Guia de Practicas de Bioquimica II Ingenieria Biotecnologica

 (egradación de glucógeno !avorecida Aegulación rec"proca de la glucógeno sinteasa y la glucógeno /os/orilasa por /os/orilación y de/os/orilación. os grupos seril /os/orilados se muestran muestran como --&

O8ETIVOS2 1. Aeali2ar Aeali2ar la la determi determinaci nación ón de glucógen glucógenoo hepáti hepático co #. uanti/ica uanti/icarr los ni!eles de glucóge glucógeno no hepático hepático en di/erente di/erentess estados estados nutricional nutricionales es y hormonales -

$nim $n imal al alim alimen enta tado do norm normal alme ment ntee 0ad lib libit itum um))

-

$nimal en ayunas

-

$nim $n imal al trat tratad adoo con con adre adrena nali lina na

-

$nim $n imal al Dia Diabé béti tico co 0tr 0trat atad adoo con con alo* alo*an ano) o)

PROCEDIMIENTO2 1 PREPAR PREPARACIO ACION N DE LOS ANIMA ANIMALES LES EXPERIE EXPERIEMNT MNTAL ALES ES a) Aata $ Lue recibir recibiráá su alimentació alimentaciónn habitual habitual sin restricci restricción ón alguna. alguna.  b) Aata ; Lue permanecerá permanecerá en ayunas por lo menos #F horas antes del e*perimento. c) Aata   +stando +stando el animal animal bien alimenta alimentado, do, pesarlo pesarlo y procede procederr a inyectarle inyectarle ?,?#> ?,?#> mg de adrenalina por cada 1?? g de peso, con dos horas de anticipación a la  práctica. Itili2ar una solución de adrenalina adrenalina que contenga contenga ?,#> mg  ml. ml. d) Aata Aata D #F horas horas antes del e*peri e*perimen mento to se inyect inyectará ará por !"a subcutá subcutánea nea una solución de alo*ano 0 >? mg  ml ) a ra2ón de #?? mg  3g de peso.

4 EXTRAC EXTRACCIÓ CIÓN N DEL DEL GLUCÓG GLUCÓGENO ENO M.$o+o2 M.$o+o +( ris%!'  

F"'+!%('$o2 FF

e trata un tro2o de tejido tejido hepático hepático con una base /uerte /uerte 03) 03) en caliente, caliente, siendo siendo degradadas las prote"nas y otros constituyentesP quedando preser!ado el glucógeno, el cual es precipitado con etanol y se le hace reaccionar con el yodo para hacer su determinación colorimétrica. e aumenta la sensibilidad de esta reacción con la presencia del cloruro de calcio.

R(!#$i:os2 1. olu oluci ción ón iodo-io iodo-iodu dura rada da &esa &esarr ?,#: ?,#: g de yodo yodo y #,: #,: g de yodur yoduroo de potasi potasio. o. Disol!er en 1? ml de agua destilada #. lorur loruroo de calcio calcio saturad saturadoo a temperat temperatura ura ambien ambiente. te. &esar &esar N5,5 g de cloruro cloruro de calcio, disol!er en 1?? ml de agua. 8iltrar antes de usar  4. Aeacti!o Aeacti!o de yodo yodo ml ml de la solución iodo-iodurada. Guardar en /rasco oscuro a ? Z, durante siete d"as má*imo.

 Procedimiento: 1. +n un tubo tubo de centr" centr"/ug /ugaa medir medir ?,N ml de 3 al 44 @ y colocar colocarlo lo en un baCo baCo mar"a hir!iente #. acri/ica acri/icarr los animales animales por decapi decapitació taciónn y tan rápido rápido como sea posib posible le e*traer e*traer el h"gado y pesar 1?? mg de él. olocar inmediatamente el tro2o de h"gado en la solución de 3 que se encuentra en el baCo hir!iente y dejarlo all" por #? minutos, agitando de !e2 en cuando para permitir la disgregación del tejido. 4. Aeti Aetira rarr el tubo tubo del del baCo baCo y en/r en/ria iar. r. $Ca $Cadi dirr 1,4 1,4 ml de etan etanol ol al N:@ N:@ me2c me2cla larr y calentar la solución hasta la ebullición teniendo cuidado que no se proyecte. +n/ri +n/riar ar inme inmedi diat atam amen ente te en baCo baCo de hiel hieloo por por > minu minuto tos, s, para para perm permit itir ir la  precipitación del glucógeno glucógeno F. entri entri/ug /ugar ar a 4?? 4???? rpm por 1> minuto minutoss y decant decantar ar el sobre sobrenad nadan ante. te. oloca olocarr el tubo boca abajo sobre un papel /iltro >. 'eutrali2a 'eutrali2arr el e*ceso de de álcali álcali aCadiendo aCadiendo ?,# ml ml de cloruro de amon amonio io saturado saturado y me2clar cuidadosamente con una !arilla de !idrio permitiendo que la solución aCadida entre en contacto con toda la pared interna del tubo

F>

:. &reparar un blanco para lo cual se mide ?,F ml de agua destilada y #,: ml del reacti!o de yodoP proceder enseguida igual que las muestras problema. 5. olocar el tubo en baCo mar"a hir!iente durante 1> minutos y en/riar. $Cadir ?,# ml de agua destilada y #,: del reacti!o de yodo. i la cantidad de glucógeno  precipitado es grande, hacer en esta etapa una dilución apropiada. E.
 Resultados. 1. $notar el aspecto y tamaCo del h"gado de los animales de e*perimentación Aata $ ...........................................

Aata  ................................................

Aata ; ............................................

Aata D ................................................

#. bser!ar la cantidad de precipitado después de centri/ugar. $bsorbancia  bruta ;$' +%$'D$A 1 +%$'D$A #

$bsorbancia oncentración neta de Glucógeno 0mg)

?.11E ?.1N# ?.44E F:

8actor de calibración

+%$'D$A 4

?.F1:

4. alcular el /actor de calibración .......................... F. Gra/icar la cur!a de calibración con los datos anteriores. Itili2ando papel milimetrado

>. alcular la concentración de glucógeno en cada una de las muestras +*presar los resultados en mg de glucógeno por 1?? mg, #?? mg y en el peso total del tejido hepático &eso del $b $b '+'%A$=' en mg h"gado ;ruta  'eta  #?? mg  1?? mg  "gado 0mg) "gado "gado %otal >.4> 1.#?

Aata $ 0$limentado ) Aata ; F.>? ?.>? 0ayunas) Aata  F.4# ?.FF 0trat. con adrenalina) Aata D 4.NE ?.4E 0trat. con alo*ano) :. alcular el porcentaje de disminución del glucógeno en 1?? mg de h"gado con relación al animal alimentado

% +( "#&('o 1 % +( ;?!+o A$%$ $ A$%$ ; A$%$  F5

Por#('$!9( +( +is%i'"#i&' (' r(!#i&' ! !'i%! !i%('$!+o

A$%$ D 5. aga la interpretación de los resultados para cada rata Aata $ Aata ; Aata  Aata D

INTEROGANTES 1. YLué !entaja tiene la /os/orólisis del glucógeno en comparación con la hidrólisis.

#. YLué di/erencia hay entre la acción glucogenol"litica de la adrenalina y glucagon en el h"gado y en el músculo.

4. Aepresente esquemáticamente el mecanismo de acción de la adrenalina sobre la regulación en el metabolismo del glucógeno.

4. i se administra leucina marcada con -1F será /actible ala identi/icación posterior de glucógeno marcado con -1F.

F. Yómo se e*plica que el animal diabético tenga menores ni!eles de glucógeno hepático que su contraparte normal.

FE

>. Aepresente esquemáticamente el mecanismo de acción de la insulina sobre el metabolismo del glucógeno.

FN

PRACTICA No  META8OLISMO DE LIPIDOS2 HIGADO GRASO EXPERIMENTAL RELACION DE EXPERIMENTOS 1. &roducción de un h"gado graso en rata #. Determinación de ácidos grasos en el h"gado de una -

Aata control

-

Aata a la cual se ha administrado +tionina

-

Aata a la cual se ha administrado +tionina (
INTRODUCCION +l rol que cumple el h"gado en el metabolismo lip"dico es sumamente importante. +n este sentido podemos decir que los siguientes procesos se reali2an en la -

*idación de los ácidos grasos

-

"ntesis de ácidos grasos y colesterol

>?

-

"ntesis de lipoproteinas plasmáticas ipoproteinas de muy baja densidad 07D)P lipoproteinas de alta densidad 0D)

-

"ntesis de ácidos biliares

-

e encarga casi e*clusi!amente de la s"ntesis de cuerpos cetónicos

&&i de estos procesos en el h"gado, lo que +n ocasiones puede ocurrir $%& alteraciones determina un anormal aumento en su contenido graso, esta situación se denomina h"gado METIONINA <+%='= - $<& graso o (s$(!$osis ;(*6$i#! . +sta entidad merece una especial atención del médico ya que
importantes que pueden ocasionar h"gado graso. -$denosilmetionina -

8os/atidil $umento en laetanolamina cantidad de ácidos grasos que llegan al h"gadoP sea procedentes

-

de la alimentación o de otros tejidos 8os/atidil "ntesis &roteica
-


- Disminución en la salida lip"dica del h"gado generalmente debido a un de/ecto -adenosilhomocisteina LIPOPROTEINAS en la s"ntesis de lipoproteinas plasmáticas.

$%&

ETIONINA $%& &&i ( &i

&&i


+%='= - $<& tA'$

$%&
-$denosiletionina 8os/atidil etanolamina 8os/atidil etilcolina -adenosilhomocisteina

"ntesis &roteica

LIPOPROTEINAS

FIGURA Nº  Aol de la 1  )rriba: 
 )bajo: omo la etionina a/ecta la s"ntesis de lipoproteinas.

No$!2 as l"neas discontinuas indican que el e!ento no se está reali2ando.

