaron la biomoleculas presentes en la leche con ayuda de diversas pruebas bioquímicas como felhing, benedict, xantoproteica, sudan III y biuret, cada una de estas, para biomoleculas diferentes. Se elaboró un control, el cual permitió confirmar la presencia de carbohidratos, proteínas y lípidos que con apoyo de la literatura se verificó los diferentes grupos funcionales presentes en estas. 4
Referencias bibliográficas
1. José M. Macarullla, Félix M. Goñi. Biomoléculas: lecciones de bioquímica estructural. Pág. 1. Illustrated. Reverte, 1993 2. Experimentos de química orgánica. ELIZCOM S.A.S. Pág. 183 3. Nuria Bolaños V., Giselle Lutz C., Carlos H. Herrera R. Química de Alimentos: Manual de laboratorio. Pag 12. Editorial Universidad de Costa Rica, 2003. 4. Domingo Agustín Vázquez. Diccionario de ciencias. Pag 437. Editorial Complutense, 2000
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