AISLAMIENTO SELECTIVO Y DIFERENCIAL DIFERENCIAL DE MICROORGANISMOS MICROORGANISMOS Ángela Álvarez Coral; diego Jiménez
Universidad De Nariño - Facultad De Ciencias Exactas Y Naturales
[email protected],,
[email protected] [email protected] INTRODUCCION El estudio de las características que permiten identificar los microorganismos requiere tenerlos en cultivo puro; eso significa aislar la bacteria que interesa, separándola de los otros organismos que podrían coexistir en una muestra. Esta podría ser una tarea prácticamente imposible si se utiliza un medio Rico, por ejemplo el agar sangre, que permite el crecimiento de un gran número de especies bacterianas. Sin embargo el aislamiento de determinada especie se facilita al aplicar los conocimientos de nutrición microbiana, y emplear un medio de cultivo que favorezca el crecimiento del microorganismo deseado e inhiba a los otros. Este tipo de medio se denomina S electivo, pues selecciona a determinados microorganismos. (1) Actualmente, Actualmente, la identificación identificación bacteriana se realiza por medio de métodos convencionales, basados en las características fenotípicas, puesto que su realización y coste los hace más asequibles. Los métodos genotípicos suelen reservarse para las bacterias que no se pueden identificar con métodos convencionales. Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en las características observables de las bacterias, como su morfología, desarrollo, y propiedades bioquímicas y metabólicas. El cultivo, cuando es factible, continua siendo el método diagnóstico de elección; permite el
aislamiento del microorganismo implicado, su identificación, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la aplicación de marcadores epidemiológicos. En el cultivo es esencial la correcta elección del medio de crecimiento y las condiciones de incubación. En el proceso de identificación bacteriana tradicional, la experiencia del microbiólogo es fundamental para la elección de una prueba o una batería de pruebas de forma secuencial, en función de la fiabilidad de las mismas, del género o de la especie bacteriana que se pretende identificar, del origen del aislado bacteriano, así como del coste de las mismas. Los laboratorios deben elaborar y realizar un proceso de identificación normalizado en su actividad diaria, que utilice de forma secuencial o simultánea un conjunto de pruebas cuyo propósito final sea la identificación del microorganismo a nivel de género y especie y que incluya la mayoría de las bacterias desde el punto de vista infeccioso.
Objetivos. - realizar las técnicas adecuadas para la selección de bacterias Gram positivas. identificar mediante pruebas bioquímicas los organismos Gram positivos y Gram negativos.
- determinar el genero y la especie, para bacterias Gram negativas a partir de una cepa problema.
MATERIALES Y MÉTODOS Para bacterias Gram positivas. - prueba de la catalasa. utilizo cepas de Staphylococcus aureus y de Streptococcus sp; a una muestra de estas colonias se le agregó una gota de agua oxigenada y se observaron las reacciones que dio a lugar. Se
- Identificación por tinción de Gram Se tomo una muestra de Staphylococcus aureus y Klebsiella y se procedió a realizar tinción de Gram: 1. Se realizo un extendido de la muestra sobre el portaobjetos 2. Se secó la muestra, utilizando un mechero. 3. Se fijo la muestra con metanol, durante 1 minuto 4. Se agregó cristal violeta y se espero durante 1 minuto para que se fijara. 5. Se procedió a enjuagar con abundante agua destilada. 6. Se agregó lugol y se dejó reposar por 1 minuto 7. Nuevamente se enjuagó con abundante agua. 8. Se agregó alcohol acetona y se esperó durante 30 segundos. 9. Se enjuagó con agua 10. Se utilizó tinción de contraste agregando fucsina y se dejo reposar durante 1 minuto. Se procedió a observar en el microscopio en objetivo de 100x y utilizando aceite de inmersión. Cabe destacar que a partir de esta prueba se escogió las muestras que resultaron Gram negativos, para realizar las
pruebas bioquímicas Gram negativas.