+*perimentalmente se puede inducir el h"gado graso mediante la administración de di!ersos agentes, como el tetracloruro de carbono, puromicina, ácido orótico, etionina, etc. +n esta práctica estudiaremos el h"gado graso inducido por la etionina, tomando como  parámetro el contenido de ácidos grasos del h"gado, ya que a pesar que el h"gado graso  puede ser inducid de di!ersas /ormas, es común denominador el aumento de triglicéridos +tionina es un compuesto estructuralmente relacionado al aminoácido esencial metionina y por lo tanto tiene un comportamiento de antagonista competiti!o, en la s"ntesis de prote"nas y de /os/atidil colina, de esta manera bloquea la s"ntesis de lipoproteinas y /inalmente la salida de l"pidos del h"gado.

COOH

COOH

CH  CH4  CH4  S  CH 3 NH4

CH  CH4  CH4  S  CH4  CH3 NH4


+tionina

O)9($i:os2 1.- onocer el mecanismo bioqu"mico por el cual etionina induce esteatosis hepática >#

#.- onocer el /undamento de la determinación de los ácidos grasos en el h"gado 4.- +studiar el e/ecto de la metionina sobre el h"gado graso producido por metionina F.- =ndicar algunas alternati!as de tratamiento en pacientes que su/ren esteatosis hepática

M($o+oo?! +l d"a anterior a la práctica se inyecta !"a intraperitoneal a un lote de tres ratas hembras, las siguientes soluciones 1.- R!$! #o'$ro2 olución salina isotónica 4 ml. =nyectar la misma cantidad a las #4?, > horas y 5 horas después de la primera inyección. #.- R!$! $r!$!+! #o' E$io'i'!2  e inyectará intraperitonealmente 4 ml de una solución de D-+tionina 01:,5 mgml). =nyectar la misma cantidad alas #,> horasP > horas y 5 horas después de la primera inyección. 4.- R!$! $r!$!+! #o' E$io'i'!  M($io'i'!2  Aecibe el mismo tratamiento que la rata con etionina, pero además se le inyecta 4 ml de -metionina 0 #? mgml ) una hora antes de la primera inyección de etionina y una hora después de cada inyección de etionina. +n este e*perimento se usarán ratas hembras, debido a que el incremento de grasa hepática es mucho más pronunciada en hembras que en machos.

DETERMINACION DE LOS ACIDOS GRASOS - %ranscurridas #F horas de iniciado el tratamiento de los animales se les sacri/ica y se les retira rápidamente del h"gado un tro2o de #,> g, el que se /ragmenta con la ayuda de tijeras y se deposita en un +rlenmeyer de #>? ml. - e le aCade luego 1? ml de hidró*ido de potasio al 44@ y F? ml de etanol al N:@ con alcohol isoam"lico al ?,F@. - e calienta la preparación en baCo mar"a hir!iente durante #? minutos, teniendo cuidado que no se proyecte el contenido. - $Cadir 15 ml de l al #>@, me2clar y dejar en reposo algunos minutos - $Cadir luego con pipeta !olumétrica #> ml de éter de petróleo. - %apar cuidadosamente el recipiente y agitar /uertemente durante un minuto. Dejar en reposo por 1? minutos para conseguir una adecuada separación de las /ases éter de  petróleo y etanol-ácido. &ara esta última etapa se puede utili2ar una probeta en lugar  del +rlenmeyer, con la !entaja de mirar mejor la separación de las dos /ases. >4

- Aetirar > ml de la capa etérea 0superior), y colocarlos en un +rlenmeyer y aCadir 1 ml de solución de etanol-alcohol isoam"lico y dos gotas de a2ul de timol. - 8inalmente titular con 'a ?.1 ' hasta obtener un color a2ul !erdoso que debe  permanecer estable por lo menos 4 minutos. &ara e/ecto de los cálculos asuma que el &< promedio de los ácidos grasos que se están titulando es de #EF. omplete la siguiente tabla

Aata control Aata con etionina Aata con +tionina (
C!r!#$(r?s$i#!s +( ;?!+o P(so $o$! Coor Co'sis$('#i! :.E gr   5.4 gr   5.# gr 

$note el contenido de ácidos grasos en miliequi!alentes en el !olumen de titulación y en miligramos por gramo de tejido hepático húmedo.

N!OH 1 N % !s$!+os Aata ontrol

1.4

Aata con etionina 0+) Aata con + (
4.:

Co'$('i+o +( 6#i+os r!sos %E-  @ % %E-  4@ %

% +( AG *or r!%o +( ;?!+o

#.?

INTERROGANTES 1.- aga una interpretación adecuada de los esquemas mostrados

#.- &orque la administración de adenina re!ierte en cierta /orma los e/ectos de la etionina

4.- ite por lo menos cinco alteraciones bioqu"micas que se producen en los animales tratados con etionina >F

F.- &orqué la de/iciencia de ácido pantoténico puede determinar h"gado graso

>.- Lué conocimientos tiene, en relación al h"gado graso inducido por etanol

>>

PRACTICA N  HIPER8ILIRRU8INEMIAS RELACION DE EXPERIMENTOS 1.- Determinación de la bilirrubina directa e indirecta en el suero sangu"neo #.- =denti/icación de pigmentos biliares en la orina 0Aeacción de Gmelin)

INTRODUCCION e denominan hiperbilirrubinemias a las en/ermedades que cursan con aumento en la concentración de bilirrubina en el suero sangu"neo. +ste aumento puede ser a predominio de la bilirrubina directa 0conjugada)P en cuyo caso se hablara de hiperbilirrubinemias a  predominio indirecto o a predominio directo. in embargo resulta más apropiado agrupar  las hiperbilirrubinemias en atención al mecanismo de su producción y desde este punto de !ista, se describen cuatro categor"as =.- iperbilirrubinemias por sobreproducción de bilirrubina ==.- iperbilirrubinemias por menor captación hepática de bilirrubina ===.- iperbilirrubinemias por alteración en la conjugación hepática de la bilirrubina =7.- iperbilirrubinemias por alteraciones en la e*creción de bilirrubina

>:

&ara la tipi/icación de las hiperbilirrubinemias se han descrito di!ersos análisis de laboratorio. +ntre estos podemos destacar  a) Determinación de bilirrubina directa e indirecta en el suero sangu"neo  b) =denti/icación de pigmentos biliares 0bilirrubina) en la orina c) +*creción urinaria de urobilinógeno d)
EXPERIMENTO 1 DETERMINACION DE LA 8ILIRRU8INA DIRECTA E INDIRECTA EN EL SUERO 7 *+todo2 M!o/ E:(/'0 F"'+!%('$o +( %.$o+o M

HO

V

M

N

C H

$cido ul/an"lico Dia2oti2ado HSO3

M

HO

V

N

N

P

CH4

M

N

M

V

N

C

OH

H H H 8 I L I R R U 8 I N A

N B NC

M

C H

P

P

N

CH4C

P

HSO3

NBN

M

N

M

N C H COMPLEO DE COLOR ROO

Fi"r! Nº < Di!Jo r(!##i&' +( E;ri#; >5

V

OH

Objetivos: 1.- Determinar las bilirrubinas en el suero de un paciente con ictericia. #.- Determinar las bilirrubinas en el suero de un sujeto aparentemente normal 4.- omparar el resultado obtenido en ambas determinaciones

 Procedimiento 1.- +n F tubos de prueba rotularlos como =, ==, === y =7, medir lo siguiente = == uero diluido 011?) #,? #,? $gua destilada #,> #,> --Aeacti!o blanco --?,> #.-
=== #,? --#,> ?,> ---

=7 #,? --#,> --?,>

4.- eer en el /otocolor"metro utili2ando /iltro !erde F.- on anterioridad a la practica se preparó un sistema estándar, midiendo #,> ml de una solución de bilirrubina 0?.??F mgml), se aCadió luego #.> ml de metanol y ?.> ml del reacti!o de +rhlich. e midió la absorbancia en las condiciones seCaladas para el suero 0# y 4) y se obtu!o una lectura de ?.##F. >.- Itili2ar el procedimiento descrito tanto para el suero del paciente ictérico y el suero normal

E>*r(si&' +( os r(s"$!+os 1.- +stimar el /actor de calibración porcentual $bsorbancia del +stándar

 .................

oncentración del +stándar

 .................

8actor de calibración

 .................

8actor de calibración porcentual

 ................

#.- ompletar la siguiente tabla $;A;$'=$ =

==

===

'. ;==AAI;='$ =7

uero 'ormal uero $ uero ;

?.?># ?.?4F ?.F4? ?.?F: >E

;%

;D

;=

uero 

?.1NF ?.?>E ?.#N# ?.?>#

4.- ompletar la siguiente tabla indicando si los !alores de la concentración de  bilirrubina directa 0;D) y de la bilirrubina indirecta 0;=), están aumentados 0$), normales 0') o disminuidos 0D). ;ilirrubina directa

;ilirrubina indirecta

0;D)

0;=)


 &(E-&F&0)0&1- (E P&2*E-OS 3&4&)RES E- 4) OR&-) Objetivos 1.- Aeali2ar la reacción de Gmelin en una orina colúrica #.- Aeali2ar la reacción de Gmelin en una orina normal y comparar el resultado obtenido con el correspondiente a la orina colúrica

 *+todo =denti/icar la presencia de bilirrubina en la orina utili2ando la acción o*idante del ácido conteniendo tra2as de ácido nitroso 0reacción de Gmelin).

 Procedimiento 1.- +n un tubo de prueba medir # ml de orina #.- on una pipeta hacer llegar hasta el /ondo del tubo, # ml de ácido n"trico-nitroso, tratando que se /ormen dos capas 4.- bser!ar los cambios de coloración que ocurren entre ambas capas F.- acer la reacción utili2ando la orina patológica y una orina normal

E>*r(si&' +( os r(s"$!+os $note sus resultados en el espacio en blanco 1.- rina normal #.- rina patológica

INTERROGANTES >N

1.- Lué ontiene el reacti!o de +rhlich

#.- &orqué no se prepara un tubo blanco para la determinación de bilirrubinas por el método de
4.- Lué bilirrubina es la que se determina en el tubo '6 4 y por quéM F.- Dan positi!a los bilatrienos 0bili!erdina) la reacción de Gmelin. 8undamente su respuesta.

>.- +l urobilinógeno da positi!a la reacción de GmelinM

:.- Lué tipo de bilirrubina es la que se encuentra en la orina en cantidades tra2as en una  persona normalM 5.- $ qué se llama ictericiaM

E.- umplen rol /isiológico los pigmentos biliaresM

N.- eCale las causas más comunes de un aumento de bilirrubina tipo directa.

