“Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático” UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS INFORME 04
“Reconocimiento de Carbohidratos” CURSO
:
Bioquímica ALUMNA
:
Cañola Cañola, Alinsson Fiorella CICLO
:
PROFESORA
:
Julia Mercedes Ticona Michilot FECHA DE ENTREGA
:
30 de octubre de 2014
Introducción Los carbohidratos son una gran cantidad de azucares, almidones, celulosa, gomas que contienen carbono, hidrógeno y oxigeno en cantidades similares. La principal función de los carbohidratos es suministrar energía al cuerpo; especialmente al cerebro y al sistema nervioso. En cuanto a nuestra carrera es muy importante el reconocimiento de los carbohidratos para saber en qué cantidades se encuentra en cada alimento y también para innovar nuevos productos a partir de ellos. En los últimos años, ha habido grandes avances en lo que respecta a la comprensión de cómo influyen los carbohidratos en la nutrición y la salud humana. El progreso en las investigaciones científicas ha puesto en relieve las diversas funciones que tienen los carbohidratos en el cuerpo y su importancia para gozar de una buena salud. De hecho, las noticias son tan buenas, que merece la pena estudiarlos con más detenimiento. (1)
Un carbohidrato que no puede ser hidrolizado en uno más simple es llamado monosacárido. Los monosacáridos más comunes son la glucosa, la fructosa, la galactosa y la manosa. Un carbohidrato que puede ser hidrolizado en dos moléculas de monosacáridos es llamado disacárido. Los más importantes son la lactosa (presente en la leche), la sacarosa (presente en el azúcar común) y la maltosa. Por su parte, aquellos carbohidratos que pueden ser hidrolizados en varias moléculas de monosacáridos son llamados polisacáridos. Los más comunes son el almidón y la celulosa, este último es componente estructural de las plantas. (2).
Ensayo de Molisch; Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en el que los polisacáridos y disacáridos se hidrolizan con ácido sulfúrico concentrado hasta monosacáridos y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con α-naftol formando un color púrpura violeta. (3)
Ensayo de Barfoed; Esta prueba permite diferenciar entre monosacáridos y disacáridos reductores, también contiene ion cúprico que se reduce
hasta óxido cuproso más rápidamente con los monosacáridos que con los disacáridos. (3).
Ensayo de Seliwanoff; Este ensayo es específico para cetosas y se basa en la conversión de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensación con resorcinol formando así complejos coloreados. (3). Los objetivos de la práctica fueron reconocer carbohidratos utilizando tres pruebas; prueba de Molisch, prueba de Selivanoff y prueba de Barfoed, en las diferentes soluciones preparadas.
2. MATERIAL Y METODOS PROCEDIMIENTO 01: Reacción de Molish 1. Se tomaron 3 tubos de ensayo a los que se les añadió lo siguiente: TUBO I: 2 ml de sol. de glucosa al 1% TUBO II: 2 ml de sol. de sacarosa al 1% TUBO III: 2 ml de sol. de caramelo al 1% 2. Se agregó 2 ml de sol. Alcohólica de alfa naftol al 5 % a cada tubo. 3. Se agregó por las paredes del tubo.
Tubos De Prueba Componentes Sol. de glucosa al 1 %
I
II
2 ml.
Sol. De sacarosa al 1 %
2 ml.
Sol. De caramelo al 1 % Sol. Alcohólica de alfa naftol al 5 % (gotas)
III
2 ml. 4
4
4
4. Se dejó en reposo 5 minutos, para poder ver si la reacción es positiva o negativa
PROCEDIMIENTO 02: Reconocimiento de fructosa 1. Se tomaron 3 tubos de ensayo a los que se les añadió lo siguiente: TUBO I: 0.5 ml de sol. de yacón al 1% TUBO II: 0.5 ml de sol. de miel de abeja al 0.1% TUBO I: 0.5 ml de almidón al 1% 2. Se agregó 2 ml de reactivo de Selivanott a cada tubo.
