UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO Asignatura: HEMATOLOGÍA I INFORME DE LABORATORIO Tema: RECUENTO DE ERITROCITOS POR MILÍMETRO CÚBICO DE SANGRE TOTAL
Elaborado por: NO SE Tercer semestre
Fecha de entrega: 22 de Mayo de 2015 Período: Abril - Agosto 2015
1. OBJETIVOS 1.1 Objetivo General Determinar el número de eritrocitos por milímetro cúbico de sangre total
1.2 Objetivos específicos
Aplicar la técnica de recuento de eritricitos por mm3 de sangre total en tubo. Emplear la técnica de recuento de eritricitos por mm3 de sangre total en pipeta. Realizar el conteo de eritrocitos con la ayuda del microscopio en la cámara de Neubauer
2. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA Conteo de glóbulos rojos Es un examen de sangre que determina el número de glóbulos rojos (GR) que usted tiene. Los glóbulos rojos contienen hemoglobina, contienen hemoglobina, que que transporta oxígeno. La cantidad de oxígeno que los tejidos corporales reciben depende de cuántos glóbulos rojos tenga usted y de qué tan bien funcionen.
Micropipetas La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas. Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a aspirar se fija girando un botón en su parte superior que está conectado a un sistema analógico de confirmación de volumen, y automáticas, en las cuales dicho sistema es digital. Hay micropipetas simples, que sólo acogen una punta cada vez, y multicanales, que permiten incorporar múltiples puntas (por ejemplo, ocho), absorbiendo el mismo volumen en todas ellas.
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Actualmente, se reconocen fácilmente en el mercado dos de las mejores marcas que existen: Eppendorf y Nichiryo. (Equipos y laboratorio, 2015)
Pipetas de dilución de la sangre Existen dos pipetas distintas de dilución de la sangre: una para eritrocitos y otra para leucocitos. La de eritrocitos presenta una ampolla de dilución mayor. Si la sangre sube más arriba de la señal, se puede corregir el error aplicando la punta sobre la yema del dedo o sobre un papel de filtro. Si el exceso de sangre es grande, se debe limpiar la pipeta y repetir repetir la operación. Se limpia bien la punta de la pipeta y se sumerge en la correspondiente solución diluyente. Se llena hasta la señal 101 en eritrocitos o hasta la 11 en leucocitos. Se tapan los extremos de la pipeta y se agita suavemente unos segundos para facilitar la mezcla en la ampolla de dilución de la pipeta. Como consecuencia, la sangre queda diluida en la pipeta de eritrocitos a 1/200 (si se llenó de sangre hasta la señal 0'5) o a 1/100 (si se llenó hasta la señal 1); y en la pipeta de leucocitos a 1/20 o a 1/10. Se prepara la cámara de recuento con el cubreobjetos y se vuelve a agitar la pipeta durante 2 ó 3 min. (no con demasiada energía, para evitar que se rompan las células). Se eliminan soplando las primeras gotas de líquido que ocupan la porción capilar de la pipeta, pues en esa zona el líquido está exento de células, y se apoya la punta de la pipeta (formando un ángulo de aproximadamente 35º) en el borde del cubreobjetos (Fig.2).
La cámara de neubauer, o hematocitometro. hematocitometro. Se trata de una gruesa placa de cristal con forma de portaobjetos, de unos 30 x 70 mm y unos 4 mm de grosor. En una cámara simple, la porción central, que es donde se realiza el conteo, está dividida en 3 partes. En la parte central se encuentra grabada una retícula cuadrangular. En el caso de cámaras dobles, que son las más comunes, existen 2 zonas de conteo, una superior y otra inferior al eje longitudinal de la cámara. Cámara de Neubauer comercial, pila de cubreobjetos, y caja. Cámara inferior cámara superior La reticula completa mide 3 mm x 3 mm de lado. Subdividida a su vez en 9 cuadrados de 1mm de lado cada uno. Fig. 4 – 1 En caso de recuento de sangre, los cuadrados de las esquinas son los destinados al recuento de leucocitos. Al existir estos en menor número que los hematíes, se necesitan menos líneas de referencia para realizar el conteo. El cuadrado central es el destinado al recuento de hematíes y plaquetas. Se divide en 25 cuadrados medianos de 0,2 mm de
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lado, y cada uno de estos cuadros se subdivide a su vez en 16 cuadrados pequeños. El cuadrado central está por tanto formado por 400 cuadrados pequeños. pequeños. (Bastidas).
Líquido de Hayem El líquido de Hayem es una solución compuesta por sales, las cuales hacen que la solución obtenga el grado de isotónica permitiendo que los eritrocitos se mantengan completos, mientras que los leucocitos se lisan por acción de la concentración de la solución al penetrar al núcleo.
Técnica del recuento de eritrocitos La técnica se basa en diluir la sangre con líquido de HAYEM en porciones exactas. El lìquido de Hayem es una solucion compuesta por sales, las cuales hacen que la solución obtenga el grado de isotónica permitiendo que los eritrocitos se mantengan completos, mientras que los leucocitos se lisan por acciòn de la concentración de la solución al penetrar al núcleo. núcleo.
