AGROPECUARIA Y AGROINDUSTRIAL
Reconocimiento de carbohidratos
NOMBRE: Estephania Arancibia Nicole Gamboa Noami Papuzinski CARRERA: Tecnología en Análisis Químico ASIGNATURA: Bioquímica SECCION: 438 PROFESOR: Sebastián Rubat FECHA: 12/04/2018
Índice. Introducción……………………………………………………………………….……….Pág. 3 Objetivos e hipótesis…………………………………………………………….…….Pág. 4 Materiales y métodos………………………………………………………….………Pág. 5 Interpretación de resultados………………………………………………….……Pág. 6 Interpretación de resultados…………………………………………….…………Pág. 7
Interpretación de resultados……………………………………………..…….….Pág. 8 Discusión……………………………………………………………………………………..Pág. 9
Discusión Azúcares reductores……………………………….……….……….…Pág. 10 Discusión Hidrolisis de Sacarosa…………………………….…………….……..Pág. 11 Discusión Análisis de Almidón ………………………………………………..…….Pág.12 Bibliografía……………………………………………………………………………………Pág. 13
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Introducción Reconocimiento de sacáridos reductores. Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azúcares reductores. El poder reductor que pueden presentar los azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor. Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente básico como en nuestro caso el NaOH el ión Cu2+ formaría Cu (OH)2 insoluble por eso añadimos tartrato sódico potásico que actúa como estabilizador al formar un complejo con el Cu2+. (http://almez.pntic.mec.es/~mbam0000/paginas/LABORATORIOs/azucares.htm) Hidrólisis de sacarosa La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo que carece de poder reductor y la reacción con el reactivo de Fehling es negativa. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores. La prueba de que se ha verificado la hidrólisis se realiza con el reactivo de Fehling y, si el resultado es positivo, aparecerá una coloración roja. Si el resultado es negativo, la hidrólisis no se ha realizado correctamente y si en el resultado final aparece una coloración verde en el tubo de ensayo se debe a una hidrólisis parcial de la sacarosa. Es el resultado de una reacción química, se produce por la descomposición química de la sacarosa (azúcar común) e dos subproductos, (Glucosa y fructosa). De forma natural se encuentra en la naturaleza, por ejemplo, la miel o el sirope de savia de arce (Acer saccharum). Es el líquido o jarabe resultante del proceso de inversión del azúcar mediante la acción ácida o enzimática, o sea, con una solución de agua, azúcar y ácido cítrico se separan los dos componentes del azúcar, la fructosa y la glucosa. (BIOQUÍMICA. (2011 ). HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA. 2018, de blog Sitio web: http://bioquimicamarzo-ulio.blogspot.cl/2014/06/prueba-de-hidrolisis-de-la-sacarosa-1.html) Análisis de almidón La prueba de yodo es una reacción química usada para determinar la presencia o alteración de almidón u otros polisacáridos una solución de yodo- diyodo disuelto en una solución acuosa de yoduro de potasio que reacciona con almidón produciendo un color azul. La prueba de yodo se da como consecuencia de la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción entre el almidón y el yodo presente en el reactivo de lugol. La amilosa y la amilopectina son componentes del almidón, pero la amilosa es de estructura lineal, con enlaces α (1-4), que forma hélices en donde se juntan las moléculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces α (1 -4) (16), que forma hélices mucho más cortas y las moléculas de yodo son incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado o amarillo. (Reacciones de reconocimiento Azúcares Reductores, https://sites.google.com/site/trabajosbioquimicos/home/reacciones-de-reconocimiento-azucaresreductores)
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Objetivos
Reconocimiento de los monosacáridos, disacáridos y de los polisacáridos Desarrollar la prueba de hidrólisis de la sacarosa Conocer el adecuado procedimiento de la prueba de Lugol y la coloración que presenta la evidencia para el reconocimiento del almidón.