:?

:1

PRACTICA? mg dos !eces al d"a. $ los pocos d"as de iniciado el tratamiento el ácido úrico :#

sérico comen2ó a bajar y luego de !arias semanas dichos !alores ya estaban muy cerca de lo normal. +l &aciente /ue controlado durante los meses siguientes, no !ol!iendo a presentar un episodio similar de artritis gotosa e igualmente no se constató mani/estaciones sugerentes de la presencia de cálculos renales de ácido úrico.

C!so C?'i#o 4 'uestro paciente es ahora una niCa de ## meses de edad, única hija de un matrimonio entre primos hermanos. Desde su nacimiento presentó una se!era de/iciencia de lin/ocitos %, que se mani/estó por in/ecciones respiratorias /recuentes, candidiasis y marcada lin/openia, menos de >?? lin/ocitos por microlitro de sangre. e considera lin/openia en niCos cuando el número de lin/ocitos es menor a 4??? por microlitro de sangreP normalmente los lin/ocitos % son cerca del >? @ del número total de lin/ocitos. a administración de !acuna contra la di/teria, tos con!ulsi!a y tétano produjo una m"nima respuesta en la niCa. e practicó la determinación de la acti!idad de las isoen2imas de $denosina Desaminasa 0$D$) en un lisado de hemat"es de la paciente, haciéndose el mismo estudio en ambos padres y en dos controles normales. os resultados se muestran en la /igura adjunta y corresponden a la separación electro/orética de las dos isoen2imas más importante de la $D$ y su tinción para determinar su acti!idad. a determinación espectro/otométrica de la acti!idad total de la $D$ demostró ausencia de acti!idad en los hemat"e de la niCa P en tanto que el padre y la madre ten"an acti!idades de $D$ que correspond"an al >? @ y :? @ de lo normal respecti!amente.. analetas

1

1.- ontrol normal 0a) #.- 'iCa a/ectada 4.- .- ontrol norma 0b)l 8igura.- Aepresentación esquemática del aspecto del electro/oretograma de las isoen2imas de $D$, luego de su tinción para medir su acti!idad :4

4

3

5

@

+n la niCa de/iciente de $D$, se detrminaron los ni!eles de deso*inucleótidos de adenina en los eritrocitos, obteniéndose los resultados que se muestran en la tabla siguiente. %$;$ 1.- 'i!eles de deso*inucleótidos de $denina en los eritrocitos de la niCa a/ectada 0nmolesml de paquete de hematies

PACIENTE NORMAL  'D 'o se detecto

d$%& 0 nmolesml) N?F  'D

d$D& 0nmolesml) NE 'D

d$<& 0nmolesml) > 'D

8!s(s Mo(#"!r(s / Corr(!$o C?'i#o<8io-"?%i#o i bien se ha descrito !arias en/ermedades asociadas a alteraciones en el metabolismo de los nucleótidos púricos y pirimid"nicos, las alteraciones que predominan en humanos son aquellas que resultan de un alterado catabolismo de los nucleótidos púricos. a %abla #.
1< ALTERACIONES EN EL CATA8OLISMO DE LAS PURINAS E'f(r%(+!+ E'Ji%! !f(#$!+! Gota &A&& inteasa, &A&& $midotrans/erasa G&A% 0parcialmente) "ndrome de esch-'yhan G&A% 0completamente) =nmunode/iciencia e!era ombinada $denosina Desaminasa $D$ 0=D) Tantinuria Tantino *idada =nmunode/iciencia &urinonucleósido 8os/orilasa 0&'&) +n/ermedad de 7on GierJe Glucosa : 8os/atasa 4< ALTERACIONES EN EL CATA8OLISMO DE LAS PIRIMIDINAS $ciduria rótica %ipo = rotato/os/orribosiltrans/erasa y <& Descarbo*ilasa $ciduria rática %ipo == <& Descarbo*ilasa $ciduria rótica
tamaCo y la indigestibilidad de los cristales causa más bien la destrucción de estas células y la liberación de sus en2imas lisosomales al espacio articular. +stas en2imas a su !e2 determina una reacción in/lamatoria aguda de la capsula articular 0sino!itis) determinando las t"picas mani/estaciones de la artritis gotosa. a mani/estación bioqu"mica caracter"stica de la gota es el aumento de ácido úrico en sangre 0hiperuricemia) y casi siempre esta acompaCada con aumento en su e*creción urinaria 0uricosuria). os !alores normales para el ácido úrico en sangre son de 4.> a 5.? mg @ en !arones y de #.: a :.? mg @ en mujeres y debe tenerse en cuenta que estos !alores aumentan con la altitud. a e*creción urinaria !ar"a normalmente entre ?.4 a ?.: gd"a. e acostumbra clasi/icar a la gota en primaria y secundaria. a primera corresponde al transtorno producido por alteración genética, la secundaria es consecuencia de otras alteraciones, como la leucemia, la policitemia, el uso de antimetabolitos para disminuir la s"ntesis de ácidos nucleicos, etc. a /recuencia con la que se presenta al gota es relati!amente alta, cerca del 4@ en los ++II y en otros pa"ses parece ser muy similar. a incidencia /amiliar es del 5? al E?@ y es mucho más /recuente en !arones que en mujeres 0proporción 4 a 1). e han descrito di!ersas situaciones que pueden e*plicar la mayor producción de ácido úrico en un paciente gotoso. Destaquemos las siguientes •

$umento en la acti!idad de la /os/orribosil &iro/os/ato inteasa 0&A&& sinteasa).

•

Aesistencia de la &A&& sinteasa a su inhibición por retoalimentación. er"a el caso en que sus metabolitos reguladores, como el G<&. $<& e =<& que normalmente se unen a la en2ima y la inacti!an, por algún cambio en la estructura de la misma, no se pueden unir y por lo tanto sigue aumentando la s"ntesis de nucleótidos  púricos.

•

$umento en la a/inidad de la en2ima por la Aibosa >&. $l cambiar la estructura de la en2ima su a/inidad por el sustrato aumenta 0menor 3 <) y por lo tanto aumenta la s"ntesis de &A&&.

•

$umento en la a/inidad de la &A&& amidotrans/erasa por el &A&& moti!ado por  una alteración en la estructura de la en2ima.

:>

•

&erdida de la inhibición por retroalimentación de la &A&& amidotrans/erasa. os nucleótidos que normalmente la inhiben 0$<&, $D&, $%&, G<&, GD& y G%&) no  pueden hacerlo.

•

De/iciencia pacial en la acti!idad de la en2ima ipo*antina-guanina /os/orribosil trans/erasa 0 G&A%) que impide la reutili2ación de hipo*antina y guanina determinando su destino hacia la mayor /ormación de ácido úrico. +n el tratamiento de la gota se usa un análogo de hipo*antina que es el $lopurinol.

Aecordemos que la Tantino *idasa catali2a la con!ersión de hipo*antina en *antina y  posteriormente de la *antina en ácido úrico 0!er /igura). +stando en el medio el alopurinol, la *antino o*idasa lo hidro*ila y lo con!ierte en alo*antina 0o*ipurinol). +ste compuesto  permanece unido al complejo
 HN N N

T.

HN N



N H

$lopurinol

$lo*antina



 N

HN

N H

N H

 N

HN

T. N

N H

N H

Tantina

ipo*antina

8igura '6

T. 

N H

HN

H N

 

N H

N H

$cido Irico

+/ecto inhibitorio del $lopurinol sobre la Tantino *idasa

%ambién se ha descrito que el alopurinol puede reaccionar con el &A&& /ormando el nucleótido correspondiente y utili2ando &A&& y determinando que bajen sus ni!eles y disminuya la s"ntesis de purinas.

Si'+ro%( +( L(s#;
modalidad ligada al se*o. os pacientes tiene se!eras mani/estaciones de gota, ya que hay un gran aumento en la /ormación de ácido úrico y además desarrollan conductas sumamente agresi!as que los lle!a a su propia automutilación, /recuentemente se muerden las e*tremidades distales de los dedos y los labios. [unto a lo anterior, los pacientes muestran mo!imientos in!oluntarios y retardo mental. +l pronóstico es malo y generalmente estos pacientes mueren antes de alcan2ar los #? aCos de edad. a se!eridad de esta alteración hace !er la importancia de la !"a de s"ntesis de nucleótidos púricos por la !"a de recuperación y parece ser que ésta s"ntesis a ni!el e*trahepático es sumamente importante y se !er"a completamente a/ectada en estos  pacientes, contribuyendo a e*plicar la se!eridad de su cuadro.

D(fi#i('#i! +( A+('osi'! D(s!%i'!s! +n esta en/ermedad también denominada =nmunode/iciencia e!era ombinadaE=D), hay una marcada de/iciencia de la en2ima $denosina Desaminasa que normalmente catali2a la remoción del grupo amino de la deso*iadenosina y de la adenosina, durante el catabolismo de las purinas. as células que más su/ren la de/iciencia de esta en2ima son los lin/ocitos % y también los lin/ocitos ;. +stas células acumulan grandes cantidades de deso*iadenosina que al ser /os/orilada rinde grandes cantidades 0 >? !eces más de lo normal) de d$%&. a alta concentración de éste nucleótido inhibe a la Aibonucleótidoreductasa e!itando la /ormación de otros d'%& y por lo tanto inhibiendo la s"ntesis de $D'. omo los lin/ocitos tienen que proli/erar en respuesta a los in!asores que llegan al organismo, la respuesta inmune /racasa y los niCos portadores de esta en/ermedad no pueden superar el menor proceso in/eccioso y /recuentemente mueren antes de los # aCos de edad.

8I8LIOGRAFIA <'%G<+AX A., Q$X %., &+%A $. and $&+ D. 01NN:) ;iochemistry. $ case-oriented approach. 7= +d. . &$I$ +. and &+DAH %. 0#??F) Gout. rystal deposition diseases. urrent pinion in Aheumatology 1: #E#-#E: :5

A%% 3. and $GID+ . 0#??4). Gout. [$<$ #EN #E>5-#E:?

