“Año de ! D"#e$%"&'!'"() D" #e$%"&'!'"() P$od*'+"#! , de Fo$+!e'"-"e)+o de ! Ed*'!'"() UNI VERSI DAD NACI ONALDELSANTA FACULTAD DE I NGENI ERÍ A
INFORME DE LABORATORIO Nº 01
FOTOCOLORIMETRÍA CURSO: Bioquímica. DOCENTE:
Blga.
Carmen
Yzásiga
Barrera.
CICLO: III. GRUPO: B. INTEGRANTES: 1. 2.
Anastacio Juárez Jorge Luis. Huincho Aquiño Sonia Marisol. 3. ásquez illacorta !ell" So#ía.
2015 FOTOCOLORIMETRÍA
I.
INTRODUCCIÓN Las técnicas colorimétricas se basan en la medida de la absorción de radiación en la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que deseamos determinar no posee color por sí misma; en tal caso, es preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando
reactivos
que
den
lugar
a
sustancias
coloreadas con la muestra que interesa estudiar. La colorimetría y fotocolorimetría no son en realidad técnicas distintas y la diferencia estriba en el tipo de instrumental empleado, de forma que se denomina colorímetro a aquellos aparatos en los que la longitud de onda con la que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros ópticos; en los fotocolorímetros o espectrofotómetros la longitud de onda se selecciona mediante dispositivos monocromadores. !uede definirse la espectrofotometría de absorción, como la medida de la atenuación que el material a estudiar "muestra# efect$a sobre una radiación incidente sobre el mismo con un espectro definido. En general, las medidas se realizan dentro del espectro comprendido entre %%& y '&& nm, y este espectro, a su vez, puede dividirse en dos amplias zonas( la zona de la radiación visible, situada por encima de )'& nm, y la zona de la radiación *ltravioleta situada por debajo de estos )'& nm. La región del infrarrojo se sit$a por encima de los '&& nm. +sí es como cada sustancia
coloreada
absorber
luz
a
determinada
longitud de onda, y la intensidad de la luz debe variar de acuerdo a la concentración de la sustancia en la solución, el color que se observa, como luz invisible es el producto o resultado de la luz transmitida. La longitud de onda es una medida de la energía que se necesita, para $
la
transmisión,
su
intensidad
depender,
de
la
probabilidad de que la transición se produzca, cuando interaccione el sistema electrónico y la radiación, y también del estado e-citado.
II.
MATERIALES Y MÉTODOS II.1 E*/!01 //.2.2 Espectrofotómetro
II.2 3+4E5/+LE1 6 5E+74/801 //.%.2 //.%.% //.%.) //.%. //.%.< //.%.= //.%.>
1ulfato de cobre 2&9 :icromato de potasio &,29 !ermanganato de potasio &,&29 +gua destilada !ipetas de 22&ml 4ubos de ensayo 5ejillas
II.3 !507E:/3/E?40 1e prepararon las soluciones de acuerdo a un esquema
presentado
ms
adelante
en
los
resultados. @ue un total de ocAo tubos de ensayo utilizados para cada reactivo, en seis estaban las soluciones preparadas, en uno se encontraba el blanco, y en el otro, la muestra estndar. 7uando las soluciones estaban listas, las llevamos al espectrofotómetro
para
la
lectura
de
sus
absorbancias a una longitud de onda adecuada. Luego de ello, calculamos las concentraciones de las soluciones por la fórmula de la dilución, y construimos las curvas de calibración; después Aallamos los @actores de 7alibración.
%
III.
RESULTADOS
&
'
(
)
*
IV.