Hipótesis
La prueba del yodo nos permitirá identificar la presencia de almidón pues tomará un color azul, por otra parte, la prueba de Fehling nos permite identificar a los azúcares reductores y para saber si este es positivo, el color que tomará será rojo ladrillo. Los azucares reductores se identifican todos positivos con la solución de Fehling. En la hidrolisis de sacarosa esta dará negativamente al ser un disacárido sin poder reductor
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Materiales y Métodos. 1.- Procedimiento de azucares reductores. Se lavaron y ambientaron los distintos materiales de este practico. Se tomaron 5 tubos de ensayo se rotularon con los nombres de los siguientes azucares: tubo n°1: Glucosa, T2 maltosa, T3 lactosa, T4 fructosa, T5 sacarosa. A lo siguientes tubos nombrados se le agrego 3 ml con una pipeta graduada, de dichos azucares correspondientes a cada tubo de ensayo. Se le añadió a cada tubo 1ml de solución de Fehling A (que contiene CuSO4) y 1 ml de Fehling B (contiene NaOH para alcanzar el medio y permitir la reacción) con una pipeta de aforo de 1ml. Se dejaron los tubos de ensayo en una gradilla y luego se procedieron a calentarlos levemente sobre el mechero, tomando cada tubo con pinzas de madera por 2 min. Se observaron los cambios de color correspondientes de cada tubo. 2.- Hidrolisis de sacarosa. Se lavaron y ambientaron los materiales correspondientes. Se tomo 1 tubo de ensayo, se le agrego 3 ml de sacarosa con una pipeta graduada. Se agrego 1 ml de HCl diluido con pipeta aforada de 1ml. Se calentó en la llama del mechero con ayuda de las pinzas de madera durante 2 min. Se dejo enfriar, se neutralizo utilizando 3 ml de solución alcalina con una pipeta graduada, Se realizo la prueba de Fehling descrita anteriormente. Y se observo el cambio de color correspondiente. 3.- Análisis de almidón. Se lavaron y ambientaron los materiales correspondientes. Se tomo un vaso precipitado de 100ml y se le agrego 20 ml de almidón al 5% y 2 gotas de Lugol. Se coloco a calentar levemente sobre una gradilla, un trípode junto con el mechero. Se observaron los cambios de color correspondientes.
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Resultados 1.- Procedimiento de azucares reductores Tubo Ensayo
de Observaciones Cambio de color a Marrón Se observa que es reductor.
Imágenes
Glucosa
Maltosa
Cambio de color a marrón oscuro, se observa que si es reductor.
Lactosa
Cambio de color a marrón claro, se observa que si es reductor.
Cambio de color a naranjo se observa que si es reductor. Fructosa
No se observó cambio de color. Sacarosa
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2.- Hidrolisis de sacarosa. Tubo de ensayo.
Observaciones
Imágenes
Tubo de ensayo con Una vez agregado los reactivo de HCl, NaOH, reactivos quedo de color azul. Sacarosa, Fehling A y Fehling B.
Tubo de ensayo + reactivos + calor.
Se observa que al calentar levemente el tubo de ensayo este cambio de color a un marrón claro.
Tubo de ensayo luego de ser calentado.
Se observo que se hidroliza parcialmente la sacarosa obteniendo un color verde.
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3.- Análisis de almidón. Se observo que el almidón es de color incoloro y al agregar 2 gotas de Lugol esta solución quedo de color azul, ya que el Lugol le dio ese pigmento. Se observo que al calentar sobre el mechero este cambio de color a amarillo transparente.
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Discusión. Teóricamente nos dicen que todos los Monosacáridos (glucosa, fructosa, etc.) son azúcares reductores, ya que tienen un -OH hemiacetálico libre, por lo que dan positivo a la reacción con reactivo de Fehling, a la reacción con reactivo de Tollens, a la Reacción de Maillard y la Reacción de Benedict. En la solución de Fehlings dan positivos con un color rojo y negativo si queda azul, por lo tanto, los datos teóricos concuerdan con los experimentales donde el tubo que contenía la sacarosa (disacárido) fue el único que conservó el color azul, evidencia de que no hubo reacción química. En este segundo experimento la sacarosa al ser un disacárido sin poder reductor y al dar negativo a la solución de Fehling, se le agrega HCl (calentando la solución) la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que así son reductores (Produciendo el color rojo del primer experimento) Lo que se explica en teórico se verifica totalmente con el experimento de hidrolisis de sucarosa. El almidón es un componente muy difícil de separa por lo tanto se necesita uno o más factores para poder hidrolizarlo como: la temperatura a baño maría, calentarlo levemente en la llama del mechero y la utilizan con de los ácidos que van ocasionando una ruptura o también pueden ayudar a que sea más rápido el proceso Por lo tanto podemos decir que una muestra expuesta a mayor temperatura durante un intervalo de tiempo es mas eficaz en realizar la hidrolisis.
