Aislamiento de Microorganismos Amilolíticos y Celulolíticos

ALUMNOS: ALU MNOS: Fernandez Fuenetes, Kevin Gómez Chunga, Frank Lopez Simón, José Luis Muñoz Mendoza,Jessica Lizbeth PROFESOR: TURNO:

17160302 17160127 17160119 17160318

Mg. Sanchez Rojas, Tito L. TURNO 2, 8:00-10:00 PM

Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Ingeniería Geológica, Minera, Metalúrgica y Geográfica Escuela Profesional Profesional de Ingeniería Ingeniería Ambiental Ambiental

Tabla de contenido

Contenido INTRODUCCIÓN _____________________________________________________________________ 1 OBJETIVOS _________________________________________________________________________ 1 FUNDAMENTO TEÓRICO _____________________________________________________________ 2 MICROORGANISMOS PROTEOLÍTICOS ________________________________________________ 5 GRAM NEGATIV NEGATIVAS AS __________________________________________________________________ 7 GRAM POSITIVAS ___________________________________________________________________ 8 DETALLES EXPERIMENTALES _______________________________________________________ 10 CÁLCULOS Y RESULTADOS _________________________________________________________ 14 DISCUSIÓN ________________________________________________________________________ 16 CONCLUSIONES ____________________________________________________________________ 19 RECOMENDACIONES _______________________________________________________________ 19 BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA _______________________________________________________ 20

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“¿Tiene algo muy importante que

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS

INTRODUCCIÓN

decir a los lectores?

Esta práctica ha sido realizada con la finalidad de reconocer los microorganismos

Destáquelo con una

lipoliticos y proteoliticos en las muestra de efluentes marino y en queso. Para llevar a

barra lateral.”

cabo la práctica usaremos los diferentes métodos tanto de siembra como de coloracion o tincion, para que luego las muestras obtenidas se analizadas en el microscopio. Habran limitaciones, ya que no se cuenta con microscopios electronicos, pues estos facilitarian el reconocimiento de los microorganismos que estamos buscando.

OBJETIVOS GENERAL: 

Cultivo, aislamiento y selección de bacterias con capacidad de producir proteasas y lipasas extracelulares para su posterior observación y estudios de sus halos.

ESPECÍFICOS: 

Cultivo, aislamiento y selección de bacterias proteasas extracelulares usando como medio de cultivo el Agar Calcio- caseína para la muestra de queso.



Adiestrar al estudiante para reconocer la actividad lipolítica y proteolítica.

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Fundamento Teórico LIPÓLISIS Es la descomposición de los lípidos e implica la hidrólisis de triglicéridos en glicerol y ácidos grasos libres. Este proceso es llevado a cabo gracias a las enzimas presentes en los organismos llamadas lipasas.

LIPASAS Las lipasas son enzimas con actividad biológica sobre el enlace éster de las moléculas de triacilglicerol presentes en las grasas o en los aceites. Cuando actúan en medio acuoso pueden producir glicerol, ácidos grasos, monoglicéridos y diglicéridos, mientras que en ausencia de agua, la reacción es reversible (esterificación, interesterificación, y transesterificación), generando de ésta manera glicéridos. Las reacciones mediadas por estas hidrolasas se dan entre la interface agua y el compuesto lipídico insoluble donde la enzima está disuelta. Las lipasas son proteínas ubicuas distribuidas ampliamente en la naturaleza, presentes en los animales, en las plantas y en los microorganismos, éstos últimos (bacterias y hongos), generalmente, las secretan al medio extracelular facilitando así, los procesos de extracción y purificación para la industria; además, de ésta ventaja, las enzimas de origen microbiano son preferidas porque actúan en condiciones moderadas, simplicidad en el desarrollo de enzimas recombinantes, mantienen su estabilidad en solventes orgánicos y condiciones extremas de pH y temperatura, tienen alta especificidad y estereoselectividad, no necesitan cofactores, generan baja producción de residuos y altos rendimientos en su recuperación y reutilización, del mismo modo pueden obtenerse en procesos fermentativos

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS cortos por la rápida división celular de los organismos productores y versatilidad del metabolismo microbiano en los medios de cultivo empleados.