para
bacterias
Para bacterias Gram negativas. Cepas bacterianas: se utilizo cepas de Klebsiella; también se dispuso de medios de cultivo, para realizar la correspondiente siembra. 1. Agar TSI: se realizó una siembra, tomando la muestra problema de una colonia de bacterias, con el asa recta previamente esterilizada, se destapó el tubo, se flameo la boca de este y se hizo una punción central hasta el fondo del tubo y seguidamente se sacó el asa deslizándola por la superficie en zig-zag. 2. AGAR CITRATO DE SIMMONS: se realizó una siembra con asa recta, previamente esterilizada, se destapó el tubo se flameo la boca de este y se hizo la siembra solamente en la superficie deslizándola suavemente en zigzag. 3. AGAR UREA: se realizó una siembra con asa recta, previamente esterilizada, se destapó el tubo se flameo la boca de este y se hizo la siembra solamente en superficie, igual que el anterior procedimiento. 4. AGAR SIM: se realizó una siembra con asa recta, previamente esterilizada, con la cual se tomo la muestra del cultivo de bacterias, se flameo la boca del tubo; el medio quedó inoculado cuando se introdujo el asa en profundidad hasta el fondo del tubo, retirándola posteriormente por la misma trayectoria utilizada anteriormente.
5. CALDOS MR-VP: se realizó una siembra con asa en argolla, previamente esterilizada, se destapó el tubo se flameo la boca de este y se hizo la siembra.
Resultados y discusión.
Una vez que se realizo la tinción, se estableció la presencia de cocos Gram positivos pertenecientes a staphylococcus y bacilos Gram negativos pertenecientes a la muestra problema asignado.
Para bacterias Gram positivas. - Prueba de la catalasa: la reacción que dio a lugar una vez que se le aplicó una gota de agua oxigenada fue el desprendimiento de burbujas, La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.
En la imagen se muestra cocos Gram positivos teñidos de color purpura. A continuación se muestran los resultados para tinción con bacilos Gram negativos, teñidos de color rosa.
Algunas pruebas para la catalasa que resultan tanto positivas como negativas son las siguientes: Catalasa Positivo:(Staphylococ cus) Coagulasa Tolerancia a la sal
Catalasa Negativo: ( Streptococcus) Bilis esculina CAMP
Sensibilidad al SXT - identificación por tinción de Gram.
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglicano (también conocido como mureína) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a
que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violeta.
Para bacterias Gram negativas. A continuación se muestra una foto indicando como eran los medios de cultivo en un principio y como cambiaron estos cuando se realizaron las siembras.
De izquierda a de recha encontramos: caldo MR-VP, TSI, SIM, UREA y CITRATO SIMMONS. 1. Agar TSI: El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de entero bacterias según:
-Fermenten o no glucosa. -Fermenten o no lactosa o sacarosa. -Produzcan o no ácido sulfhídrico. -Produzcan o no gas.
En nuestro caso correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son: - Bacteria problema fermentó la glucosa, acidificó el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que en la superficie presentó un color rojo, esto indica que en la superficie no se presento fermentación. Se utiliza los valores de K (alcalinidad) y A (acidez) para su clasificación, dándonos como resultado un K/A
En los resultados obtenidos se observa un cambio de coloración; de color verde cambia a un color azul rey. El indicador de PH es el AZUL DE BROMOTIMOL el cual en presencia de alcalinidad vira al color azul indicando que la prueba es POSITIVA. Cuando no hay cambio de color ni crecimiento se dice que la prueba es negativa. 3. AGAR UREA: Es un medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.
-La bacteria produjo ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presenta un ennegrecimiento del tubo, como se puede observar en la mancha negra de la imagen.
2. AGAR CITRATO DE SIMMONS: este medio Sirve para determinar si un microorganismo puede crecer utilizando citrato como única fuente de carbono debido a la síntesis de la enzima citrato permeasa la cual permite la introducción del citrato al interior de la célula, una vez dentro, el citrato es incorporado al ciclo de los ácidos tricarboxilicos o ciclo de Krebs.