Resultados Hipótesis Los resultados al comparar con la hipótesis nos percatamos que en la prueba de Fehling de los 5 azucares utilizados solo 1 dio negativo y fue la sacarosa. Al someter a hidrolizar con HCl el azúcar sacarosa esta da positivo. Los resultados de la hidrolisis fueron positivo al agregar HCL Y NaOH. En conclusión, en la hipótesis no estuvimos en lo correcto ya que con ayuda de ácidos se puede hidrolizar más eficaz.
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1.- Azúcares reductores. Un azúcar reductor es un término químico para un azúcar que actúa como agente reductor y puede donar electrones a otra molécula, un azúcar reductor es un tipo de carbohidrato o azúcar natural que contiene un grupo aldehído o cetona libre, los azucares reductores pueden reaccionar con otras partes de la comida, como por ejemplo los aminoácidos, para cambiar el color o el sabor de esta. Con respecto al practico, un primer momento al haber echado el reactivo de Fehling y Fehling b al tubo de ensayo estos mostraban una coloración azulina pero luego de echar el monosacárido y al calentar en la llama del mechero estos toman una coloración rojiza en el fondo del recipiente demostrando que la sal cúprica se redujo a una sal cuprosa en este caso el óxido cuproso, volviéndose a regenerar el tartrato de sodio, formándose el gluconato de sodio y el hidróxido de sodio. La sacarosa no obtuvo estos resultados ya que esta tiene dos componentes glucosa y fructosa. La reacción más general es: Cupritartatro de sodio + CH2OH(CHOH)NCHO + H2O -à CH2OH(CHOH)NCOONa + 4COONa(CHOH)nCOONa + Cu2O + 3NaOH
‘’ el oxígeno del grupo carbonilo puede reaccionar con un grupo alcohol en una r eacción ‘’
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2.- Hidrolisis de sacarosa. Aplicando esta prueba pudimos conocer los componentes y características de esta, afirmando que es efectiva en presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se descompone en los monosacáridos que la forman, que sí son reductores. Mediante la prueba de Fehling, cuya solución presento el viraje de coloración que indica la presencia de azúcares reductores; con lo que pudimos comprobar satisfactoriamente el fundamento de la prueba.
En la hidrólisis de la sacarosa nos dio positiva a la reacción de Fehling debido que al hidrolizarse la sacarosa separa en glucosa y fructosa, la cual esta prueba dio positivo en la sacarosa hidrolizada.
3.- Análisis de almidón. El vaso precipitado que contiene almidón al agregar dos gotas de yodo (Lugol) nos dio una coloración azul negruzco esto se debe a que en esta reacción el yodo entra a la estructura helicoidal del almidón, es decir, que los átomos de yodo se introducen entre las espirales provocando la absorción o fijación de yodo en las moléculas del almidón (amilosa).
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La reacción del almidón con el yodo no es una verdadera reacción química sino una reacción física que a su vez se forma un compuesto de inclusión que altera las propiedades físicas de esta molécula, indicándonos una coloración azul negro. Este complejo que se forma es sensible a la temperatura, ya que, si se calienta el tubo, el color desaparece esto se debe a que en las espiras del almidón se produce una modificación y el yodo se libera. Cuando el tubo está en una temperatura baja las espiras se reorganizan y se vuelve a ver el color azul negro y al unirse dentro de estas cadenas provoca un efecto de color de los enlaces en el rango del espectro de la luz de tonos naranjas, que reflejados a nuestros ojos lo percibimos como color azul - negro, este resultado también se debe a la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo presente en la solución de un reactivo llamado Lugol.
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Bibliografía Online: (BIOQUÍMICA. (2011 ). HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA. 2018, de blog Sitio web: http://bioquimicamarzo-julio.blogspot.cl/2014/06/prueba-de-hidrolisis-de-la-sacarosa1.html)
(Reacciones de reconocimiento Azúcares Reductores, https://sites.google.com/site/trabajosbioquimicos/home/reacciones-de-reconocimientoazucares-reductores) ALDO MORALES . ( 2005). (Reacciones de reconocimiento Azúcares Reductores, https://sites.google.com/site/trabajosbioquimicos/home/reacciones-de-reconocimientoazucares-reductores). Peru. PDF Recuperado de http://www.fsalazar.bizland.com/pdf/POLISACARIDOS.pdf
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