AGAR TWEEN 80 Tween 80, 100 ml es una solución de tensioactiva no iónica que es utilizada como suplemento en diversos medios de cultivo en el entorno de laboratorio. El nombre Polysorbate 80 es sinónimo de Tween 80. Tween 80, 100ml no está destinado para su uso en el diagnóstico de enfermedades u otras afecciones en humanos […]. Es un derivado de ésteres de sorbitán. Se usa como

emulsionante y agente dispersante cuando se incluye en diversas fórmulas de

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS medios de cultivo y sirve para emulsionar y dispersar componentes hidrofóbicos del medio. También actuará como surfactante para muestras de hisopos de superficie, para muestras de alimentos, cosméticos que tienen alto contenido de grasa o contenido hidrofóbico, etc.

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MICROORGANISMOS PROTEOLÍTICOS Los microorganismos proteolíticos constituyen un grupo muy heterogéneo, en el cual podemos encontrar especies de los géneros, Clostridium, Bacillos, Proteus, Pseudomonas, Streptococcus, Micrococcus, Aspergillus, Penicillium y Mucor entre otros. Especialmente las esporígenas aerobias se mantienen en la flora intestinal. La pasterización actúa sobre las bacterias esporígenas como un “schock térmico” para tomar la forma de bacterias y actuar libre de

antagonistas (eliminadas durante la pasterización). Las bacterias proteolíticas desdoblan las proteínas desde péptidos hasta aminoácidos y le dan a la leche un sabor amargo (por la descomposición de las proteínas) además de alterar la textura de los productos. No se descarta la formación de toxinas, las que pueden llevar a una intoxicación inespecífica. Durante la decarboxilación de aminoácidos se generan aminas biógenas, entre ellas tiramina e histidina que pueden ser tóxicas en los alimentos (cuando las monoaminooxidasas son inhibidas por factores como el alcohol).

ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA DESEABLE La actividad proteolítica microbiana puede ser deseable en ciertos alimentos, debido a su contribución en el desarrollo de 52 sabores, cuerpo y textura, como por ejemplo en procesos de maduración de quesos. En algunos alimentos, el nivel de microorganismos proteolíticos puede ser de gran valor debido a que es posible predecir el periodo de almacenamiento en refrigeración u obtener información de los métodos de procesamiento.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA INDESEABLE La hidrólisis de la proteína por los microorganismos en los alimentos puede producir una variedad de alteraciones tanto en el olor como en el sabor y textura. Las enzimas proteolíticas, sobre todo las de bacterias psicrotróficas de la leche, generalmente permanecen activas tras ser sometidos a tratamientos térmicos, reduciendo la calidad de los productos tratados térmicamente.

AGAR CASEINATO La caseína es una proteína encontrada en la leche. Como todas las proteínas, está compuesta de aminoácidos que son utilizados por los microorganismos como fuente de energía y de carbono. Cuando la leche es mezclada con un medio de cultivo, el medio pierde su transparencia y se vuelve turbio debido a que la caseína reacciona con los iones calcio y forma complejos coloidales insolubles de caseinato de calcio. Cuando la enzima caseinasa cataliza la hidrólisis de la caseína. Los aminoácidos resultantes se disuelven en el medio acuoso y el medio se toma de nuevo transparente alrededor de la colonia del microorganismo. Este fenómeno permite detectar la degradación de la proteína. El medio de cultivo contiene caseinato que es degradado por los proteolíticos. Este proceso produce halos de aclaramiento alrededor de las colonias de microorganismos proteolíticos, en contraste con el resto del medio de cultivo que permanece turbio. Se cuentan únicamente las colonias con halos.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS HALO Es un efecto óptico en forma de disco, que presenta un anillo iridiscente en su circunferencia exterior. El halo nos representa a actividad metabólica desarrollada por el microorganismo cultivado en la placa.