En el Medio de Cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los Nutrientes Para El Desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico, y el rojo de fenol es el Indicador de pH. ALGUNAS bacterias hidrolizan la urea Por Medio de la enzima
ureasa liberando amoníaco y Dióxido de Carbono. Estos Productos alcalinizan El Medio Haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo; para nuestros resultados dio positivo. En este medio, la fermentación de la glucosa activa la enzima ureasa, Acelerando la velocidad del metabolismo en Aquellos Organismos que hidrolizan Lentamente la urea. 4. AGAR SIM: Es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. Antes de realizarse la prueba del indol se observo la movilidad, el cual no presento ya que, no hubo desplazamiento de la colonia en el lugar en donde se inoculo.
alrededor de la punción de siembra, aunque también existen aquellas cepas productoras de acido sulfhídrico que se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2. Por tanto en estos resultados se llega a la conclusión de que es positiva para el indol y dudosa para el H2S
5. CALDOS MR-VP: En el caldo MRVP se determina por qué vía metabólica fermenta la glucosa la bacteria. En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). M.R: tubo con rojo de metilo A este tubo se le agregó 10 gotas de rojo de metilo, y al instante se observo la aparición de un color rojo
Prueba de indol: El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteína, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehído del reactivo de Kovac´s o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo, como en el que se ve en la imagen. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen
Esta coloración se debe a que La bacteria puede fermentar la glucosa por la VIA ACIDA MIXTA con producción de metabolitos como ácido láctico, fórmico y succínico, los cuales van a hacer
descender el pH inicial del medio de 6.9 a 4.2, lo cual se visualiza al agregar el indicador de pH ROJO DE METILO, el cual a pH ácido vira a un color rojo.
V.P: Tubo con alfa naftol. A este tubo se le agrego 5 gotas de alfa naftol al 5%, observándose una coloración amarilla en la parte superior del medio. Esto indica una prueba negativa.
Gram negativas, de tal manera que se logro dilucidar de cierta manera su genero y su especie - es necesario ser riguroso, en la identificación mediante las pruebas bioquímicas, ya que una mala interpretación de resultados, nos llevara a dilucidar erróneamente una especie de bacteria. - la tinción de Gram es de gran ayuda para diferenciar entre bacterias Gram + y Gram – - la diversidad de medios de cultivos nos permiten acercar a la clasificación de una bacteria con una alta fiabilidad en el resultado.
La bacteria puede fermentar la glucosa por la VIA BUTILENGLICOLICA con producción de productos neutros como el ACETIL METIL CARBINOL (ACETOINA), el 2,3 BUTILENGLICOL y el DIACETIL. El producto final más frecuente es el 2,3 BUTILENGLICOL, que es fácilmente oxidado a acetil metil carbinol y luego a di-acetil. Una vez obtenidos todos los resultados se prosiguió a hacer un análisis en la tabla anexa en las guías para identificar el género y la especie a la cual correspondía la muestra problema; esta corresponde a Klebsiella Arizona de todas las 9 pruebas bioquímicas realizadas 7 correspondían a esta especie; esto dándonos un 80% de fiabilidad en las pruebas.
Conclusiones. -
mediante diferentes pruebas bioquímicas, se logro identificar bacterias
- Las bacterias Gram positivas son los principales agente para la degradación de materia orgánica en el suelo y solamente unas pocas son patógenas. Las bacterias con bajo contenido en CG son importantes en la industria alimenticia por su importancia en la elaboración de productos de gran demanda comercial.
Cuestionario. 1. Que bacterias Gram Positivas provocan con mayor frecuencia intoxicaciones alimentarias?
Clostridium botulinum. El botulismo es una intoxicación alimentaria poco frecuente pero de consecuencias graves. Esta causada por la ingestión de toxinas botulínica (NTBo), uno de los tóxicos naturales mas potentes, formada previamente en el alimento. El brote de botulismo se ha asociado al consumo de conservas caseras, hay alimentos causantes de botulismo como la carne cruda, pescado con una leve conservación.
También sean descrito el botulismo infantil a la consumo de miel, en el cuál la multiplicación del germen y la producción de toxina se produce en el intestino. Las especies del genero Clostridium son anaeróbicas, son productoras de esporas termo resistentes. Se encuentran ampliamente distribuías en la naturaleza y normalmente pueden ser halladas en la tierra, vegetación, agua dulce y sedimentos marinos y en las heces de animales. Por todo ello, su alimentación y control se consigue por medio de tratamientos térmicos a altas temperaturas y mediante la formulación de los productos, añadiendo ácidos o reduciendo el agua disponible.