Tubos De Prueba Componentes Sol. de yacón al 1%
I
II
III
0.5 ml.
Sol. Miel de abeja
0.5 ml.
0.01% Sol. de Almidón
0.5 ml.
Reactivo de Selivanott
2 ml.
2 ml.
2 ml.
3. Luego de preparar los tubos con las soluciones mezclar bien y someter a la acción del calor en baño maría hirviendo por 2min.
ROCEDIMIENTO 03: Prueba de Barcoed 1. Se tomaron 3 tubos de ensayo a los que se les añadió lo siguiente:
TUBO I: 0.5ml de sol. de miel de abeja al 1% TUBO II: 0.5 ml de sol. de fructosa al 1% TUBO III: 0.5 ml de sol. de sacarosa al 1% 2. Se agregó 2 ml de reactivo de Barfred a cada tubo Tubos De Prueba Componentes
I
II
III
Sol. de miel de abeja al 0.5 ml. 1% Sol. De fructosa al 1 %
0.5 ml.
Sol. De sacarosa al 1
0.5
%
ml.
Reactivo de BARFOED
2.0 ml. 2.0 ml.
2.0 ml.
3. Se procedió a mezclar, someter a la acción del calor en baño maría por 5 min. Se controló el tiempo en que aparecen las reacciones positivas. (precipitado rojo – naranja), en los diferentes tubos.
3. RESULTADOS Tabla 01. Observaciones de la reacción de Molish. TUBO
01
02
03
CONTENIDO
OBSERVACIONES Dio reacción positiva. En esta solución se Solución de glucosa necesitó del mayor volumen de gasto para al 1%. lograr el vire y aparición del anillo violeta, dado que este demoró en aparecer. Dio reacción positiva. Si bien es cierto se Solución de sacarosa formó el anillo violáceo, esta muestra al 1%. presentó la tinción de violeta más clara que las demás. Dio reacción positiva, la formación del Solución de anillo violeta fue mucho más rápida y la caramelo al 1%. coloración mucho más intensa.
Sacarosa
Glucosa
Caramelo
Tabla 02. Observaciones de la reacción de Selivanott. TUBO 01
02
03
CONTENIDO Solución de Yacón al 1%
OBSERVACIONES Dio reacción positiva pero en un color rojizo mucho más claro Dio reacción positiva. El vire de color se Solución de miel de dio al minuto de iniciada la reacción. Es abeja al 1%. un color rojizo obscuro Dio reacción negativa. Se agregaron Solución de almidón al gotas de lugol para determinar estado 1%. de solución.
Yacón
Miel
Almidón
Tabla 03. Observaciones de la prueba de Barcoed. TUBO 01
02
03
CONTENIDO
OBSERVACIONES Dio reacción positiva. Esta muestra Solución de miel de formó el precipitado celeste pero muy abeja al 1%. lentamente. Dio reacción positiva. Esta muestra Solución de fructosa al formó el precipitado color celeste, este 1%. apareció mucho más rápido Solución de sacarosa al Dio reacción positiva. Se formó el 1%. precipitado celeste pero más lenta.