GRAM NEGATIVAS Las bacterias gramnegativos son caracterizadas por la presencia del espacio periplásmico, que es un de una sola capa de peptidoglycan intercalada entre la membrana citoplásmica y la membrana exterior. Peptidoglycan, también conocido como mureina, es un polímero que consiste en una espina dorsal y los aminoácidos del hidrato de carbono. Las cadenas del péptido dentro de la estructura peptidoglycan se reticulan parcialmente en las bacterias gramnegativos, poniendo en contraste con las cadenas altamente reticuladas del péptido de bacterias grampositivas. La membrana exterior contiene el lipopolysaccharide, una molécula grande que sea tóxica a los animales. Durante el gramo que mancha, la membrana exterior de bacterias gramnegativas deteriora del alcohol adicional a la muestra y la capa delgada de peptidoglycan no puede conservar la mancha de óxido de la violeta cristalina. El counterstain es agregado para ofrecer contraste manchando las bacterias gramnegativas decoloradas con la capa peptidoglycan fina mientras que

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS siendo bastante liviano no perturbar la violeta cristalina que mancha en las bacterias grampositivas.

Bacterias gramnegativas , imagen tomada de internet

GRAM POSITIVAS En microbiología, se denominan bacterias grampositivas, o bacterias Grampositivas, aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram. Esta característica química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se tratan como taxón se utiliza también el nombre de Posibacteria. Las restantes son las bacterias gramnegativas. La envoltura celular de las bacterias grampositivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS bacterias grampositivas, las gramnegativas presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular. Incluyen especies tanto móviles (vía flagelos) como inmóviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintéticas, pero la mayoría son heterótrofas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones desfavorables. Realmente, no todas las bacterias del grupo son grampositivas (no se tiñen por la aplicación de ese método), pero se incluyen aquí por su similitud molecular con otras bacterias grampositivas.

Bacterias grampositivas Bacillus anthracis (bastones violetas). Dominio público,

https://commons.wikimedia.org/w/index.php?cu rid=434143

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DETALLES EXPERIMENTALES A.- MICROORGANISMOS PROTEOLÍTICOS A.1. MATERIALES: 

Una pequeña porción de queso



Agar calcio- caseína



Solución salina



Espátula Drigaski

Tubos con solución salina, tomada el 19/09/18 en el laboratorio de Microbiología por Muñoz

Pequeña porción e queso, tomada el 19/09/18 en el laboratorio de Microbiología por Muñoz

A.2. PROCEDIMIENTO:

1. Desinfectamos toda el área de trabajo con ayuda de alcohol y algodón y nos equipamos con los materiales de bioseguridad 1. 2. Encendemos el mechero y esterilizamos la pipeta.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS 3. Usamos 1 g de la muestra de queso en 9 g de solución salina para estabilizar al microorganismo y evitar que se estrese, homogenizamos y diluimos hasta 10 -2.

Diluir en 10-2, tomada el 19/09/18 en el laboratorio de Microbiología por Muñoz

4. Procedemos a sembrar 0.1 L de la última solución y diseminamos sobre el agar Calcio-caseinato. Incubar 30° C por 48 a 96 horas. 5. Escogemos colonias con diferentes tipos de halos, realizamos coloración Gram , una gota de agua y tomamos las colonias escogidas y usamos cristal voleta , Lugol y sefranina por 2min,2 min y 10seg respectivamente

Escogemos a los Proteolítico en Agar Calcio-caseína, tomada el 19/09/18 en el laboratorio de Microbiología por Muñoz

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS 6. Observamos en el microscopio, se agrega 1% de ácido acético para una mejor observación

B.- MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS B.1. MATERIALES: 

Una cantidad pequeña de efluentes pesqueros.



Agar Tween 80



Solución salina



Espátula Drigaski



Mechero

Observamos en la imagen superior una placa Petri ya preparada con el agar Tween 80. A la derecha observamos una muestra obtenida de un efluente pesquero. Posee un B.2. PROCEDIMIENTO olor desagradable y un color rojo opaco; suponemos pues una concentración considerable de organismos lipolíticos.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS 





Desinfectamos nuestra área de trabajo y encendemos el mechero al cual nos mantendremos cerca en todo el proceso de aislamiento. A través de diluciones seriadas obtenemos una solución de 10 -4, estas disoluciones se utilizan para reducir la concentración de microorganismos o células de una muestra. Con una pipeta extraemos 1 ml de la muestra de efluente y la colocamos en el tubo con 9 ml de solución salina, usamos la misma pipeta para homogenizar la solución. Repetimos la misma operación hasta el tubo 10 -4 de la cual extraemos 0.1 ml y la colocamos en el agar Tween 80. Con la ayuda de la espátula diseminamos las muestras y las incubamos a 30 °C por 48 horas.