-Clostridium perfringens. Es el germen esporulado que produce enterotoxinas en la luz intestinal. Los brotes se han asociado a comidas ricas en proteínas como la carne y las aves, preparadas en grandes cantidades con antelación. Es ubicuitario en el medio y por tanto pueden encontrarse en la mayor parte delos alimentos crudos, incluidos los vegetales y productos cárnicos. A temperaturas elevadas como 50º pueden crecer con facilidad. Este microbio se multiplica con facilidad en el alimento y produce sus toxinas, una vez consumido, durante la formación de esporas en el intestino, produce diarreas y náuseas, pero no es fatal. Los controles necesarios pasan por un tratamiento térmico eficaz, un enfriado rápido, separación de los productos terminados y de las materias primas, y almacenamiento frigorífico de la carne previa al consumo.
cereus. Es una causa -Bacillus importante de enfermedades de transmisión alimentaria en las personas.
Los brotes de intoxicación son carnes y vegetales estofados, cremas, sopas y brotes vegetales crudos, especialmente el arroz hervido o frito y la pasta. Producen dos tipos de toxinas, una emética de rápida acción que provoca vómitos y una toxina que produce diarreas. La primera es muy termo estable sobrevive al cocinado y la segunda se inactiva fácilmente por el calor. Este microorganismo es común en el suelo, vegetales y leche cruda. - Staphylococcus aureus. Es un agente bacteriano causante frecuente de brotes de toxinfecciones alimentarías en muchos países. Los brotes están causados por la ingestión de alimentos que contienen las enterotoxinas estafilocócicas termoestables y se asocian a productos cárnicos, productos con huevo, pasteles, cremas, bollería rellena, bocadillos y en general a productos sometidos a varias manipulaciones que después se han mantenido relativamente a altas temperaturas. A diferencia de otras bacterias Grampositivas, su fuente principal es humana, a partir de la piel, nariz, garganta, cortes y heridas de los manipuladores; Por lo tanto si la manipulación y prácticas de higiene son deficientes, pueden transmitirse fácilmente a los alimentos. - Listeria monocytogenes. Es un agente bacteriano que puede causar una enfermedad transmitida por los alimentos, la listeriosis, enfermedad relativamente poco notificada pero grave, con tasas de letalidad altas en personas inmunodeprimidos. La listeriosis en mujeres embarazadas tiene como complicación habitual la aparición de abortos espontáneos. La importancia de los alimentos como vía primaria de transmisión de la Listeria
monocytogenes a las persona no fue conocida hasta la década de los ochenta. Los alimentos mas implicados son brotes y casos esporádicos de listeriosis son le grupo de comida preparada, los productos lácteos, en especial los quesos de pasta blanda, los pates y los productos de la pesca crudos o ahumados en frio, la carne de pollo y los embutidos cocidos y crudos curados. Se encuentra ampliamente distribuida en el suelo, vegetales y heces animales, siendo por lo tanto un contaminante habitual en las materias primas. Capaz de multiplicarse en ambientes refrigeraos y húmedos. Son necesarios controles, durante la producción encaminada a evitar la contaminaciones de los productos elaborados durante la manipulación y el envasado. 2. Que bacterias Gram positivas presentan Endosporas y cual es la importancia en la industria alimentaria.
- Clostridium Carecen de sistema citocrómico y de los mecanismos de fosforilación por transporte de electrones y viven en zona anóxicas. Son fermentadores. Algunos pueden producir ácido butírico como producto final; otros acetona y butanol. Pueden fijar nitrógeno en el suelo por anaerobiosis. Otro grupo puede fermentar la celulosa y producir ácidos y alcohol. El grupo que fermenta aminoácidos por si mismo puede degradar: la alanina, cisteína, glutamato, glicina, histidina, cerina o treonina , obteniéndose acetato, butirato, CO2 y H2.. 3.