CUESTIONARIO 1.- +*presar la concentración del ácido úrico del paciente del caso cl"nico 1, en mg@ 0&< del ácido 1:E).

#.- a concentración intracelular del &A&& es normalmente es de 1? -> a 1?-: mol. a determinación de la 3 < de la /os/orribosil piro/os/ato amidotrans/erasa para &A&& en un  paciente gotoso dio un !alor de # * 1? -> <, en comparación con un control normal cuyo !alor resultó 4 * 1? -F <. Itili2ando estos datos proponga el mecanismo que e*plicar"a la hiperuricemia del paciente.

4.- &ara determinar si una persona con gota ha desarrollado su en/ermedad por una sobreproducción de ácido úrico o a causa de una disminución en su capacidad de e*cretarlo, se hace con /recuencia la prueba de la administración oral de un aminoácido radioacti!o. Lué aminoácido ser"a el más apropiado y como se procesar"a dicha pruebaM

F.- Lué alimentos por su alto contenido en purinas deben ser e*cluidos de la dieta del  paciente gotosoM +s su/iciente este tipo de tratamiento para normali2ar los !alores séricos de ácido úrico en los pacientes gotososM

>.- +*plicar la hiperuricemia de los pacientes con el s"ndrome de esch-'yhan. &roponga alguna e*plicación sobre la causa de las alteraciones neurológicas que estos pacientes  presentan.

:E

:.- +*plicar la hiperuricemia que se encuentra /recuentemente asociada a) $ la de/iciencia de glucosa : /os/atasa 0+n/ermedad de 7on GierJe) y b) $ la hiperacti!idad de la glutatión reductasa.

5.- omo actúa el alopurinol en el tratamiento de la gotaM &or qué se seCala que el alopurinol es un inhibidor suicidaM

E.- uál es el mecanismo de acción de la colchicina en el tratamiento de la gotaM +n que momento se le usaM

N.- ómo se e*plica que los cristales de ácido úrico en el l"quido articular de los gotosos corresponda a urato monosódico, en cambio en la orina de los mismos pacientes los cristales sean /recuentemente de ácido úrico solamente. &odr"a encontrarse en estos  pacientes, cristales de urato disódico en algún lugar del organismoM

1?,. &or qué mecanismo 0s) el alcoholismo puede determinar hiperuricemiaM

11.- Lue e*plicación puede dar a los resultados mostrados en el electro/oretograma de las isoen2imas de $D$ en el caso cl"nico #M. %eniendo en cuente que en los hemat"es hay una gran cantidad de prote"nas, cómo se puede mediante la técnica utili2ada,detectar solamente las dos isoen2imas más importantes de la $denosina DesaminasaM :N

1#.- omo se e*plica la lin/openia del paciente del caso cl"nico # y los continuos cuadros de in/ección respiratoria que presentóM

14.- Lue e!idencia 0s) e*iste 0n) que los altos ni!eles de d$%& en los pacientes con de/iciencia de $D$ sean los que inhiban a la Aibonucleótidoreductasa y determinen menor  s"ntesis de $D' y con ello el daCo a los lin/ocitosM

1>.- De qué manera se !en a/ectadas las reacciones de metilación en que inter!iene $denosil
- $D+'=<+%='='$ 0$<)


X X  CH3

-$D+'=<=%+='$ 0$)

idrolasa <=%+='$

5?

$D+'='$

51

PRACTICA Nº 1 INTEGRACION  REGULACION DEL META8OLISMO RELACION DE EXPERIMENTOS 1. &roducción de Diabetes +*perimental #. Determinación de glucosa en sangre 4. Determinación de glucosa en orina F. Determinación de cuerpos cetónicos en orina

INTRODUCCION +l metabolismo intermediario de cada clase de sustrato por lo general es considerado  por separadoP sin embargo, estos procesos ocurren en nuestro organismo en /orma concertada, donde las di/erentes !"as metabólicas se hallan enla2adas, /ormando una !erdadera red metabólica controlada rigurosamente por di/erentes mecanismos regulatorios. +sta integración e*quisitamente regulado, es la que permite a cada célula lle!ar a cabo sus /unciones bioqu"micas y sin duda, de esta intima y armoniosa organi2ación dependerá la /unción integrada de todas las células que con/orman un organismo, caso contrario sobre!endrá una en/ermedad. In aspecto muy interesante en la regulación del metabolismo celular corresponde a la  participación de las hormonas que son sinteti2adas en tejidos espec"/icos 0Glándulas) secretadas a al sangre y luego transportadas hasta alcan2ar sus células RblancoS, donde  pre!ia interacción con sus receptores ejercerán sus e/ectos regulatorios /undamentalmente a tra!és de  -

$cti!ación o desacti!ación de en2imas ya e*istentes en las células RblancoS, a tra!és de segundos mensajeros 5#

-

=nducción de la s"ntesis de en2imas o alguna otra prote"na.

+n esta práctica centraremos nuestra atención en algunas acciones metabólicas de la insulina usando como modelo e*perimental el estado diabético. a diabetes
GLUCOSA G"#os!  P

NADPH4 A%i'o6#i+os

Ri)os! @ P

TRIGLICERIDOS G"#&('o Gi#(ro A# Gr!sos

GA 3 P

Di OH A P

A),%i'!

NH5

S(ri'!

VLDL

A# 3 PG

Gi#i'!

A Gr!sos

Pir":!$o

C($o 6#i+os A!'i'!

Co(s$(ro

A#($i CoA

A),%i'! A# Gr!sos

A#($i  CoA A#($i CoA

O>!!#($!$o As*!r$!$o

TG

A# Gr!sos A),%i'!

C"(r*os C($&'i#os

CK 

A#($i CoA A#($i CoA

As*!rr!i'!

CADENA RESPIRATORIA

8igura '6 N..- =ntegración de las !"as metabólicas de carbohidratos, l"pidos y  prote"nas

di/erencias en cuanto a la etiolog"a y alteraciones metabólicas entre los dos tipos mencionadosP pero lo que caracteri2a a cada uno de ellas y les da el nombre es el hecho de que en la diabetes tipo =, la causa primaria es un de/ecto o destrucción de las células beta del páncreas, productores de insulina, y el paciente solo se ali!ia con la administración de insulina. +n tanto que en la diabetes tipo == la causa primaria es un de/ecto en la respuesta a la insulina, aqu" el paciente ali!ia sus s"ntomas por administración de antidiabéticos que 54

estimulan la secreción de insulina por las células beta del páncreas y raramente hacen cetosis. $demás la diabetes tipo == aparece en épocas tard"as de la !ida 0Después de lo cuarenta aCos ) y la herencia juega un rol importante. +n cambio en la Diabetes tipo = a cetosis es común y aparece en etapas tempranas de la !ida niCe2 o ju!entud. a tabla = resume las caracter"sticas más importantes de ambos tipos de diabetes. %$;$ =. aracter"sticas distinti!as entre la diabetes mellitus insulino dependiente 0%ipo =) y la diabetes mellitus no dependiente de insulina 0%ipo ==). CARACTERSTICAS

TIPO I

TIPO II

+dad de inicio



etosis

omún

Aaro

&eso corporal

 'o obeso

beso 0E?@)

&re!alencia

?,#- ?,4@

#-F@

&resencia de anticuerpos contra =

 '

islotes omplicaciones

8recuentes

8recuentes

ecreción de insulina

asi nula o nula

 'ormal o casi normal

%ratamiento con insulina

iempre necesaria

 'o es necesario

Aesistencia a la insulina

casional

Isual

ay muchas sustancias que pueden producir los s"ntomas diabéticos cuando son administrados al organismo debido a que pueden producir un deterioro o destrucción de las células beta del páncreas, con la consiguiente ausencia parcial o total de insulina. Ina de las sustancias que produce diabetes es el alo*ano 0#,F,>,: tetrao*ipirimidina o  pirimina tetrona). ausa un daCo permanente de las células beta de los islotes de angerhans, produciéndose un cuadro de diabetes mellitus humana. +sta sustancia también es tó*ica y hepatotó*ica pero a dosis mayores. O a estrepto2otocina es otra sustancia que causa diabetes, O

HN

es un antibiótico de amplio espectro obtenido de treptomyces achromogenes produce necrosis de las

O

células beta y su acción es más selecti!a sobre dichas

NH 5F

$lo*ano

células que el alo*ano ra2ón por la cual ahora se el usa mas en diabetes e*perimental. tras sustancias con capacidad de producir diabetes por a/ectar a las células beta de los islotes de angerhans son el ácido dehidroascórbico, la E-hidro*iquimolina, la diti2ona y otras quimolinasP pero su acción diabetogénica es menos pronunciada y menos espec"/ica que el alo*ano y estrepto2otocina.