Diseminación de la muestra con la espátula de Drigalski, siempre cerca del mechero a fin de mantener al mínimo la contaminación de la placa. .

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CÁLCULOS Y RESULTADOS

Proteolítico en Agar Calciocaseína, tomada el 19/09/18 en el laboratorio de Microbiología por

Proteolítico en Agar Calcio-caseína, tomada de internet de FABA informa.

Después de realizar todo el procedimiento del cultivo y el método de Gram , observamos en el microscopio microorganismos . Los microorganismos que son circulares son cocos y se tienden a colorear de color morado ya que son Gram positivos y los más alargados son los cocobacilos que poseen un color más claro (tipo piel claro) porque son Gram negativos. Por la actividad proteolítica se presentan halos casi transparentes y de tamaño reducido. En la imagen tomada de internet, se observa que los microorganismos proteolíticos en este caso de leche, en su mayoría son de tamaño pequeño, con aproximadamente 3 mm. No se observa la coloración Gram porque la imagen es en blanco y negro pero se observan también cocos y cocobacilos.

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Crecimiento de lipolíticos en agar Tween 80.

En la imagen presentada podemos observar la siembra de efluente luego de ser incubada, en la cual se nota los halos opacos lo cual nos indica que son gram positivas. Luego se procederá con la coloración Gram para después poder observar la muestra en el microscopio.

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS Según Nayeli Hernández Mejía, Idalia Flores Argüello y Maricarmen Quirasco Baruch en su estudio de bacterias proteolíticas aisladas de queso Cotija, nos mencionan: “De las muestras analizadas que presentaron la mejor calidad microbiológica

(NMP <4 coliformes totales/g), se aislaron 68 colonias, de las cuales 16 presentaron la mayor actividad proteolítica. En agar-calcio caseinato adicionado con 5g/L de leche descremada en polvo, se observó claramente la formación de halos translúcidos originados por la proteólisis. De éstas, se amplificó la región V3 del ARNr 16s y por ARDRA, prueba de catalasa y observación microscópica, se seleccionaron a las bacterias diferentes, cuyos ampliaciones se secuenciaron y compararon con la base de datos (BLAST). […] Se observa que, como consecuencia de la actividad metabólica de los microorganismos durante la maduración, hay un aumento de acidez y disminución en el pH; también se va perdiendo humedad con lo que se concentra la cantidad de sal (por lo tanto el aw disminuye), limitando así el crecimiento microbiano. También se observó que el tiempo de maduración es indirectamente proporcional a la carga de microorganismos indicadores.”

En el laboratorio, al realizar la diseminación se observó el color y se olió el queso que tenían características propias por el cambio de pH y de la salinidad .También se pudo observar los halos de la actividad de los microorganismos proteolíticos que rompen los enlaces amina o peptídico.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS Se presume la presencia de bacterias lácticas (BAL) las cuales son un conjunto de microorganismos formado por diferentes géneros, que tienen semejantes características como la fisiología, morfología y el metabolismo. Estas bacterias se relacionan a hábitats con abundancia en nutrientes como por ejemplo carnes, bebidas y en nuestro caso los lácteos. Son bacterias Gram-positivas, no esporuladas, catalasa-negativas, oxidasa negativas, sin citocromos, no aerobias pero aerotolerantes, acidúricas y exclusivamente fermentativas con el ácido láctico como principal producto final durante la fermentación de azúcares. Principalmente las BAL son mesófilas (Bacteria que descompone la materia orgánica a temperaturas que oscilan entre 30 y 40 C), pero podemos encontrar géneros que son aptas para crecer y desarrollarse a temperaturas muy bajas hasta 5°C y otros que llegan a alcanzar temperaturas tan elevadas como 45°C. Respecto al pH idóneo para su crecimiento, encontramos algunas que pueden crecer a un pH de 3, otras oscilan entre 6 y 9, pero la gran mayoría están adecuadas a un pH de 4 y 4,5. Los Staphylococcus aureus son cocos gram positivos presentes en el ambiente, agua, aire y alimentos; se presentan con frecuencia en derivados lácteos y alimentos con alto contenido de sal como los embutidos. La importancia del estudio de las diferentes enfermedades transmitidas por alimentos varía entre países dependiendo del consumo, procesamiento, preparación, manejo de las técnicas de almacenamiento de los alimentos y de la sensibilidad de la población .Los humanos y los animales son los principales hospederos de esta bacteria.