Bacterias Gram positivas
Bacterias móviles (con
Bacterias no móviles
forma de bacilo)
(con forma de coco)
-Bacterias Gram Positivas esporuladas a este grupo pertenecen los siguientes Bacillus Clostridium, géneros: Sporosarcina, Heliobacterium
-Bacillus
- Bacillus Crecen bien en medios definidos utilizando una variedad de fuentes de carbono. Pueden producir enzimas extracelulares como las hidrolasas, que rompen polisacáridos complejos. Muchos producen antibióticos como: la bacitricina, polimixina, tirocidina, gramicidina y circulina. Algunas especies de Bacillus: B. popilliae, y B. thuringiensis producen toxinas larvicidas de insectos; el B. popilliae causa una enfermedad fatal en las larvas de Sccarabeidae; el B. thuringiensis produce enfermedades mortales para las larvas del gusano de seda, dípteros (moscas y mosquitos)
- listeria
-Clostridium
-staphylococcus -Streptococcus
-corynebacterium -lactobacillus
4. Cuál es la prueba básica que nos permite diferenciar los bacilos Gram Negativos fermentadores de lactosa de los que no lo son? - La prueba básica que nos permite diferenciar bacilos fermentadores de lactosa de los que no es la prueba para TSI, ya que: Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según:
Fermenten o no glucosa, fermenten o no lactosa o sacarosa, produzcan o no ácido sulfhídrico, produzcan o no gas. 5. Consulte los géneros y especies Gram negativos más importantes en la industria alimentaria y en salud pública. - Bacterias Entéricas Gram Negativas
Salmonella Salmonella es una bacteria patógena para el hombre y muchos animales y produce una en edad de origen alimentario conocida como salmonelosis, que se presenta en forma esporádica y en forma de brotes. Salmonella es la causa más común de ETA (enfermedad transmitida por alimentos) en diversos países, en Cuba es el primer agente causal de brotes de origen alimentario. El género Salmonella es uno de los más extensamente estudiados entre los patógenos que pueden ser aislados de los alimentos. El primer brote de salmonelosis se describió en Alemania en 1888, entre 50 personas que habían ingerido carne cruda molida proveniente de una vaca moribunda. Los integrantes de este género son bacilos gramnegativos no esporulados oxidasa negativa, pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. La mayoría no fermentan la lactosa y son móviles, son aerobios o anaerobios facultativos, contienen endotoxinas, generalmente son termolábiles resisten la congelación y algunos agentes químicos poseen una rica composición antigénica que se emplea como base para la identificación de sus miembros en serotipos, más recientemente designados como serovares.
Shigella Es uno de los microorganismos patógenos que con mayor frecuencia causa infecciones intestinales en los niños. Son comunes los brotes en condiciones de hacinamiento y en caso de deficiencia de la higiene personal y se distingue por poseer una dosis infectiva baja con respecto a otros patógenos. Los integrantes de este género poseen una manifiesta adaptación al hombre y algunas bibliografías refieren que también a los primates superiores, por lo que se considera el hombre su reservorio principal; producen una enfermedad de origen alimentario conocida como shigelosis; la especie Shigella dysenteriae produce generalmente la enfermedad más grave que es la típica disentería bacilar. Estas bacterias pertenecen a la familia de las Enterobacteriaceae, son bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos que fermentan la glucosa sin producción de gas (anaerogénicos), excepto algunos biotipos de S. flexneri . Reaccionan negativamente a las pruebas de ureasa, gelatinasa, Voges Proskauer, H2S, fenilalanina deaminasa, lisina descarboxilasa, citrato en medio de Simmon, cianuro y utilización del malonato. El género comprende cuatro especies, todas patógenas al hombre: Grupo A: Shigella dysenteriae. Grupo B: Shigella flexneri. Grupo C: Shigella boydii. Grupo D: Shigella sonnei 5. Escherichia coli
patógenas
Escherichia coli forma parte importante de la microbiota intestinal del hombre y de los animales de sangre caliente, sin embargo algunas cepas han desarrollado capacidad para provocar enfermedad en
el hombre, como son las infecciones gastrointestinales. Estas cepas patógenas representan la principal causa de diarrea infantil en el mundo. La capacidad de Escherichia coli patógena para producir enfermedad está determinada por factores de virulencia que le permiten infectar a sus huéspedes y sobreponerse a los mecanismos de defensa, como la producción de adhesinas, enterotoxinas, citotoxinas y otras proteínas que le permiten sobrevivir en condiciones ambientales adversas. Actualmente se reconocen seis grupos de Escherichia coli patógenas que dan lugar a diversos padecimientos. Entre estos existen diferencias clínicas y epidemiológicas, así como en la estructura antigénica y mecanismos de patogenicidad de los diferentes grupos. Cepas patógenas de Escherichia coli: -Enteropatógena (ECEP). -Enterotoxigénica (ECET). -Enteroinvasiva (ECEI). -Enterohemorrágica (ECEH). -Enteroadherente (ECEA). -Enteroagregativa (ECEG).