EXPERIEMNTO 1 DETERMINACIN DE LA GLICEMIA O)9($i:o 2 Determinar la concentración de glucosa en sangre de un paciente , utili2ando el método colorimétrico 0 'elson y omogy).  '%$ + uso de este método requiere la desproteini2ación de la muestra sangu"nea a /in de e!itar inter/erencia en las reacciones que deben depender únicamente de la glucosa)

F"'+!%('$o2 +l /iltrado libre de prote"nas se calienta en presencia de una solución cúprico-alcalino 0u(() obteniéndose la reducción del cobre a u, el cual actúa luego sobre el arsenomolibdato produciéndose un complejo de molibdeno reducido de color a2ul, cuya intensidad se mide en el /otocolor"metro

Pro#(+i%i('$o2 -

Desproteini2ado +n un tubo de ensayo medir  4,? ml de 'al ?,N @ ?,# ml de sangre ?,F ml de ul/ato de Hinc al >@ ?,F ml de hidró*ido de ;ario al ?,4@

minutos, luego /iltrar o centri/ugar para recuperar el /iltrado libre de prote"nas -

Determinación de glucosa  +n tubo de 8olin Qo medir lo siguiente  1 ml de /iltrado libre de prote"nas 1 ml de reacti!o cúprico alcalino me2clar y calentar en baCo mar"a hir!iente por 1> minutos +n/riar en agua corriente y luego aCadir 1 ml de reacti!o arseno-molibdato 5>

ml, me2clar por  in!ersión, dejar en reposo por > minutos y leer en el /otocolor"metro con /iltro !erde.  &reparar un blanco usando 1 ml de agua destilada en lugar del /iltrado.  &reparar un estándar de glucosa que contenga >? µgml.
R(s"$!+os 1. +stimar el 8actor de calibración porcentual $bsorbancia blanco

KKKKKKKKKKKKKKKKKK 

$bsorbancia bruta del estándar KKKKKKKKKKKKKKKKKK $bsorbancia neta del estándar KKKKKKKKKKKKKKKKKK oncentración del estándar

KKKKKKKKKKKKKKKKKK

8actor de calibración

KKKKKKKKKKKKKKKKKK

8actor de calibración @

KKKKKKKKKKKKKKKKKK

#. ompletar los espacios en blanco ectura ;ruta

ectura 'eta

%ubo blanco

KKKKKKKKKKKK

KKKKKKKKKKKK

%ubo
KKKKKKKKKKKK

KKKKKKKKKKKK

%ubo
KKKKKKKKKKKK

KKKKKKKKKKKK

oncentración de Glucosa en la muestra 0') es de KKKKKKKKKKKmg1?? ml +scriba en el espacio en blanco si el !alor obtenido es 'ormal, $lto o ;ajo KKKKKKKKK oncentración de Glucosa en la muestra 0&) es de KKKKKKKKKKKmg1?? ml +scriba en el espacio en blanco si el !alor obtenido es 'ormal, $lto o ;ajo KKKKKKKKK

EXPERIMENTO 4 DETERMINACION DE GLUCOSA EN ORINA O)9($i:o 2 Determinar la concentración de glucosa en orina utili2ando la prueba de ;enedict

F"'+!%('$o 2 +sta reacción redo* ocurre más rápidamente en medio alcalinoP as" cuando se calienta una suspensión de hidró*ido cúprico en medio alcalino y en presencia de una sustancia

5:

reductora, como algunos carbohidratos 0glucosa) , el hidró*ido cúprico se reduce a o*ido cuproso 0precipitado de color rojo ladrillo)

Pro#(+i%i('$o 2 -

olocar > ml de l reacti!o de ;enedict en un tubo de ensayo

-

$Cadir E gotas de muestra de orina.
-

er!ir durante 4 minutos

-

$notar el resultado e*plicando lo obser!ado

R(s"$!+os 2 lene el espacio en blanco escribiendo 0() cuando hay precipitado o coloración rojo ladrillo y 0-) cuando no lo hay. A='$ '

KKKKKKKKKKKKKKK D=$G'%= KKKKKKKKKKKKKKKKKKK 

A='$ &

KKKKKKKKKKKKKKK D=$G'%= KKKKKKKKKKKKKKKKKKK

EXPERIMENTO 3 DETERMINACIN CUALITATIVA DE CUERPOS CETNICOS EN ORINA O)9($i:o2 =denti/icar la presencia de cuerpos cetónicos en orina utili2ando la reacción del nitroprusiato en medio alcalino

 F"'+!%('$o2 +l método se basa en que al acetona y el acetoacetato al reaccionar con el nitroprusiato de sodio en medio alcalino /orman un complejo de color !ioleta indicando la positi!idad de dicha reacción.

Pro#(+i%i('$o2 -

olocar unas gotas de orina sobre el reacti!o nitroprusiato de sodio en medio alcalino

-


 Resultados: $notar el resultado, e*plicando lo obser!ado  KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK   KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK   KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK   KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK  55

INTERROGANTES 1.- &or qué ra2ón se produce cetonuria en el estado diabético #.- Lué tipo de dieta le dar"a Id. a un diabético insulino no dependienteM

4.-
F.- ómo se e*plica la hiperglicemia y glucosuria que presentan los diabéticos de tipo ==

>.- ómo se encontraran los ciclos alanina 9 glucosa y ori en un diabético no tratado

 :.- +n qué casos se indica la prueba de tolerancia a la glucosaM

5.- uál es la ra2ón de emplear /luor en la me2cla anticoagulante para la sangre cuando se !a a determinar glucosa en la muestra 5E

E.- onsiderando los tipos de diabetes i y ==, la diabetes causado por alo*ano, a cuál de ellos se asemeja. &or quéM

N.- Lué es la hemoglobina glicasada, y que importancia tiene en el estudio de la diabetes

1?.- ómo se encontrará la gluconeogénesis en una persona con Diabetes tipo = no tratadaM &or quéM

11.- &or que en un paciente diabético insulino dependiente, uno de los problemas que se le presenta es la hipoglicemiaM

5N

PRACTICA Nº 11 PEROXIDACION LIPIDICA RELACION DE EXPERIMENTOS 1.- =nducción y e!aluación de la pero*idación lip"dica

INTRODUCCION os radicales libres son de/inidos como moléculas o sustancias altamente reacti!as, que  presentan un electrón desapareado en su orbital e*terna, lo cual puede iniciar una cadena de reacciones al remo!er un electrón de otra molécula para completar la suya. a trans/erencia de electrones hac"a el o*"geno resulta en la /ormación de los siguientes intermediarios como son el anión superó*ido 0 #-), el peró*ido de hidrógeno 0 ##) y el radical hidro*ilo libre 0). De estos intermediarios en la reducción del o*"geno hacia agua, el radical hidro*ilo es indudablemente el radical libre de o*"geno más daCino, pues está in!olucrado en reacciones tales como la pero*idación lip"dica y generación de otros radicales tó*icos. +l peró*ido de hidrógeno, por si sólo no es un radical libre, pero éste es con!ertido en radical hidro*ilo a tra!és de las reacciones de 8enton o ar!er-Qeiss en  presencia de 8e #( o u(, pre!alentes en las células. os radicales libres de o*"geno 0o +species Aeacti!as de *"geno), causan daCo a la mayor"a de macromoléculas de las células 0prote"nas, ácidos nucléicos, l"pidos). $s", el radical hidro*ilo se ha descrito que e*trae átomos de hidrógeno de los l"pidos 0/os/ol"pidos) de membranas 0ácidos grasos poliinsaturados) e inician las llamadas reacciones de pero*idación lip"dicaP los peró*idos lip"dicos as" /ormados, se descomponen a especies carbonilo reacti!as, tales como el malondialdehido y el hidro*inonenal, los cuales a su !e2 reaccionan con prote"nas, daCando la integridad de la membrana celular y la integridad de prote"nas transportadoras, colapsando las gradientes de iones, y E?

conduciendo as" hacia la muerte celular. +stos procesos /ueron muy bien documentados  por estudios en hemat"esP sin embargo, hoy se sabe que similares procesos también ocurre en células nucleadas, lo que e*plica el peligro que entraCa la sobreproducción de estos radicales. omo se puede entender, la generación de radicales libres es un hecho natural que ocurre normalmente en las células, sin embargo, igualmente e*isten mecanismos de de/ensa, conocidos como antio*idantes 0superó*ido dismutasa, glutation pero*idasa, glutation reductasa, etc.), que permiten contrarrestar la presencia de estos agentes daCinos. in embargo, bajo ciertas condiciones tales como radiaciones, ingesta de drogas, in/ecciones, injurias, etc., un organismo puede responder con una sobreproducción de estos radicales, por lo que se hace imprescindible potenciar las de/ensas antio*idantes ya sea endógenas o a tra!és de la dieta con la ingesta de alimentos con alto potencial antio*idante 0 !itamina , !itamina +, carotenos, /la!onoides, etc.).

'o obstante, estas especies

reacti!as de o*"geno inclusi!e, cumplen un rol importante en las células /agoc"ticas para hacer /rente a in/ecciones bacterianas. a e!aluación de la pero*idación lip"dica a tra!és de la determinación de
EXPERIMENTO Nº 1 D($(r%i'!#i&' +( M!o'+i!+(;i+o #o%o %(+i+! +( *(ro>i+!#i&' i*?+i#! O)9($i:os2 1. &reparar los sistemas biológicos de estudio, a partir de h"gado de rata para la inducción de pero*idación lip"dica. #. Determinar la concentración de malondialdehido en los sistemas de estudio. 4. =nterpretar los resultados y discutir los alcances del uso de esta técnica en trabajos de in!estigación.

Fundamento: +l


Fi"r! Nº 1 <   omplejo $cido %iobarbiturico
 '





 '

E1  9  W  



 '



de color rojo-naranja, el cual puede ser medido por /luorometr"a o espectro/otometr"aP aunque esta reacción tiene mucha más alta sensibilidad cuando se mide por /luorometr"a, sin embargo, pueden emplearse cualquiera de los dos. +n la presente práctica, por ra2ones técnicas se la hará por espectro/otometr"a 0colorimetr"a).
 Preparación de la 0urva de 0alibración: Aotular N tubos de ensayo y proceder a medir en cada uno de ellos, lo que se indica el siguiente cuadro Nº +(

Co'#('$r!#i&' +(

Vo"%(' +( MDA

Vo"%(' +(

Es$6'+!r

MDA 7'%o%0

Es$6'+!r 7 0

+i"/('$( 7 0

1 4 3 5 8!'#o

1#.> #> >? 1?? ?

1#> #>? >?? 1??? ?

E5> 5>? >?? ? 1???

A)sor)!'#i! 7DO0

on los datos obtenidos, construya la cur!a de calibración para el malondialdehido. 0$bsorbancia 0D) !s oncentración de
E#

R(!#$i:os2 3l ?.1> < 8eF 1> m< $cido %iobarbitúrico 0 FF '## ) ?.:5 @ en ácido acético al >? @. $cido tricloroacético 0 l 4 ) > @.