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS Se han notificado infecciones por S. aureus en quesos pasteurizados en diferentes partes de Latinoamérica. En Mérida (Venezuela) se obtuvo 64,44%; en Lima (Perú) 53,4%; en Corrientes (Argentina) 45%; en Tabasco (México) 11,8% (Félix, et al, 2006) y en Ecuador en un estudio realizado en noviembre y diciembre de 2015 se determinó la prevalencia de S. aureus en los quesos de 83,33% (Yugcha, 2016). Según la FDA (Administración de Drogas y Alimentos), el consumo de leche y quesos elaborados sin las debidas condiciones higiénicas puede causar enfermedades infecciosas como las salmonelosis, estafilococosis y otras que ponen en riesgo la salud pública (FDA, 2015).

De acuerdo a la investigación realizada por Verónica García Saturnino, Carolina Peña Montes y Maricarmen Quirasco Baruch sobre microorganismos lipolitico, de las 60 colonias de bacterias lipolíticos seleccionadas en su estudio, la gran mayoría fueron cocos gram positivos, resultado relativamente similar al nuestro; hay que tener en cuenta que la investigación realizada por Verónica García Saturnino y sus colegas fue en queso Cotija, mientras que nosotros lo realizamos para efluentes pesqueros. La característica de ser gram positivo se había podido apreciar antes que lo llevemos a analizar al microscopio, debido a la presencia de halos opacos durante la fase final de incubación.

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CONCLUSIONES 

Se forman halos por la actividad de las bacterias proteolíticas y se forman en menos tiempo que la actividad lipolítica.

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Aprendimos que la tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno, por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada.

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Las aguas residuales, como las aguas de efluentes, tienen una gran predisposición en estimular el desarrollo de microorganismos lipoliticos.

RECOMENDACIONES 



Desinfectar el área donde se preparará el cultivo y las posteriores como la de observación. Se recomienda rotular los tubos de ensayo donde vamos a diluir las muestras con las respectivas diluciones que se realizaran.

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Cuando se desee sembrar se debe realizar cerca al mechero en el área de trabajo para mantener condiciones de esterilidad.

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Usar y aplicar los niveles de bioseguridad, como el uso de guantes, mascarillas y cola sujeta con el fin de no contaminar y no mancharse las prendas. Asegurarse de que el portaobjetos esté libre de grasa para impedir la dificultad en su extensión de la bacteria. Debemos tener en cuenta en todo momento la medida del objetivo que estemos utilizando con el fin de evitar confusiones y obtener así una idea clara de los microorganismos.



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APLICACIONES DE PROTEASAS PROTEASAS: Cualquier enzima que lleva a cabo la ruptura de enlaces peptídicos de las proteínas dando como resultado cadenas más cortas (peptídicos) o aminoácidos libres por medio de hidrólisis -; es decir, usan una molécula de agua para hacerlo.

APLICACIÓN: En las industrias de producción de alimentos suelen ser combinadas con peptidasas ,con la finalidad de realizar la hidrólisis completa Suelen ser usadas en la fabricación de bebidas, panificaciones, galletería y ablandadores de carne, síntesis del aspartarne, aclaración de la cerveza, fabricación de productos fermentados de soya y de pescado, saborizantes, así como la elaboración de quesos concentrados, proteicos y producción de horrorizados proyectos. En el pan, por ejemplo, se pueden usar proteínas para facilitar que la levadura actué sobre el almidón, permitiendo que la masa suba más rápido. Como resultado, la masa de pan es más fácil de manipular y la textura es más consistente. Esa misma barra de pan puede deber su apetitosa corteza tostada a aditivos enzimáticos que degradan el almidón y favorecen la caramelización, que es la fuente de ese color marrón dorado.