DISCUSIÓN En el artículo Curvas De Calibración En Los Métodos Analíticos AecAo por 3aría :osal y 3arcos 8illanueva, dice que( 7abe mencionar que en la prctica es muy importante efectuar la medida del BblancoC. 1e llaman disoluciones blanco o disoluciones
que
simplemente
contienen
todos
blancos los
a
reactivos
las y
disolventes usados en el anlisis, pero sin el analito. Los blancos miden la respuesta del procedimiento analítico a las impurezas o especies interferentes que e-istan en los reactivos o, simplemente, a las especiales características del instrumento de medida. En la prctica realizada, nuestro blanco fue el agua destilada, y al medirla en el espectrofotómetro,
nos
dimos
cuenta
de
que
su
absorbancia es cero, porque no tiene ninguna partícula en suspensión, y en base a eso, pudimos seguir leyendo las absorbancias de las soluciones. 1eg$n el artículo Introducción a la Espectroscopía de Absorción Molecular Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano( !ara verificar el cumplimiento de la ley de Deer, se debe realizar la curva de calibración; absorbancia "+# en función de concentración "c#, para lo cual se preparan soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida. 1i es vlida la ley de Deer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a diversos factores. En la prctica,
al
momento
de construir las
curvas de
calibración para los tres reactivos analizados( sulfato de cobre, dicromato de potasio y permanganato de potasio, +
se pudieron observar las desviaciones debidas, seg$n nuestro parecer, a una incorrecta preparación de las soluciones, al momento de pipetear. +l momento de comparar las absorbancias de cada reactivo, se determinó que la mayor de ellas le pertenecía al estndar, por ser el de mayor concentración. +unque no Aubo un aumento continuo de las absorbancias a medida que aumentaba la concentración.
,
V.
CONCLUSIONES V.1 1e obtuvo el espectro de absorción de una sustancia. 1e midieron las muestras a longitudes de onda distintas. El sulfato de cobre se midió a una longitud de onda de =&&nm, mientras que el dicromato de potasio se midió a <&&nm y el permanganato de potasio a >
V.2 1e preparó una curva de calibración para una sustancia coloreada. En esta prctica utilizamos tres reactivos( sulfato de cobre 2&9, dicromato de potasio &,29 y permanganato de potasio &,&29. En los resultados se graficaron sus respectivas curvas de calibración, en las cuales se observaron algunos errores, debido a una incorrecta preparación de las soluciones.
V.3 1e determinó la concentración de una muestra problema mediante factor de calibración y curva de calibración.
En
la
prctica,
se
determinó
la
concentración de una muestra problema ploteando su lectura en el grfico y en el punto de intersección se trazó una perpendicular al eje de las abscisas donde se leyó su concentración.
V.4 1e determinó que el reactivo cuya absorbancia era la mayor, fue el estndar, ya que estuvo mayor concentrado con respecto a las dems soluciones. :e esa manera se comprobó que mientras ms concentrada sea una solución,
mayor ser la
absorbancia. + pesar de Aaber tenido algunas desviaciones en la curva de calibración.
$-
$$
VI.
RECOMENDACIONES •
Es necesario utilizar siempre un guardapolvo para el laboratorio; ya que este proteger nuestra ropa y nuestra piel del contacto con reactivos.
•
4ener mucAo cuidado al momento de realizar el pipeteo, y ms cuando se usa sustancias peligrosas, ser guiados por la docente a cargo de la prctica.
•
?unca debemos de llevarnos las manos a la cara, los ojos, la boca, etc. mientras se est trabajando en el laboratorio; así se evitaran posibles daos.
•
?o mezclar las pipetas usadas con una sustancia a otra, pues mucAas veces, nuestros resultados pueden variar o salir erróneos; sin embargo en esta prctica tuvimos pipetas para cada sustancia que el laboratorio nos otorgó.
•
:ebemos de tener mucAo cuidado con los equipos de laboratorio, ya que cualquier dao causado es el grupo de prctica quien se Aace cargo de los gastos. Es
necesario
que
aprendamos
a
usarlos
adecuadamente con la ayuda de nuestra docente, siguiendo paso a paso las instrucciones dadas. •
?uestros
laboratorios
deberían
de
estar
bien
implementados, con los equipos necesarios para realizar nuestros trabajos; así como también los docentes, ingenieros y biólogos lo necesitan. 7abe mencionar que esta prctica de fotocolorimetría tuvimos que realizarla en el laboratorio de Diología en +cuicultura debido a que el laboratorio de 7iencias no cuenta con el equipo necesario.