 Procedimiento: a% Preparación del homogeni"ado de h'gado de rata al 567. 1. &esar #.> gramos de h"gado y mantenerlo siempre sobre hielo. #. %ami2ar el tejido utili2ando una malla metálica, presionando el tejido contra la malla y agregando 3l ?.1> < /r"o, para la!ar la sangre. 4. Aecuperar las membranas 0tejido parenquimal) que queda sobre la malla F. olocar las membranas en un mortero /r"o 0sobre hielo) y triturar con #> ml de 3l ?.1> < /r"o, hasta obtener un homogeni2ado homogéneo. +l proceso de triturado no debe demorar más de 1? minutos. >. 8iltrar el homogeni2ado con la ayuda de una ga2a. :. eparar y guardar el /iltrado a ? 6, para hacer los ensayos de pero*idación lip"dica. e recomienda utili2ar el /iltrado /resco para cada ensayo.

b% &nducción  determinación de la peroxidación lip'dica. 1. m<. &reparar un sistema sin 8e F, que ser!irá como control. #. =ncubar los sistemas por 1 hora a temperatura ambiente.. 4. %ranscurrido el tiempo de incubación, tomar #?? µl de cada sistema y me2clar por  agitación con #?? µl de ácido tricloroacético al > @. F. entri/ugar a 1>,??? rpm durante > minutos. E4

>. %omar 1?? µl de sobrenadante y me2clar con 1.? ml de $cido tiobarbitúrico ?.:5 @ en ácido acético >?@. :. =ncubar las muestras en baCo de agua hir!iente, durante 1 hora.. 5. %ranscurrido este tiempo, retirar los sistemas del baCo hir!iente y en/riar en hielo por  1> minutos. E. Aeali2ar las lecturas en un espectro/otómetro a >4> nm. N. Determinar la cantidad de
 Expresión de Resultados: Co'#('$r!#i&'

A)sor)!'#i!

A)sor)!'<

F!#$or +(

F!#$or

+( MDA 7 M0

7DO0

#i! '($!

C!i)r!#i&'

Pro%(+io

 Es$!'+ 1

1?

?.?4:

Es$!'+ 4

#?

?.?:1

Es$!'+ 3

4?

?.?NF

Es$!'+ 5

F?

?.1?1

Es$!'+ @

>?

?.1>4

Es$!'+ 

1??

?.#>?

Es$!'+ 

1>?

?.4>F

Es$!'+ 

#??

?.F#N

8!'#o

?

?.??4

Sis$(%!s +( (s$"+io M"(s$r! 1 M"(s$r! 4

Co'#('$r!#i&' +( MDA 7 Mo(s  L0

- aga Id. una interpretación e los resultados

INTERROGANTES 8IOQUIMICAS2 1. Lué otros daCos pro!ocan los radicales libresM Descr"balos.

EF

#. Describa el proceso de pero*idación lip"dica.

4. Lué otros métodos conoce Id. para e!aluar la producción de radicales libres de *"genoM

F. +scriba la reacción del
>. uáles son los sistemas antio*idantes con que cuenta nuestro organismoM y como /uncionanM

:. ómo se generan las especies reacti!as de o*"geno 0A) en nuestro organismoM

5. $ qué se denomina antio*idante, y de que maneras podr"an actuarM

E>

PRACTICA
CASO 1 Ina seCora de #E aCos de edad, estaba consumiendo anticoncepti!os orales con el objeto de e!itar el embara2o. Después de un tiempo a su esposo se le diagnosticó un cuadro de tuberculosis pulmonar, el cual /ue tratado adecuadamente en /orma ambulatoria. +l médico le recetó a la seCora, ri/ampicina por precaución, ya que ella estaba en estrecho contacto con su esposo. $ los pocos meses, la seCora resultó embara2ada, a pesar de haber  seguido con el uso de los anticoncepti!os orales, sin descuidarse.

CASO 4 In paciente de F> aCos de edad, hac"a algunos aCos que se le hab"a diagnosticado que  padec"a de gota, pero en el momento actual estaba en /ase de remisión, siendo tratado únicamente con una dieta adecuada y /enilbuta2ona 0 una droga antiin/lamatoria y que secundariamente es uricosúrica). De impro!iso se le declaró un cuadro de trombo/lebitis, el cual e*igió tratamiento con \ar/arina 0 un anticoagulante ). +l control de la dosi/icación de la \ar/arina se hi2o en /orma rigurosa, con el uso del tiempo de protrombina. e notó que la dosis de \ar/arina requerida para el paciente /ue de tres !eces mayor que lo habitual. uego de la mejor"a del paciente, el médico tratante, le dio de alta, habiéndole retirado la /enilbuta2ona e indicado que siga con el tratamiento de \ar/arina por die2 d"as, E:

con el encargo de !ol!er para su control. uego de transcurrido dicho tiempo. in embargo, el paciente retornó a los siete d"as en estado de shocJ y con hemorragia gastrointestinal masi!a, la cual no pudo ser controlada, /alleciendo el paciente dos d"as después.

CASO 3 In japonés de #: aCos de edad, /ue in!itado a una recepción en donde, como es habitual, comen2ó a comer y beber en abundante cantidad. $nteriormente el hab"a ingerido alcohol muy pocas !eces y en pequeCas cantidades, por que al beber un poco de cualquier bebida alcohólica, notaba un cierto discon/ort, pero en esta oportunidad ten"a moti!os especiales para estar alegre y beber, por lo que decidió comer bastante y beber  simultáneamente. as bebidas que ingirió /ueron a base de !odJa con cocacola y hab"a comido bastantes bocaditos endul2ados. +/ecti!amente, al inicio no sintió el malestar que antes hab"a tenido al ingerir bebidas alcohólicas, pero después de dos o tres horas, y habiendo bebido y comido bastante, empe2ó a sentir quema2ón y picor en la cara, enrojecimiento de los ojos, palpitaciones, aumento del pulso, dolor de cabe2a, todos los signos y s"ntomas compatibles con el /enómeno de R/lushingS 0rubor o bochorno). +mpe2ó a sentir somnolencia, quedándose luego dormido. $ la maCana siguiente se le!antó ya sin los s"ntomas anteriores, pero empe2ó a tener aquellos s"ntomas y signos de la llamada resaca 0Rhango!erS), sintiéndose mucho mejor después de habérsele puesto por !"a endo!enosa glucosa al 1? @.

8ASES MOLECULARES a inducción del sistema itocromo &F>?, puede producir una alterada e/icacia terapéutica de /ármacos, ya que, la no acelerada tasa de hidro*ilación, puede incrementar la inacti!ación o acrecentar la tasa de e*creción de los /ármacos. +n otros casos, la inducción del sistema de itocromo &F>? puede producir e/ectos colaterales inesperados e indeseables de agentes terapéuticos, debido a una incrementada /ormación de metabolitos que pueden acusar injuria celular, si son producidos en concentraciones su/icientes. Ina de las caracter"sticas de los sistemas de itocromo &F>?, es que un *enobiótico  puede inducir la acti!idad del itocromo &F>? particular que lo metaboli2a. &rácticamente cada especie de itocromo &F>? puede ser inducido por uno o un grupo de compuestos en  particular. i un compuesto induce un determinado itocromo &F>?, inmediatamente dicho compuesto se metaboli2ará más rápido, pero también otros compuestos que son E5

metaboli2ados por dicho itocromo &F>?, también se metaboli2ará más rápido. +sto es, la inducción de un citocromo &F>? por una droga puede estimular por si mismo el metabolismo de ella o de otras drogas que son sustratos del itocromo &F>? inducido. a consecuencia de ese metabolismo acelerado, es en general, una eliminación acelerada de una droga en el organismo. +sto e*plica !arias de las interacciones medicamentosas o de otro tipo que se conocen. $unque el etanol puede producir !arios e/ectos sobre otros *enobióticos, un e/ecto bien estudiado ahora, es que induce un itocromo &F>? particularP el &F>? #+ +ste citocromo tiene las siguientes caracter"sticas en cuanto a inductores, supresores y sustratos, según el siguiente esquema S"*r(sor(s2 Dietéticos 8onetil =sotiocianato

P5@ 4EL I'+"#$or(s2 Iso crónico de +tanol $yuno

S"s$r$os2 $lcoholes $cetona$nilina &iridina ;en2eno 8enol %etracloruro de carbono Dihaloetanos %ricloroetileno  '-'itrosodietilamina +teres $cetomino/en alotano etc, etc.

a $dministración crónica de etanol incrementa la tasa de eliminación de !arios /ármacos, tales como mepro!amato, pentobarbital, aminopirina, tolbutamida, propanolol, ri/ampicina y testosterona. a administración crónica de etanol a ratas causa una proli/eración del ret"culo endoplasmático del intestino delgado superior y del h"gado. +s bastante conocido que el metabolismo del etanol en el organismo humano, puede seguir di!ersas !"as, siendo las más importantes las siguientes 1. 7"a de la acti!idad de las en2imas alcohol deshidrogenasa y la acetaldehido deshidrogenasa, mejor llamada aldeh"do deshidrogenasa. EE

#.

&or el sistema llamado <+, sistema microsomal o*idante del etanol, el cual es dependiente del citocromo &F>? #<= y que produce acetaldehido, cuyas caracter"sticas ya se han descrito.

4. &or la catala2a, que en ciertas circunstancias puede comportarse como una pero*idasa y  produce también acetaldeh"do. a más importante es la primera, pero la segunda también inter!iene y cobra importancia, cuando se consume grandes cantidades de etanol. +n las ra2as orientales se ha descrito que tienen una /recuencia ele!ada de mutación de una isoen2ima de la aldeh"do deshidrogenasa, la $D #, que la hace inacti!a, lo cual e*plica una ele!ación del acetaldeh"do, responsable del /enómeno de R/lushingS. +l >? @ de orientales carecen de acti!idades de la $D # en el h"gado. +n ra2as blancas esto es raro. +n algunas ra2as ind"genas de hile y +cuador la carencia es del F? @ de la  población. +sto no se ha in!estigado en nuestro pa"s, por lo que no tenemos datos. &arece que el aumento del acetaldeh"do produce un aumento en la liberación de las catecolaminas adrenalina y noradrenalina de la médula suprarrenal y terminaciones ner!iosas simpáticas. +l disul/iram y la cianamida son inhibidores de la aldeh"do deshidrogenasa. Después del consumo de etanol puede producirse una hipoglicemia, la cual en parte se e*plica por disminución de la gluconeogénesis, pero también por una mayor sensibilidad a la insulina. uando se consume alcohol y no se come mucho, la hipoglicemia es mayor,  pero también , si se ingiere muchos dulces o comidas endul2adas con mucho a2úcar, se acentúa el e/ecto hipoglicémico, por que los a2úcares estimulan la producción de insulina y la presencia de etanol potencia los e/ectos de la insulina.

