UNIVERSITAS PADADARAN !AKULT !AKULTAS AS TEKNOLO"I TEKNOLO" I INDUSTRI IN DUSTRI PERTANIAN PERTANIAN DEPARTEMEN TEKNOLO"I INDUSTRI PAN"AN ATINAN"OR #$%&
Dapat menekan pem"entukan pro#uk yan& ti#ak #iin&inkan sampai
4 *
seren#ah mun&kin' /utu konstan< murah< #an terse#ia sepan;an& tahun' Ti#ak menim"ulkan masalah terha#ap aerasi< a&itasi< ekstraksi< #an pemurnian hasil serta perlakuan lim"ah'
42'
Su"strat yan& #i&unakan #alam proses fermentasi "erpen&aruh
terha#ap akti%itas #an pro#ukti%itas enim' A#anya su"strat tertentu #i #alam me#ium pro#uksi #apat mema)u mikroor&anisme untuk mensekresi met a"olit selnya' Eat makanan utama "a&i pertum"uhan mikroor&anisme a#alah sum"er kar"on< nitro&en< #an komponen mineral terutama fosfat' ormulasi me#ia #alam pertum"uhan #an pro#uksi hasil fermentasi merupakan suatu tahap pentin& #alam men#esain per)o"aan #alam skala ker;a 8Stan"ury #an 6hitaker< 1+$49' (e"erapa sum"er kar"on yan& serin& #i&unakan a#alah molases< serealia< pati< &lukosa< sukrosa< #an laktosa' /(' Ta3el %' Be3era.a Mikroor-anisme Pen-*asil Xilanase 44'
4*'
Pro#uksi enim 5ilanase pa#a praktikum ini #ilakukan #en&an memanfaatkan "iakan ;amur' A#apun su"strat yan& #i&unakan a#alah su"strat fase pa#at "erupa ton&kol ;a&un& yan& telah #ihaluskan' Ton&kol ;a&un& ini "erfun&si se"a&ai suppl selulosa untuk kelan&sun&an hi#up "iakan ;amur terse"ut' /enurut Pa#il 820109< ton&kol ;a&un& men&an#un& Selulosa F 834<$+?9< Hemiselulosa 82<14?9< #an .i&nin 81+<$?9'
4!'
Pro#uksi enim 5ilanase pa#a praktikum ini #ilakukan #en&an men&&unakan !<$ &ram ton&kol ;a&un& yan& #i)ampurkan #en&an larutan pro#o se"anyak 10ml' Selan;utnya su"strat pelepah kelapa sa=it ini #i"eri #ua perlakuan pre-treatment < yaitu #en&an perlakuan panas autoklaf 8121 07 selama 1* menit9 #an tanpa autoklaf' !re-treatment ini ;u&a "ertu;uan untuk men&hi#rolisis hemiselulosa yan& a#a pa#a ton&kol ;a&un&' -leh se"a" itu< hemiselulosa yan& nantinya #ihasilkan #ari sampel #en&an pretreatment akan )en#erun& le"ih tin&&i konsentrasinya'
4'
Su"strat yan& telah men#apatkan pretreatment selan;utnya #iinokulasikan #en&an "iakan ;amur se"anyak 1< ml atau setara #en&an 10 ! sel' (iakan
;amur ini se"elumnya #itum"uhkan pa#a a&ar mirin& me#ia PDA selama 4$ ;am' A&ar mirin& ini kemu#ian #itam"ahkan aGua#es #an #ilakukan tappin" #en&an tu;uan untuk meluruhkan koloni ;amur yan& a#a' Setelah setiap su"strat men#apatkan inokulasi "iakan ;amur< ton&kol ;a&un& tere"ut #iinku"asi pa#a suhu 32<$ 07' 6aktu inku"asi pa#a su"strat masin&masin& perlakuan< #i"erikan %ariasi yaitu inku"asi pa#a suhu 12 ;am< 24 ;am< 3! ;am< 4$ ;am< #an !0 ;am' Per"e#aan =aktu inku"asi ini "ertu;uan untuk melihat a#anya per"e#aan konentrasi 5ilan yan& #ihasilkan' 4$'
Proses pemanenan #ilakukan #en&an men&am"il hasil fermentasinya' Hasil fermentasi selan;utnya #itam"ahkan aGua#es se"anyak 40 ml #an #ilakukan pen&a#ukan men&&unakann shaker 100 ppm T C 2* 07< selama 1 ;am' Pen&a#ukan ini "erfun&si untuk men&homo&enkan aGua#es #en&an supernatan' Kemu#ian s#iam"il supernatannya #an #imasukan ke #alam ta"un& sentru%u&asi' Sentrifu&asi #ilakukan untuk memisahkan #ua fase< yaitu protein terlarutnya #en&an #in#in& sel atau #apat #ise"ut sel ekstrak' Sentrifu&asi #ilakukan men&&unakan sentrifu&asi #in&in yaitu 4 07< #en&an tu;uan untuk men;a&a kesta"ilan enim yan& tekah #ihasilkan 8 pa#a 3*00 rpm< T C 4 07 Sselama 20 menit' Se"a&ian "esar enim merupakan molekul yan& mu#ah rusak "ila ti#ak "era#a pa#a kon#isi fisiolo&isnya' Karena itu< untuk mempertahankan struktur #an fun&si protein< maka semua proses isolasi harus #ilakukan pa#a kon#isi suhu ren#ah 8Na;afpour< 201*9'