Fructuosa
Sacarosa
Miel
4. DISCUCIÓN Prueba de Molisch; es el ácido sulfúrico concentrado que hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan luego con alfa-naftol sulfonato originando un complejo púrpura. Esta reacción es general para los hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico concentrado. (3). Este ensayo permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una muestra; se basa en la acción hidrolizante y deshidratante que ejerce el ácido sulfúrico sobre estos compuestos. Como se sabe, los ácidos concentrados originan una deshidratación de los azúcares para rendir furfurales, que son derivados aldehídicos del furano. Los furfurales se condensan con los fenoles para dar productos coloreados característicos, empleados frecuentemente en el análisis colorimétrico. Éste fue el procedimiento utilizado para el reconocimiento de carbohidratos en las soluciones de glucosa, sacarosa, caramelo y avena, y en cada solución mencionada dio como resultado una coloración diferente en intensidad. Esto debido a que cuando se hidrolizan los carbohidratos formas los compuestos llamados furfurales que al reaccionar con el alfanaftol, si es que hay presencia de azucares torna un color violeta, es por ello que en la práctica las intensidades de éste color es diferente por la cantidad de azúcares. La solución de glucosa dio incoloro como resultado de la reacción, indicando que ésta ya no se disocia en azúcares más simples ya que éste como sabemos es por sí un monosacárido. En la solución de sacarosa dio como resultado un color violeta claro, ya que éste es un disacárido y se ha hidrolizado en dos azúcares simples. En la solución de caramelo, si bien se esperaba que fuera la que tuviera mayor velocidad de reacción no fue así, fue tornando el color violeta intenso después de un tiempo pequeño, pero si fue el color violeta oscuro indicando la presencia de grandes cantidades de azúcares simples que se disociaron. Y finalmente en la solución de avena la reacción fue más rápida indicándonos la presencia de gran cantidad de carbohidratos, que se disociaron en monosacáridos formando éste color violeta también intenso.
Prueba de Seliwanoff las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados de furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un calentamiento prolongado de la muestra que se está estudiando. (4). Esta prueba es utilizada para el reconocimiento de fructosa, se basa en azúcares que pueden hidrolizarse, la reacción es positiva cuando las soluciones luego de tenerlas por un tiempo en baño María presentan colores amarillos, anaranjados rojizos. La fructosa es una cetosa se hidroliza en sacarosa mas inulina, esto hace que la reacción positiva manifieste un cambio de color y ebullición que manifiesta que es positiva para la presencia de fructosa. En la solución de yacón se tuvo como resultado ebullición y cambio a color tamarindo, lo que evidenció la presencia de fructosa en la solución. En la solución de miel de abeja, presentó cambio a color naranja rojizo, es decir también hay presencia de fructosa en menor cantidad que en el yacón. Finalmente la solución de almidón no presentó cambio de color, lo que nos muestra que no hay presencia de fructosa, ya que el almidón es un polisacárido; al no presentar cambios se le denomina neutro.
La Prueba de Barfoed es un ensayo químico utilizado para detectar monosacáridos. Se basa en la reducción de cobre (II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de óxido), el cual forma un precipitado color rojo ladrillo. (4). Este ensayo se emplea para diferenciar a los mono de los disacáridos. Estos últimos reaccionan más lentamente con el acetato cúprico, debido probablemente al tamaño molecular, aunque también pueden estar implicados otros factores tales como una interacción más compleja con los dos anillos monosacáridos. En la solución de miel de abeja se observó que después de tres minutos se formó el precipitado color ladrillo, manifestando la presencia de monosacáridos. En la solución de fructosa también se presentó el precipitado color ladrillo a los tres minutos de reaccionar, ya que ésta por sí es un monosacárido. Mientras en la solución de sacarosa no se presentó ningún precipitado, lo que indica que es negativa debido a que es un disacárido. Los carbohidratos se hidrolizan en azúcares más simples, y una vez sucedido esto reaccionan con el alfa- naftol, previamente formando un complejo furfural, es lo que a sucedido en las reacciones anteriores y que se a manifestado con los cambios de color en cada tubo de ensayo y también con las formaciones de precipitado en la última prueba realizada.
5. CONCLUSIÓN Se reconoció los carbohidratos en diversas soluciones preparadas en el laboratorio. Utilizando la prueba de Molisch se determinó la presencia de carbohidratos; con la prueba de Seliwanoff se determinó la presencia de fructosa (cetosa); y con la prueba de Barfoed se diferenció la presencia de monosacáridos de los disacáridos mediante la formación de precipitados.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (1) (2)
Freifelder. 1991 técnicas de bioquímica y biología molecular. Reverte. Biblioteca. Angulo Ugalde. 1999. Bioquímica Manual de Laboratorio. Universidad de Costa Rica.
(3) Switzer, R. y L. Garrity. 1999. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in fundamental methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York (4)
Watson, 1998. Biología molecular. 3ed. Edit. Omega biblioteca
