SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
JOSE DANIEL PINTO RUIZ código: 1650914 PAULA ANDREA ROA VELANDIA código: 1651129 PAULA ANDREA BECERRA PACHON código: 1651130 ANGEL JEAN CARLOS TOLOZA SANCHEZ código: 1651131
UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE CUCUTA 2017 [1]
INTRODUCCION
Para estudiar las características de los microorganismos (forma, estructura, tamaño, consistencia, y otros), es necesario sembrarlos y cultivarlos en medios de cultivos apropiados según el tipo de microorganismo, de tal forma que proporcione los nutrientes necesarios para su crecimiento y desarrollo. La mayoría de las bacterias son de rápida multiplicación y agotan los nutrientes de los medios de cultivos en forma acelerada. Las mismas una vez sembrada en los medios de cultivos (que pueden ser liquidas o solidos) deben incubarse a una temperatura óptima de crecimiento y al abrigo de la luz. En esta práctica se realizaron siembras de cultivos bacterianos en cajas de Petri y en tubos, utilizando los diferentes métodos explicados en la guía.
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OBJETIVOS
Conocer los métodos adecuados de siembra y aislamiento de microorganismos ya sea en cajas de Petri o en tubos de agar o medios de cultivo líquidos.
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MARCO TEORICO
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
Que se efectúen asépticamente Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados Que se realicen solo los manipuleos indispensables Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.
Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos del microorganismo a estudiar. Medios sólidos:
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios. Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos. Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos. Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.
Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener colonias aisladas. Técnica A: Consiste en cargar el asa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el asa, se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin quemar el asa, se estría el resto de la superficie sin sembrar. [4]
Técnica B: Con el asa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el asa, se hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el asa y se repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.
Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.
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El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera: En profundidad con asa de punta: se pica con el asa el cultivo a o sembrar y se introduce mediante punción en el medio contenido en la parte inferior del tubo.
o
En superficie con asa de aro: se pica con el asa el cultivo a sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.
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MATERIALES
- Asa redonda y asa recta - Mechero - 4 medios de cultivo en tubo - 1 agar con un cultivo de hongos - 4 agar estériles PROCEDIMIENTO
Marque cada uno de los medios de cultivo y realice los siguientes repiques: a. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a la caja de agar macConkey estéril, realizando una siembra por agotamiento.
b. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a un tubo realizando una siembra de estría.
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c. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a un tubo realizando una siembra en picadura.
d. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a un tubo realizando una siembra en medio líquido en tubo.
Incube todos los cultivos durante 24 – 48 horas a 37° C. Coordine con el asistente del laboratorio y realice la visualización de cada medio tomando apuntes al respecto.
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CUESTIONARIO
1. ¿Qué es un cultivo puro y que es un cultivo mixto? Respuesta: Se denomina cultivo puro (o axénico) al que contiene sólo un tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la misma composición genética. Los cultivos puros son esenciales para poder estudiar las características de los microorganismos y para poder identificarlos con seguridad. Un cultivo mixto es realizado cuando dos o más especies de microorganismos, se desarrollan en su conjunto en un solo medio. Es común este tipo en la naturaleza. 2. ¿Qué ocurrió con el agar antes de hacer la inoculación y como se tornó este después de cumplido el periodo de incubación? Respuesta: Antes de hacer la inoculación no se presentaban microorganismos en el medio de cultivo. Ya después de haberlos sembrado e incubado se notó el desarrollo y multiplicación del microorganismo. Antes – Geotrichum
Después – Geotrichum
3. ¿Cómo se comportaron las bacterias en el caso de los tubos de agar? Respuesta: Solo se pudieron observar ciertas características de la bacteria en los tubos, en el tubo que contenía citrato Simons se observó el cambio de color especifico, en el tubo SIM solo fue posible observar la motilidad, en [10]
el tubo que contenía TSI se fermentó sacarosa o lactosa y el ultimo tubo, LIA, contenía lisina descarboxilada. 4. ¿Qué errores siente usted que cometió su grupo o usted en el momento de hacer los procedimientos? ¿Qué puede hacer para corregirlos? Respuesta: Principalmente, a la hora de sembrar en cajas de Petri y tubos, se presentaron rupturas del medio de cultivo debido a la alta presión de las asas hacia el medio. Para corregir este error se debe tener cuidado en la presión ejercida a la hora de sembrar.
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DISCUSION
Una vez realizado el montaje de cada uno de los microorganismos facilitados en el laboratorio de microbiología, se logró observar los cambios presentados después de la incubación, y así identificar su crecimiento. Durante la siembra se cometieron los errores de hacer demasiada presión a la hora de hacer los métodos y esto daño un poco el medio, pero no fue impedimento para que se desarrollaran y multiplicaran cuando se estaban encubando. Para las siembras en cajas de Petri, nos entregaron la bacteria E. coli y el hongo Geotrichum. La E. coli se sembró en 4 cajas de Petri con agares Manitol, EMB, Nutritivo y Mac Conkey, de los cuales se observó notablemente su crecimiento en los agar Mac Conkey, Manitol y nutritivo. El hongo se sembró en medio rosa bengala y creció notablemente. Para las siembras en tubos, nos entregaron la bacteria Arizona, la cual se sembró en 4 tubos con Citrato Simons, SIM, TSI y LIA. El Citrato Simons se sembró en estría y se notó el cambio de verde a azul. En SIM solo se pudo observar claramente su motilidad. En el TSI se observó amarillo en la parte de arriba, lo que indica que se fermentó sacarosa o lactosa, no se observó gas ni presencia de H2S. Para último tubo, LIA, se notó el color purpura, así que solo contiene Lisina descarboxilada.
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CONCLUSIONES
Se logró conocer los métodos adecuados de siembra y aislamiento de microorganismos. Se sembraron microorganismos en cajas de Petri y en tubos de agar.
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REFERENCIAS
Tomado de web. https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologi a/practicoIII.pdf http://meplunesr.blogspot.com.co/2011/05/universidad-nacionalexperimental-simon.html http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf https://es.slideshare.net/guest70b2d6/microbiologia http://www.medioscultivo.com/lysine-iron-agar-lia/
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