%$ •
+l terminar cualquier e-perimento o trabajo todos los instrumentos utilizados deben quedar limpios y en el lugar destinados para ellos.
$&
VII.
REFERENCIAS VII.1 +lbert, 5. y @. :aniela. 2F'F. @isicoquímica, %G 5eimpresión. 7ontinental 1.+. de 78. 3é-ico, 2F>&.
VII.2 +yres, H. 2F>&. +nlisis uímico 7uantitativo. %G edición. Iarla. 3é-ico.
VII.3 Iorna, E. La célula. 3ódulo / de Dioquímica. 7Aimbote. *niversidad ?acional del 1anta. 2F''.
VII.4 Iarris :aniel 7. +nlisis uímico 7uantitativo. %G edición. Editorial 5everte, Espaa. %&&2.
VII.5 7arlos Drunatti y +na 3aría 3artín. %&&<. /ntroducción
a
la
Espectroscopía
de
+bsorción
3olecular *ltravioleta, 8isible e /nfrarrojo 7ercano. Espaa.
VII.6 1Joog +. :, Ioller K @, ?ieman 4. +. !rincipios de +nlisis instrumental.
IillM
/nteramericana
de
Espaa,
+ravaca
"3adrid#, %&&2.
VII.7 3aría +ntonia :osal y 3arcos 8illanueva. %&&'. 7urvas :e 7alibración En Los 3étodos +nalíticos. 3é-ico.
$'
VIII.
CUESTIONARIO 8.1¿Cu! "#$$% &u$ $% $! '()*+* '% $,-")* -#- */)$0$# !- "*0"$0)#-"0 +$ u0- 'u$%)##*/!$'- $! #"* * $! -0-!)"* ¿*# &u( El método ms e-acto y usado frecuentemente es el método grfico. Este método consiste en preparar soluciones estndar de diferente concentración y construir un grfico en un sistema de coordenadas. 1e construye la curva de calibración, que se emplea para medir la concentración de una sustancia, su uso es necesario en los trabajos cuantitativos para calcular la concentración del absorbente.
8.2¿9u( -")*#$% -!)$#-0 !- !$: +$ LAM;ER Y ;EER La ley de DeerLambert sólo se cumple para concentraciones
bajas,
a
partir
de
una
concentración &,&23 empieza a Aaber desviaciones de la linealidad. +dems, si la radiación utilizada no es monocromtica, también puede Aaber errores. La e-istencia de otros equilibrios químicos en disolución, como cidobase, de precipitación, de formación de complejos, aunque no modifican la ley en
sí
misma,
concentración
sí de
que la
pueden
sustancia
modificar que
la
estamos
midiendo, y puede producir un error en el resultado.
8.3¿E! "*!*# &u$ $,</$ u0- %u%)-0"- $%) +$)$#'0-+- *# !- !u= &u$ )#-0%')$ * &u$ -/%*#/$ El color que e-Aibe una sustancia est determinada por la luz que transmite mas no por la luz que absorbe. !or ejemplo, la clorofila, el pigmento que Aace que las Aojas sean verdes, absorbe la luz en el $(
espectro violeta y azul y también en el rojo, pero puesto que transmite y refleja la luz verde, su aspecto es verde.
8.4A 0 +$ #*/-# !- >-!+$= +$ !- !$: +$ ;EER $0 !- +$)$#'0-"0 +$ !- >)-'0- A %$ #$-#-#*0 %*!u"*0$% +$ "*0"$0)#-"0 "*0*"+- : %$ )#-)-#*0 *# u0 #*"$+'$0)* 0*#'-!=-+* "*0 )#"!*#u#* +$ -0)'*0* $0 "!*#**#'* -##*+u"# u0- "*!*#-"0 -=u!. E! *#"$0)-?$ +$ )#-0%'%0 +$ !- !u= 0"+$0)$ !)#-+- -#- "-+"*0"$0)#-"0 $,#$%-+- $0 @
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