INTERROGANTES2 1. +*plique en qué consiste la 8ase = del metabolismo de los *enobióticos.

#. +*plique en que consiste la 8ase == del metabolismo de los *enobióticos.

4. Lué es el itocromo &F>?M EN

F. Lué signi/ican que los citocromos &F>? sean autoinduciblesM

>. =ntente dar una e*plicación, de por que en el caso 1, la seCora resultó embara2ada, aun habiendo estado consumiendo anticoncepti!os orales.

:. +n el caso # , cuál ser"a la e*plicación de que el paciente requiere de tres !eces mayor  dosis de \ar/arina para que ejer2a un buen e/ecto anticoagulanteM

5. +n el caso #, al retirar la /enilbuta2ona el e/ecto de la \ar/arina se hace más mani/iesto,  por quéM

E. &or qué el etanol es considerado como un *enobióticoM

N. aga un esquema de la !"a de metaboli2ación del etanol, por la acción combinada de las en2imas Deshidrogenasa alcohólica y aldehido deshidrogenasa.

1?. Lue es el sistema <+ de metaboli2ación del etanolM

11. Lué /ase de mataboli2ación del etanol es el sistema <+M . &or quéM

N?

1#. %iene importancia el dato, de que la persona que estaba ingiriendo alcohol, sea [aponésM &or quéM

14. $ qué se debe el /enómeno de R/lushingS en personas que ingieren bebidas alcohólicasM

1F. +n personas diabéticas, que ingieren antidiabéticos orales del tipo de la clorpropamida, al ingerir alcohol, se desencadena un /enómeno de R/lushingS. =ntente dar una e*plicación.

1>. +n la into*icación alcohólica aguda, parte de la hipoglicemia que se presenta puede ser  debida a una disminución de la gluconeogénesis. De una e*plicación bioqu"mica para esto.

1:. +n la into*icación alcohólica aguda puede presentarse acidosis láctica. De una e*plicación bioqu"mica para esto.

15. ay un dicho popular que dice Rborracho que come miel pobre de élS. uál es la e*plicación bioqu"mica para estoM

1E. i Id. alguna !e2 ha ingerido bebidas alcohólicas en e*ceso 0 que esperamos no lo haga siempre) y a la maCana siguiente ha tenido el /enómeno de la resacaP describa lo que sintió. i nunca ha e*perimentado este /enómeno 0 lo cual es plausible que as" sea,  por lo que lo /elicitamos), a!erigue en otra persona en que consisten los s"ntomas de la resaca. N1

1N. +*plique los s"ntomas de la resaca.

N#

PRACTICA Nº 13 N4

NUTRICION O8ETIVOS 1) $prender $prender a hacer hacer cálculos cálculos de los requerimi requerimientos entos diarios diarios energé energéticos ticos de una  persona. #) Dist Distri ribu buir ir los los requ requer erim imie iento ntoss ener energé géti tica cass en cant cantid idad ades es de hidr hidrat atos os de carbono, l"pidos y prote"nas que debe ingerir una persona en su dieta diaria,  para satis/acer dichos dichos requerimientos requerimientos 4)
INTRODUCCION2 omo ya se ha !isto en la parte teórica e*isten # métodos para calcular los requerimientos energéticos diarios de una persona. +n la presente práctica se emplearán los dos métodos  para dicho cálculo y luego, empleando las tablas de composición de alimentos, proponer  una dieta que satis/aga los requerimientos calculados. &ara esto se debe proceder de la siguiente manera

PRIMER METODO2 1. alc alcul ular ar las las nece necesi sida dade dess ener energé géti tica cass para para sati satis/ s/ac acer er los los requ requer erim imie ient ntos os para para el metabolismo basal. &ara esto cada persona debe saber su peso y talla. uego calculará su super/icie corporal en metros cuadrados empleando la /órmula correspondiente, Isando la tabla que se adjunta calcular las Jilocalor"as necesarias para satis/acer su metabolismo basal, según su super/icie corporal. #. alcular alcular las 3ilocalo 3ilocalor"as r"as necesar necesarias ias para satis/a satis/acer cer los requerimie requerimientos ntos correspo correspondien ndientes tes a la acti!idad /"sica que se desarrolla, de acuerdo con lo siguiente $cti!idad ligera 4? @ del metabolismo metabolismo basal basal $cti!idad moderada moderada F? @ del metabolismo basal basal $cti!idad pesada pesada  >? @ del metabolismo metabolismo basal 4. alc alcul ular ar las las nece necesi sida dade dess para para la $cció cciónn Diná Dinámi mica ca +spe +spec" c"/i /ica ca de los los alim alimen ento toss 0$D+$). &or este método, sus necesidades necesidades energéticas diarias para Id., /ueron KKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKK

SEGUNDO METODO2 1. Isando Isando la tabla tabla correspond correspondiente iente para para gasto según según acti!i acti!idade dades, s, calcular calcular las 3cal. 3cal. que se requieren diariamenteP para esto hay que hacer un cómputo de que acti!idades se reali2an en un d"a y según la tabla calcular las 3cal que se necesitan por d"a. $demás, NF

hay que tener en cuenta que los datos de dicha tabla ya in!olucran en cada acti!idad las calor"as correspondientes al metabolismo basal. #. omo la tabla da da lo que requiere requiere una una persona persona de :> :> 3g hay hay que hacer hacer una una correcc corrección ión  para el peso de cada persona en particular. particular. &or este método sus necesidades energéticas /ueron KKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKK

0#lculo de la dieta diaria 8ue habr# de consumir una persona para satis!acer sus necesidades energ+ticas. &ara esto se puede usar cualquiera de los dos datos que se calcularon en el acápite anteriorP sin embargo, se recomienda usar el obtenido en el segundo método. as necesidades energéticas diarias habrá que repartirlas en cantidades de hidratos de carbono, l"pidos y prote"nas, que se deben consumir diariamente. e recomienda usar los siguientes datos idra idrato toss de carb carboono no

:? @ de las las nec necesid sidades des energ nergét étic icaas dia diari riaas

"pidos

#> @ de las necesidades energéticas diarias

&rote"nas

1> @ de las necesidades energéticas diarias

on los equi!alente equi!alentess calóricos calóricos correspon correspondien dientes tes con!ertir con!ertir las 3cal en gramos de carbohidratos, l"pidos y prote"nas que se deben consumir diariamenteP por lo tanto, Id., deberá de consumir idratos de carbono

---------------------g ------------------- --g

ipidos

---------------------g

&rote"nas

---------------------g

uego con las tablas de composición de alimentos, hacer una dieta que satis/aga los requer requerimi imien entos tos calcu calculad lados. os. Distrib Distribuir uir las neces necesida idades des alime alimenti nticia ciass en el desay desayuno uno,, almuer2o y comida 0 cena ). DesayunoKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK   KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK  KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKK $lmuer2o KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKK  KKKK   KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK  KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKK omida KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKK  KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK  KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK KKKKKKKKKKKKK  'ota &uede Id. usar hojas adicionales adicionales si desea. desea. FORMULA PARA CALCULAR LA SUPERFICIE CORPORAL N>

S B P 54@ > H 4@  > 15 +n dond donde e

 upe uper/i r/ici ciee cor corpo pora rall en en metro metross cua cuadr drad ados os & &eso corporal en 3g.  %alla en cent"metros

 'ota on esta /órmula se puede calcular la super/icie corporal corporal con un error no mayor mayor del > @.

CUADRO 1.- 7alores normales del metabolismo basal, en 3cal  m 4  h, re/eridos a la edad del último cumpleaCos.

Aos

Ho%)r(

M"9(r

Aos

Ho%)r(

M"9(r

: 5 E N 1? 11 1# 14 1F 1> 1: 15 1E 1N #?

>4.?> >#.F >1.> FN.N FE.? F5.# F:.E F:.> F:.F F:.1 F>.> FF.F F#.N F#.# F1.:

>?.> FE.?> F:.5 F:.1 F>.5 F>.1 F4.N F#.> F1.1 4N.5 4:.: 45.: 45.? 4:.: 4:.4

#1 ## #4 #F #> 4? 4> F? F> >? >> :? :> 5? 5>

F1.# F?.N F?.5 F?.> F?.4 4N.: 4E.N 4E.4 45.: 45.? 4:.4 4>,5 4>.1 4F.> 44.F

4:.# 4:.1 4:.1 4:.? 4:.? 4>.E 4>.5 4>.> 4>.4 4F.F 44.F 4#.E 4#.F 4#.# 4#.?

 CUADRO Nº 4  .- onsumo de energ"a total en Jilocalor"as por d"a de personas que e/ectúan di!ersos di!ersos trabajos, durante ocho horas. Ofi#io astre +ncuadernador Hapatero brero metalúrgico &intor arpintero $lbaCil $serrador de madera osturera de mano osturera de máqu"na +ncuadernadora er!icio doméstico a!andera
Ho%)r(

M"9(r

#:?? 9 #E?? 4??? 41?? 4F?? 9 4>?? 4>?? 9 4:?? 4>?? 9 4:?? F5?? 9 >#?? >>?? - :??? -------------------------

------------------------------------------------------------------------------------------------#??? #1?? 9 #4?? #1?? 9 #4?? #>?? 9 4#?? #N?? 9 45??

15??

14>?

TA8LA 1< VALORES DE GASTO DE ENERGIA SEGN ACTIVIDADES  03cal  minuto )

Dormir

?.N

Gimnasia deporti!a

5.?

7estirse

1.N

%rabajo intelectual 0no modi/ica)

a!arse

#.?

argador de /rutas, !erduras 1?

;aCarse

#.>

&icapedrero

1#

%omar alimentos

1.E

$lbaCil común

F.? a E.?

aminar despacio

4.4

;arrer

F.?

aminar rápido

F.N

[ugar /utbol

1?

orrer

E.E

%rapear

:.E

7iajar en ómnibus sentado

1.F

+star de pié descansando

1.5

7iajar en ómnibus de pié

#.?

$spirar el piso

4.?

7iajar en colecti!o sentado 1.#

'adar

N.E


#.1


5.E

$tender una clase

1.#

;ailar sua!e

F.F

$/eitarse

#.?

;ailar rápido

:.? a N.?