CALCULOS No de eritrocitos/mm3 = N X 200 X 10 X 400 = N X 10 000 80
N= número de eritrocitos contados 200= factor de dilución 10= corrección por la altura de la cámara 80= área contada. (CBTis_160, 2011)
3. MATERIALES Y MÉTODOS Materiales
Equipo de bioseguridad Matraz Erlenmeyer Perlas de cristal Jeringuilla Placas portaobjetos Cubreobjetos 4
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Microscopio Equipo de toma de muestra
Muestra
Sangre desfibrinada y sangre y sangre anticoagulada.
PROCEDIMIENTO
Punción venosa con jeringuilla:
Abrir la jeringa y revisar que el embolo este suave y ajustar la aguja. Colocar el torniquete. Desinfectar la zona de punción con una torunda con alcohol. Retirar la tapa de la aguja y pinchar estirando la piel. Jalar en embolo. Retirar el torniquete y depositar la torunda con alcohol para evitar sangrados.
Para obtener sangre desfibrinada:
Colocar 4 ml de muestra suavemente por las paredes del matraz que contiene las perlas de vidrio. Se somete a rotación manualmente a manera de un ocho sobre una base durante 10 minutos. Se obtiene la sangre desfibrinada y se coloca una pequeña gota sobre un portaobjetos y con un cubreobjetos. Se observa al microscopio la morfología celular.
Para obtener sangre anticoagulada:
Colocar 2 ml de muestra en un tubo con anticoagulante EDTA (tapa lila) y homogenizar. Colocar una pequeña gota de sangre anticoagulada en el portaobjetos y con un cubreobjetos. Se observa al microscopio la morfología celular. 5 Laboratorio Clínico
4. GRÁFICOS Y RESULTADOS Células
Sangre desfibrinada
Sangre anticoagulada
Eritrocitos Leucocitos Plaquetas
Si Si (13) no
Si SI (7) si
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Resultados Dilución en tubo
Dilución en pipeta
A= 104
A= 126
B= 92
B= 116
C= 76
C= 112
D= 78
D= 116
E= 82
E= 112
43
582
432x10x200x400
582x10x200x400
80
80
R= 4 332.000
R= 5 820.000
'
'
4 332.000 + 5 820.000 = 10'152.000 10'152.000 / 2 = 5'076.000 5'076.000 '
'
Reporte
Valores Referenciales Recién nacido: 4 a 5 millones/ml
Nombre: Marco Goyes
A los 3 meses: 3,2 a 4,8 millones/ml
Código: 07
Al año de edad: 3,6 a 5 millones/ml
Fecha: 16-06-2015
Entre los 3 y 5 años: 4 a 5,3 millones/ml mill ones/ml
Resultado
De los 5 a los 15 años: 4,2 a 5,2 millones/ml
Eritrocitos = 5'076.000 5'076.000 x mm3
Hombre adulto: 4,5 a 5 millones/ml Mujer adulta: 4,2 a 5,2 millones/ml
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5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES CONCLUSIONES
Para el recuento de eritrocitos se utiliza un método sencillo en el que se utiliza un tubo de ensayo, sangre y líquido de Hayem con su porción específica, para luego realizar el conteo de eritrocitos en la cámara de Neubauer en el microscopio. Otro método de recuento de eritrocitos es en pipeta, en el que se utiliza una pipeta de dilución o de Thomas, para ello se necesita mezclar totalmente la sangre con el líquido de Hayem en la pipeta, se utiliza un aparato llamado agitador de pipetas o bortex y se los observa en el microscopio con la muestra en la cámara de Neubauer. El recuento de eritrocitos se lo realiza en la cámara de Neubauer que está formada por muchas secciones tanto para glóbulos rojos y glóbulos blancos, el conteo se lo realiza en la parte central de la cámara que está formada por cinco partes específicas específicas que se los nombra por letras A,B,C,D Y E.
RECOMENDACIONES
Si se deja mucho tiempo ti empo la solución hecha en tubo, homogenizar un poo antes de hacer la lectura en la cámara, ya que los eritrocitos con el tiempo t iempo desciende hasta el fondo evitando que se realice un contaje exacto. Al momento de absorber el líquido de Hayem con el absolvedor en la pipeta de Thomas, tener en cuenta que no tiene ti ene que haber burbujas, ya que al momento de ponerlo en el agitador automático se puede producir lisis de los eritrocitos y evitar el correcto conteo de los mismos. Es importante saber la zona de recuento de eritrocitos, tomando en cuenta que no todos los eritrocitos presentes en los campos se cuentan, para ello se cuenta aquellos eritrocitos que se encuentran presentes desde la mitad hacia dentro de la última lámina trilaminar del campo, esto en todos los campos utilizando solo el lado superior y lateral izquierdo.
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