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La fruta del fondo del yogur es más firme, los refrescos contienen la fecha de caducidad más larga y el helado tiene una textura más suave y mejores características de congelación porque se usan productos proteicos en su producción. Además de reducir los contaminantes de desechos de los procesos industriales, las proteínas también se pueden usar para limpiar basura nociva. Los residuos orgánicos de cebadores de ganado, casas y negocios suponen una amenaza creciente para el medio ambiente, especialmente de los ecosistemas acuáticos. Se pueden usar enzimas para digerir los desechos orgánicos antes de que provoquen problemas. Cuadro 1. Proteasas de interés en la industria de alimentos

Además de se aplica de manera importante en la industria farmacéutica, ya que se utiliza dichas enzimas para formular antitrombióticos, coadyuvantes digestivos, antiinflamatorios, aceleradores de la coagulación sanguínea y para la activación del plasiminogeno. Otros usos son el depilado de pieles en curtiduría y la recuperación de la plata de las películas fotográficas y

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS radiográficas ya utilizadas, además de emplearse enzimas proteolíticas en la síntesis enzimática de péptidos y ésteres con actividad biológica y formulación de los llamados detergentes biológicos. El empleo de las proteasas alcalinas en diferentes industrias se ha incrementado en los años recientes, ya que se conocen como biocatalizadores que ofrecen ventajas como una alta actividad catalítica, específica sobre el sustrato, además de ser producidas en grandes cantidades por procesos amigables con el medio ambiente y utilizando microorganismos, además de tener disponibilidad a bajos costos.

APLICACIONES DE LIPASAS: Algunas de las industrias con mayor demanda de lipasas son la de los detergentes, alimentaria y de biocombustibles, donde se aprovechan las características de regio-selectividad para catalizar la hidrólisis de sustratos naturales o sintéticos y estabilidad en presencia de diversos surfactantes para la formulación de detergentes comerciales. Cerca del 32% del total de producción mundial de enzimas es destinada a la formulación de detergentes y representan una de las aplicaciones más demandadas de la industria biotecnológica, donde las lipasas juegan un papel de gran importancia para la remoción de grasas y aceites. Lipasas que trabajan a pH alcalino son usadas efectivamente para llevar a cabo la remoción de aceites e incrementar la eficiencia de los detergentes comerciales. Los detergentes comerciales contienen surfactantes que interactúan con las lipasas que pueden ocasionar la inhibición o activación de la enzima, por tal motivo, el entender la relación enzima surfactantes es importante para

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS determinar si una lipasa puede o no utilizarse como aditivo en formulación de detergentes comerciales y en la producción de fármacos.

BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA 1. (s.f).Microorganismos de alteración o deterioro. Recuperada el 23 de setiembre del 2018 de http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/4Alteracion_6541.pdf pág 51 y 52. 2. Heer.G.2007.Microbiología de la leche .Facultad de Ciencias Veterinarias – UNL. 3. News Medical (2018). Bacterias gramnegativas. Recuperada el 23 de setiembre del 2018 de https://www.news-medical.net/life-sciences/GramNegative-Bacteria-(Spanish).aspx 4. Hernández.N, Flores.I y Quirasco.M. Estudio de bacterias proteolíticas aisladas de queso Cotija. Universidad autónoma de México, ciudad universitaria. México. 5. Administración de Drogas y Alimentos, FDA. (2015). Los peligros de la leche cruda: La Leche sin Pasteurizar Puede Representar un Riesgo Grave Para la Salud. Recuperado de: http://www.fda.gov/Food/ResourcesForYou/Consumers/ucm210577.ht m 6. Yugcha, S. P. (2016). Determinación de la presencia de cepas de Staphylococcus aureus resistentes y multiresistentes aislados en quesos

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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS LIPOLÍTICOS Y PROTEOLÍTICAOS frescos artesanales elaborados en zonas rurales de Riobamba. Riobamba: Editorial ESPOCH.

7. García V., Flores I., Quirasco M., Aislamiento e identificación de microorganismos lipolíiticos del queso cotija.

8. Pedrosa C., Romero M., Actividad lipolitica de microorganismos aislados de aguas contaminadas con grasas.

9. Reyes.M y Aguilar.C .2011.Residuos agroindustriales para producción de PROTEASAS fúngicas. Universidad autónoma Metropolitana.

Aislamiento de Microorganismos Amilolíticos y Celulolíticos

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