FACULTAD DE INGENIERIA
I nf orme de Práctica de L aborator io LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
RECUENTO E IDENTIFICACIÓN DE STAPHYLOCOCCUS COAGULASA POSITIVA Juan David Gómez Fecha de presentación 16/10/2014 _______________________ _________________________________ ______________________ _______________________ _______________________ ______________________ ________________________ __________________________ ____________________ ________
RESUMEN
crococcaceae comprende cocos Gram positivos, no exigentes, catalasa La familia M i crococcaceae positivos, con agrupación en racimos, aerobios o anaerobios facultativos. De los tres géneros que la integran ( Micrococcus Micrococcus,, Planococcus Planococcus , Staphylococcus ) , ) Staphylococcus es el único de importancia médica; Este se caracteriza por ser un microorganismo aerobio facultativo - anaerobio facultativo, capaz de fermentar la glucosa en anaerobiosis; dentro del género Staphylococcus se conocen más de 20 especies, de las cuales S. aur eus es la más importante pero no la única patógena. La infección estafilocóccica es conocida desde la antigüedad y en la actualidad la especie tipo S. aureus aureus tiene una alta incidencia como agente de infección , esta especie capaz de causar cuadros tóxicos por producción de potentes exotoxinas exo toxinas que generan casos de intoxicación alimentaria, síndrome de piel escaldada y shock tóxico entre otras además es de resaltar la gran capacidad de adaptación y supervivencia de esta bacteria, su incremento en la resistencia contra antimicrobianos en especial en el medio industrial, hospitalario y su facilidad para formar biofilms. El estudio se va a realizar por la metodología de recuento en placa en Agar Baird Parker este es un medio parcialmente selectivo que utiliza la capacidad de los estafilococos de reducir el telurito a telurio y detectar la lecitinasa a partir de la lecitina del huevo. El Agar Baird-Parker se utiliza ampliamente y se incluye en numerosos procedimientos estándar para el análisis de alimentos, cosméticos o agua de piscinas con el fin de detectar la presencia de Staphylococcus aureus, posteriormente determinando con pruebas bioquímicas la presencia de coagulasa positiva. Palabras Clave: Staphylococcus, anaerobio, biofilm , coagulasa, exotoxinas _______________________ _________________________________ ______________________ _______________________ _______________________ ______________________ ________________________ __________________________ ____________________ ________ _______________________ ___________ ______________________ ______________________ _______________________ _______________________ ______________________ ______________________ _______________________ ______________________ ___________
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1. INTRODUCCIÓN El Staphylococcus aureus de tipo (coagulasa positiva) es un coco Gram positivo, anaerobio facultativo que que produce de coagulasa y catalasa se distribuye ampliamente llegando al punto que uno de cada tres es portador de esta bacteria naturalmente vive en la piel, fosas nasales y garganta de animales y seres humanos.
Este tipo puede producir enfermedades en la piel y mucosas además de ser el causante muchos brotes por intoxicación alimentaria los cuales afectan directamente al aparato gastrointestinal produciendo la famosa "intoxicación estafilocócica por alimentos" Los síntomas de esta intoxicación son náuseas, vómitos, calambres abdominales, ocasionalmente diarrea, malestar general y dolor de cabeza los cuales se
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puede presentar pasados 30 minutos a las 8 horas después de haber consumido el alimento, aunque el periodo de incubación es de 2 a 4 horas. Esta intoxicación no es considerada como una enfermedad grave; sin embargo, se han presentado muchos casos de muertes y brotes principalmente en ancianos y niños, ya que su nivel de afectación es directamente proporcional a la cantidad de enterotoxina e nterotoxina ingerida Del punto de vista de sus factores de virulencia, tanto bioquímicos como estructurales, se lo puede definir como una especie de patógeno perfecto el cual esta magníficamente equipado para invadir, diseminarse y causar enfermedad grave pero este normalmente convive en armonía con el huésped humano o animal, formando parte de su flora y habitad sin causar daño alguno, inclusive en algunos casos se encuentran personas sanas las cuales están fuertemente infectadas o colonizadas definiéndose como portadores y pudiendo en ocasiones ser reservorio y fuente de infección.
2. MATERIALES Y MÉTODOS Recuento e identificación de Staphylococcus coagulasa positiva
Seguidamente se procedió a homogenizar en la licuadora los 10,52 gramos de la muestra con 90 ml de Agua peptonada 0.1% y citrato de sodio 2% (10^-1), posterior mente tomaron volúmenes de 1 ml consecutivamente para preparar las soluciones de concentración ( 10^-2 ; 10^-3)
Inicialmente se prepararon las diluciones a partir de 10,52 gramos de la muestra seleccionada en nuestro caso salchichas.