4+'
umlah enim yan& #ihasilkan setara #en&an ;umlah sel terhitun&' Pen&hitun&an ;umlah sel #ilakukan #en&an meto#e spektrofotometri' Se"anyak 0'1 ml ekstrak sel #imasukan ke #alam ta"un& reaksi #an #itam"ahkan +'+ ml aGua#es #an pen&en)eran ini #i"a)a se"a&ai 102 ' Selan;utnya tappib" utuk men&homo&enkan larutan' Se"anyak 0<* ml #iam"il #an #itam"ahkan .arutan "uffer pH * se"anyak 0'* ml #an 5ilan se"anuak 0'* ml' Sampel #iinku"asi pa#a 40 07' Setelah #iinku"asi< sampel #i"erikan penam"ahan DNS 8 #initro Saliclic $ci% 9' DNA ini #itam"ahkan ketika se"eum spektrofotometri "ertu;uan untuk mem"erikan reaksi kompleks yan& mem"antu #alam pen&ukuran a"sor"ansi larutan pa#a spektrofotometer #an "erfun&si men&hentikan ker;a enim< sehin&&a enim ti#ak meme)ah pati 8Na;afpour< 201*9' Selna;utnya #ipanaskan selama * menit untuk memper)epat reaksi DNS' Kemu#ian larutan t yan& telah #i#in&inkan terse"ut #imasukan ke #alam ku%et untuk #iukur a"sor"ansi sel nya' Spektrofotometri
C akti%itas enim 8Im. atau JmolI8menit'm.99 C ka#ar 5ilosa sampel 8&9 C ka#ar 5ilosa kontrol 8&9 C faktor kon%ersi #alam Jmol C faktor pen&en)eran C "erat molekul 5ilosa 81*0<13 &Imol9 C =aktu inku"asi 8menit9 C %olume enim #i&unakan #alam analisis 8m.9
;i penyimpanan enim #ilakukan untuk men&etahui se"erapa
"esar penurunan yan& ter;a#i setelah enim #isimpan serta men&etahui kesta"ilan enim apa"ila #isimpan pa#a suhu tertentu 8Nares=ari< 2009' Penyimpanan enim pa#a =aktu #an suhu tertentu #apat men&aki"atkan peru"ahan struktur enim sehin&&a enim ti#ak #apat "erikatan #en&an su"strat 8Sukmana< #kk< 20149' Suhu merupakan salah s atu faktor lin&kun&an yan& pentin& #alam akti%itas enim' Pa#a suhu optimum akti%itas akan terus men&alami penin&katan' Namun< pa#a pemanasan yan& semakin tin&&i akti%itas enim akan men&alami penurunan atau hilan& karena enim men&alami #enaturasi 8Sumar#;o< 200+9' Pen&aruh suhu terha#ap akti%itas enim #ikarenakan< ter;a#inya peru"ahan konformasi su"strat yan& menye"a"kan peru"ahan sisi aktif su"strat sehin&&a men&ham"at sisi aktif su"strat memasuki sisi aktif enim #an ter;a#i penurunan akti%itas enim' Struktur protein enim akan men&alami kerusakan ketika suhu yan& terlalu tin&&i yan& #iaki"atkan #ari putusnya ikatan non ko%alen 8ikatan hi#ro&en< ikatan %an #er =alls< #an ikatan hi#rofo"ik9 yan& ter#apat pa#a struktur 3 #imensi enim 8Hames #an Hooper< 20009' 121'
(er#asarkan hasil pen&amatan< #en&an autoklaf< pa#a =aktu 12
;am akti%itas enim se"esar <2* Im. #an selama penyimpanan akti%itasnya menin&kat hin&&a =aktu 3! ;am yaitu se"esar 21<043 Im.' Namun< akti%itas enim menurun pa#a saat ;am ke 4$ 13<$$! Iml #an menin&kat kem"ali pa#a ;am ke !0 sampai 1*<40$$ Im.' Apa"ila #i"an#in&kan #en&an tanpa autoklaf<
tanpa perlakuan auto)la%e' Semakin lama =aktu inku"asi< semakin "anyak 5ilanase yan& men&alami kerusakan yan& kemun&kinan #iaki"atkan ker;a #ari protease yan& #ihasilkan "ersama 5ilanase oleh ;amur'
13!' %Saran
1
Praktikkan #an Asisten #osen harus "isa "erkoor#inasi #en&an "aik men&enail informasi pemakaian "ahan"ahan praktikum maupun pelaksaan praktikum