Aislamiento e identificación de microorganismos de interés
Introducción •
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En la naturaleza, se puede encontrar que exis xisten ten dive diverrsos sos micr microo oorrganis anismo moss ocup ocupan ando do un mismo nicho. En 1 g de suelo suelo se encuent encuentrran 1x 109 bacterias Para estudiar un microorganismo en el laboratorio se requiere tener un cultivo puro (axénico). Es decir, una población de microorganismos iguales.
Aislamiento •
Objetivo: obtener un cultivo puro de un microorganismo a partir de un “cultivo mixto”
Aislamiento Técnica aséptica: técnica usada para evitar la contaminación durante la manipulación de cultivos y de medios de cultivos a. El ansa se calienta hasta la incandescencia y se enfría al aire, cerca del mechero b. El tubo se destapa cerca del mechero c. Se flamea el extremo del tubo por la llama d. Se extrae la muestra con el ansa esterilizada e. Tras tomar la muestra, se vuelve a flamear el extremo del tubo y la muestra se deposita en un medio estéril f. Se vuelve a tapar el tubo. El ansa se recalienta de nuevo antes de finalizar su utilización
Métodos de aislamiento •
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Directos‐ siembra por estrías, inclusión o extensión Indirectos‐ por enriquecimiento previo
Métodos de aislamiento Siembra Es la incorporación a un medio de cultivo de una muestra (inóculo), con propósitos cuantitativos o cualitativos Siembra en placa: Por estría Por inclusión Por extensión
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Siembra en tubos: Con agar inclinado Con medio sólido horizontal Con medio semisólido Con medio líquido • • • •
Métodos de aislamiento Siembra por estría: Se inocula la muestra sobre un extremo de la placa con un ansa y se extiende formando estrías sobre la superficie en varios sentidos, cada célula aislada se multiplicará formando una colonia independiente, cada colonia representa un cultivo puro.
Métodos de aislamiento Siembra por Inclusión
Métodos de aislamiento Por extensión Se extiende el inóculo uniformemente con una varilla acodada estéril por la superficie del medio de cultivo. Las células diseminadas sobre la superficie formarán colonias aisladas.
Métodos de aislamiento Siembra en tubos
Métodos de aislamiento Enriquecimiento •
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Permite aislar microorganismos que se encuentran en bajo número en una muestra compleja (ejemplo: suelo o agua) Los métodos de siembra pueden combinarse con el uso de medios selectivos o diferenciales para enriquecer y aislar microorganismos poco frecuentes. Por ejemplo: bacterias oxidantes del amonio, nitrito. Bactérias verdes o púrpuras del S
Métodos de aislamiento Repiques Objetivo: hacer crecer el microorganismo en un medio de cultivo dado para conocer su metabolismo, su producción de pigmentos o simplemente conservarlo •
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Transferencia de cultivos microbianos de medio sólido a sólido, de medio sólido a medio líquido, de medio líquido a líquido y de medio líquido a medio sólido
Colonias aisladas •
Pueden ser de forma y tamaño variable dependiendo del organismo, las condiciones de cultivo, suministro de nutrientes y otros parámetros fisiológicos.
¿Se puede aislar a cualquier microorganismo?
Identificación Las características que determinan la morfología microbiana son: tamaño, forma, estructura y forma de agrupación. Sin embargo, la mayoría de las células microbianas son difíciles de observar, aún con el auxilio de la microscopia, principalmente por su falta de contraste con el medio que las rodea. La tinción de las células es la manera más sencilla para contrastar.
Uso de colorantes El uso de colorantes es una práctica común para determinar la morfología, algunos orgánelos, o bien para distinguir diferentes tipos de células La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad especifica por los componentes celulares, es decir los colorantes ácidos se combinan con los materiales básicos y viceversa
Tinciones para la identificación de microorganismos Tinción de gram: Se utiliza para identificar bacterias y levaduras Divide en Gram + y‐ Levaduras se tiñen como Gram+ por las características de su pared celular. Gram+= azul o morado Gram‐=rosa o rojo •
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Tinciones para la identificación de microorganismos Tinción de Ziehl‐Neelsen Microorganismos designados como ac.alcohol resistentes. Esta resistencia esta determinada por la composición de la pared celular. Bacterias ac‐alcohol resistentes= rojo Bacterias no resistentes= azul •
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Tinciones para la identificación de microorganismos Tincion de Schaeffer y Fulton Espora bacteriana. Es una estructura altamente deshidratada y rígida que es formada por algunos géneros bacterianos Celulas vegetativas se tiñen de rojo La espora permanece verde •
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Tinciones para la identificación de microorganismos Tincion negativa de tinta china Permite identificar capsulas bacterianas y micóticas. •
Las partículas de carbón suspendidas en la tinta china en rápido movimiento rebotan con la estructura capsular sin llegar a tocar la célula lo que permite apreciar un efecto de halo alrededor del organismos. •
Tinciones para la identificación de microorganismos Tinción Negativa de Maneval Modificado Permite observar las capsulas como halos incoloros, el espacio intercelular de un color oscuro y las células de color rojo Bacteria con capsula: Klebsiella, Pasteurella, Bacillus, Escherichia y Haemophilus Levadura: Cryptococcus •
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Tinciones para la identificación de microorganismos Tincion de lactofenol azul de algodón Método utilizado para la realización de preparaciones de hongos filamentosos. •
Fenol sirve de fungicida Glicerina permite tener una preparación semipermanente El azul de algodón tiñe el exterior de la pared de los hongos El ac alcohol láctico actúa como agente aclararte
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Hongos filamentosos: Aspergillux, Microsporum, Mucor, Penicilium, Alternaria •
Morfología bacteriana