Escherichia
coli , "la" bacteria tipo,
habitante normal del intestino humano, es utilizada como indicador de contaminación fecal de aguas y alimentos. 6. Para la identificación temprana de la E. coli que pruebas se realizan (no es necesario hacer toda la batería). - Al momento de tener una muestra en
donde se desee identificar la presencia de E. coli hay que definir que medios de cultivo son selectivos para enterobacterias. Los medios selectivos
son muy utilizados cuando se trabaja con muestras que provienen de áreas que poseen una flora abundante. Los medios selectivos incorporan sustancias inhibidoras de la propagación de un grupo bacteriano que no sea de interés pero en cambio permite el crecimiento de otros grupos. Para microorganismos entéricos, los medios usados de modo habitual contienen ciertos colorantes e ingredientes que inhiben los organismos Gram positivos y permite la propagación de los bacilos entéricos Gram negativos. Otra tipos de medio que es una gran herramienta a la hora de la identificación de microorganismos entéricos como la E. coli son los medios diferenciales que poseen componentes químicos e indicadores que permiten identificar con cierta facilidad algunos géneros o especies bacterianas por el aspecto característico que toman sus colonias. El medio más utilizado para reconocer las colonias de E. coli es el agar-eosinaazul de metileno (EAM), que contiene peptona, lactosa y los colorantes eosina y azul de metileno. En dicho medio se inhibe el crecimiento de otras bacterias, pero no el de las coliformes (éstas desarrollan colonias típicas). E. coli: colonias grandes, oscuras, negro-azuladas, centro casi negro, con brillo metálico verdoso causado por la luz reflejada. -Seguidamente las pruebas bioquímicas son la forma más convincente del diagnóstico de las enfermedades infecciosas, mediante este proceso se determinan el género y las especies bacterianas de interés. Cada tipo bacteriano tiene un cuadro de reacciones específicas donde se comprueba el resultado de las reacciones y son la base
de la identificación de los diferentes agentes bacterianos. En general para la identificación de enterobacterias se sugiere realizar las siguientes pruebas: Agar TSI, prueba de orto-nitrofenil- β – galactopiranosidico (ONPG), prueba de movilidad, prueba de gelatinasa, prueba de rojo de metilo, prueba de medio MRVP. Prueba de fenilalanina desaminasa, producción de descarboxilasas y de hidrolasas de aminoácidos, prueba de ureasa, producción de indol, entre otros. 7. Qué enterobacterias se utilizan como indicadores de calidad del agua, por qué?
Bibliografía.
Rodriguez E. Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio, UNAM 2004 Alarcon R. Olivas E. Manual de practicas de microbiología básica y – microbiología de alimentos programa de nutrición, Universidad autónoma de Juárez https://www.seimc.org/contenidos/docu mentoscientificos/procedimientosmicrob iologia/seimcprocedimientomicrobiologia37.pdf Manual práctico de microbiología Carlos Gamazo Ignacio López-Goñi Ramón Díaz, Elsevier España, 2005 http://microbitos.files.wordpress.com/ 2010/06/atlasmicrobiologia1.pdf
-El examen rutinario del agua para detectar patógenos intestinales puede ser difícil, sino es que hasta imposible, es mucho mas fácil demostrar la presencia de bacterias intestinales no patógenas como lo son E. coli y el Sstreptococcus faecalis. Estos organismos siempre están presentes en los intestinos y normalmente no se encuentran presentes ni en el suelo ni en el agua; por lo tanto su presencia indica contaminación fecal. Todas las pruebas bacteriológicas cualitativas del agua están basadas en la identificación de indicadores de drenaje como lo son estos dos organismos. Una serie de pruebas son utilizadas para demostrar la presencia de coliformes o indicadores de drenaje en las fuentes de agua potable. Un coliforme es una bacteria anaerobia facultativa, bacilo Gram negativo, fermentador de lactosa con producción de gas, y que no produce esporas. E coli y Enterobacter aerogenes entran dentro de esta categoría. La determinación de coliformes se basa en tres tipos diferentes de pruebas: presuntiva, confirmativa y complementaria.