Luego de tener la soluciones de concentración conocida se seleccionan dos (10^-2, 10^-3), se 2
toma 0,1 ml de cada una de estas diluciones y se pasa a realizar la siembra de cada una de estas y por duplicado en cajas de petri con Agar Baird Baird-Parker Agar; El medio no debe utilizarse para el aislamiento de estafilococos diferentes de S. aureus.
Se continua a cerrar las cajas y llevarlas a una incubadora que tenga 37 grados centígrados durante 24-48 horas para tener un buen crecimiento de este microorganismo.
24 horas despues se sacan las cajas de la incubadora para obsevar el crecimiento de staphylococcus aureus
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caracterización bioquímica con la prueba de la coagulasa.
Prueba para determinar producción de la enzima coagulasa Se pasan las colonias elegidas a tubos con caldo Brain-Heart Infusion (BHI) y se posteriormente se llevan a incubar de 20-24 horas a 35 grados centigrados.
Se continua a tomar las cajas que posean entre 15-150 colonias y observar que se genera lipolisis y proteólisis formando colonias de color negro con un halo blanco y estrecho.
Luego de las las 24 horas en un tubo vacio verter 0,3 mL de plasma de conejo EDTA reconstituido y añadir 0,1 mL del cultivo obtenido en caldo BHI y llevar a incubar a 35 grados centígrados durante 6 horas , revisando cada hora cómo va la formación del coagulo; si el coagulo es bien diferenciado se determina coagulasa positiva-
Con la ayuda del cuadro 1 se selecciona el numero de colonias típicas de Staphylococcus Stap hylococcus aureus en el Agar BP realizarles a cada una su 4
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Se obtuvo el siguiente. recuento: DILUCIONES 10-2 A B 302 278
-1
10 A NN
B NN
Diluciones -1
Incontables Incontables
10 A
-2
302
10 B
-2
278
10 A
-3
28
-3
26
10 B
→ →
A 28
B 26
# de colonias Promedio
10 A -1 10 B
10-2 10-3
10-3
290 27
Incont.
290 27
=
10,74
El resultado es mayor de 2. Entonces tomamos la menor dilución como el valor para el conteo de colonias. Entonces, el resultado para el conteo de -4 colonias será: 2,7 x 10 ufc/gr
3. RESULTADOS Tras el periodo de incubación y posterior lectura se determino presencia de Staphylococcus coagulasa positiva tipo 2.
Dado que El fundamento del método se basa en las características bioquímicas de este microorganismo. Este medio contiene las fuentes de carbono y nitrógeno necesarias para el crecimiento. La glicina, el cloruro de litio y el telurito potásico actúan como agentes selectivos. La yema de huevo constituye el sustrato para determinar la producción de lecitinasa y, además, la actividad de lipasa. Los estafilococos producen colonias de color de gris oscuro a negro debido a la reducción del telurito; los estafilococos que producen lecitinasa descomponen la yema de huevo y crean zonas transparentes alrededor de las colonias correspondientes. Es posible que se forme una zona de precipitación debido a la actividad de lipasa. El medio no debe utilizarse para el aislamiento de estafilococos diferentes de S. aureus.
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4. CONCLUSION En 10,52 gramos de salchichas que se analizaron se encontró presencia de Staphylococcus aureus de tipo coagulasa positiva, este es el causante la enfermedad estafilococica la cual presenta síntomas gastrointestinales este microorganismo se encuentra en la muestra de salchichas y puede venir contaminada directamente en cualquier parte del proceso de manufactura o posterior a este; ya sea por contaminación cruzada o por contaminación directa los manipuladores. En las explotaciones y sacrificios es importante tener buenas prácticas agronómicas además de una buenas prácticas de Higiene para reducir el número de Staphylococcus. Durante la transformación del alimentos también debe tenerse cuidado de no usar materias primas que puedan estar contaminadas ya que posterior al tratamiento térmico las enterotoxinas pueden estar presentes dentro del alimento aun ya que son de difícil eliminación.
BIBLIOGRAFÍA Páginas web
[1] http://www.bd.com/europe/regulatory/assets/ ifu/hb/ce/pa/es-pa-255084.pdf [2] http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tes is15.pdf [3] http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Limites permisibles_18844.pdf [4] http://www.colpos.mx/bancodenormas/nmexicanas/ NMX-F-065-1984.PDF [5] http://www.ciencias.unal.edu.co/unciencias/datafile/farmacia/revista/V33N1P59-69.pdf
Se debe tener una buena cadena de frio para el transporte recepción y almacenamiento post y pre tratamiento del producto tanto al comienzo como al final de la producción de este. En el hogar la mayoría de brotes por intoxicación alimentaria por Staphylococcus se dan por mala cocción del alimento < 45 ºC o por una mala refrigeración de estos >10ºC, por lo que se deben tener buenas prácticas de higiene en la preparación y conservación de los alimentos.
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