&intar una pared

#.4

a!ar platos

#.#

&intar un techo

F.>

a!ar ropa a mano

F.#

&intar un mueble

4.?


#.1

eer en !o2 alta sentado

1.>


4.? a F.?

eer en !o2 alta parado

1.N

&lanchar ropa

#.#

+scribir a máquina rápido

#.#


>.E

+star echado sin dormir

1.?

%ocar piano

#.:

+chado !iendo %7 o leer

1.#

[ugar ping pomg o paleta

>.N

a!arse los dientes

1.N

oser a mano

1.>

%ender la cama

4.?

on/eccionar ropa

#.1

;ajar escaleras

#.>

oser a máquina de pedal

4.>

ubir escaleras

F.?

oser a máquina eléctrica

1.>

Aecoger y guardar las cosas 1.E

entado, quieto mirando %7 1.F

Gimnasia r"tmica

+scribir a mano, sentado

4.?

1.E

NOTA

+sta tabla ya incluye el gasto de metabolismo basal y la acción dinámica espec"/ica de los alimentos. orresponde a una persona de :> 3g de peso, por lo que habrá que hacer la corrección para el peso de cada persona 0 regla de tres ).

N5

TA8LA Nº 4  .- A+<+'D$='+ D=+%+%=$ &$A$ ='G+%=' D+ +'+AG=$. +dad y

&eso

%alla

'ecesidades energéticas

e*o   =n/antes ?.? 9 ?.> ?.> 9 1.?   'iCos 194 F9: 5 9 1?   7arones 11 9 1F 1> 9 1E 1N 9 ## #4 9 >? >1 9 5> 5: o más   9 1E 1N 9 ## #4 9 >? >1 9 5> 5: o más +mbara2o actancia

3cal en #F hrs. : N

:? 51

3g * 11> 3g * 1?>

14 #? #?

N? 11# 14#

14?? 15?? #F??

F> :: 5? 5? 5? 5?

1>5 15: 155 15E 15E 15E

#5?? #E?? #N?? #5?? #F?? #?>?

F: >> >> >> >> >>

1>5 1:4 1:4 1:4 1:4 1:4

##?? #1?? #1?? #??? 1E?? 1:?? más 4?? más >??

COMPOSICION DE ALIMENTOS COMUNMENTE USADOS EN AMERICA LATINA

B 0 por 1?? g de porción comestible ) $=<+'%

'6

$gua g E5.F 5>.4

eche /resca de !aca 1 ue!os de gallina # C!r'(s $tún enlatado 4 >#.: amarones F 5E.E arne cerdo > :#.4 arne de res : 5>.# arne pollo o gallina 5 :#.1 hori2os E >:.1 ora2ón de cerdo N 5:.F engua de res 1? :N.1 &an2a de res 11 E1.1 &escado /resco de agua dulce 1# 5>.5 0 &or 1?? g. de porción comestible )

alor"as :1 1FE

&rote"nas g 4.> 11.4

Grasa g 4.? N.E

%otal g >.> N.E

8ibra g ?,? ?.?

#EE E: #5? 114 #F: #5E 11> 1N1 N? NN

#F.# 15.4 14.1 #1.F 1E.1 1>.E 1F.5 1:.? 1F.? 1N.:

#?.> ?.# #4.5 #.F 1E.5 ##.E F.# 14.# #.5 1.5

--#.> 0?.?) 0?.?) 0?.?) 1.1 4.5 ?.N 1.F 0?.?)

?.? ?.? ?.? ?.? ?.? ?.1 ?.? ?.? ?.4 ?.?

NE

$A;=DA$%

$=<+'%

'6

$gua g 5:.5 E?.1 5>.4 55.E

&escado /resco de agua salada 14 &ulmón de res 1F AiCón de res 1> esos de res 1: V(($!(s :(r+(s / !%!rios $celga 15 N?.E $j" 1E EE.E ;erro 1N N#.# +spinaca #? EN.E ojas de nabo #1 N.E ojas de rábano ## E>.: ojas de remolacha #4 E:.F echuga escarola #F N4.1 %allos de cebolla #> N#.# 7erdolaga #: N1.# Hanahoria #5 EN.1 O$ros :(($!(s $pio #E N4.: ;erenjena #N NF.> ebolla 0 cabe2a ) 4? EE.1 oli/lor 41 EN.F +spárragos 4# N#.5  'abo 44 N#.> &alta 4F 55.? &epino 4> N>.F Aábano 4: N4.# Aemolacha 45 E5.E Aepollo 4E N1.F Aepollo chino 4N N>.: %omate F? N4.E Fr"$!s $lbaricoque /resco F1 EF.# &látano F# 5#.# idra F4 EE.5 iruela FF E5.? oco tierno F> E1.F Dura2no blanco F: E>.4 .N 8resa FE N?.? Granadilla FN 5:.4 Guanábana >? E4.1 Guayaba >1 E?.E ima dulce ># EN.N ima limón >4 N1.? F E:.E > E5.E : E4.> 0 &or 1?? g. de porción comestible )

alor"as 1?? N? 1#F 14F

&rote"nas g #?.E 1:.N 1:.E 1?.F

Grasa g 1.# #.? >.? N.:

%otal g 0?.?) 0?.?) 1.E ?.E

#5 4E 4# 4? 41 ># F> #? #: #E: F1

1.: 1.N #.E #.E #.F #.E 4.# 1.5 1.E #.? E.E

?.F ?.: ?.F ?.5 ?.F ?.> ?.F ?.# ?.: ?.F ?.F

>.: E.? 4.4 F.N :.# N.N E.1 F.1 F.5 >.? E.N

1.? #.# 1.1 ?.5 ?.E 1.4 4.E ?.? 1.1 ?.N ?.E

1N 15 F> 44 ## #5 1>F 11> #4 FF #E 1F #1

?.E ?.: 1.F #.E #.? ?.E 1.5 ?.5 ?.N 1.5 1.5 ?.E ?.E

?.# ?.1 ?.# ?.F ?.# ?.# 1>.E ?.1 ?.1 ?.1 ?.# ?.F ?.4

F.# F.? N.5 :.> F.F >.5 F.F 4.F >.? N.> :.1 #.> F.:

?.: ?.5 ?.E 1.? 1.# ?.E 1.E ?.F ?.5 1.? 1.? ?.> ?.:

>5 N5 F? F5 1## ># FN 4: NF :? :N 4? 4# F5 F4 >N

?.E 1.# ?.: ?.: 1.N ?.E ?.N ?.E #.F 1.? ?.N ?.5 ?.F ?.: ?.5 ?.>

?.: ?.1 ?.1 ?.# 11.N ?.# ?.1 ?.4 #.E ?.F ?.F ?.: 1.F ?.# ?.# ?.#

14.E #>.> 1?.# 11.N F.E 14.4 1#.> E.> 15.4 1F.N 15.4 E.F 5.? 1#.1 1?.N 1>.F

1.1 ?.5 1.F ?.F ?.5 ?.N ?.E 1.4 F.# 1.1 >,4 1.? ?.4 1.? ?.F ?.E

NN

$A;=DA$%

8ibra g ?.? ?.? ?.? ?.?

$=<+'%

'6

5 E  'aranja >N &apaya :? &epino :1 &era :# &iCa :4 and"a :F %oronja :> L("%i'os!s $r!ejas :: 8rijoles :5 Garban2o :E abas :N entejas 5? Galletas dulces 5: arina de trigo enriquecida 55 R!?#(s $").r#"os / *6$!'o $rracacha blanca E: amote o batata E5 &apas EE &látano EN Xuca N? B De =''D   ='$&

>E #> F# 4# 4# >: ># ## 4E

&rote"nas g ?.4 ?.> ?.E ?.> ?.F ?.4 ?.F ?.> ?.:

Grasa g ?.4 ?.1 ?.# ?.1 1.? ?.# ?.# ?.1 ?.#

%otal g 1>.# :.# 1?.> E.4 :.4 1F.E 14.5 >.4 N.:

1#.? 1#.? 11.N 1#.: 1#.: :.N

4F4 445 4:F 44N 4F? >F4

##.> ##.? 1E.? #F.? #4.5 #>.>

#.? 1.: :.# #.# 1.4 FF.?

:1.? :?.E :1.1 >E.# :?.5 #1.4

F.5 F.E 4.F >.N 4.# F.4

1#.? 1?.? 1?.> >.4 1?.1 1#.? E.: 1?.: #4.: 1?.4 #:.5 #N.> N.: #:.E

4:F 45? 4FE F4> F?: 4:F 455 4:1 411 F4E #NE #E: 4E1 4#5

5.# 11.: N.5 N.: 4.N 1?.> 1#.E N.F 1#.: :.# 1?.4 N.1 1#.: :.F

?.: 4.1 1.N 14.# N.5 1.? 1.F F.4 1.1 15.# 1.# 1.> 4.F E.#

5N.5 54.E 5>.F :N.5 5F.N 5:.1 5:.> 5F.F :?.E :>.# >?.5 >5.> 54.# >5.?

?.: 4.> :.> ?.> ?.# ?.4 ?.F 1.E ?.E ?.: ?.# 1.? ?.F ?.1

54.F :E.N 55.N :>.: :?.:

1?# 11: 5N 1## 1FE

?.E 1.4 #.E 1.? ?.E

?.# ?.4 ?.# ?.4 ?.4

#F.F #E.: 1E.# 4#.4 45.F

1.? ?.N ?.: ?.> 1.?

$gua g EF.? N#.E E5.5 N?.5 N#.? EF.F E>,F N4.: EN.#

alor"as

1??

$A;=DA$%

8ibra g ?.5 ?.> ?.F ?.: ?.F 1.N ?.F ?.# ?.#

8I8LIOGRAFIA 1. ;ernabé, [. ., &acheco, [. y $renas, . #??:. 6 +d. #??#. >. 8it2patricJ D. ;iochemistry. ab 5. Gutierre2 orrea, [. Gu"a de &racticas de ;ioqu"mica I'$. 1N:N E. 'elson D y o* <. &rinciples in ;iochemistry o/ ehninger. =7 +d. $ma2on #??F N. 'oriega &., &a2., ;ernal ., Hegarra 8., 1?.&a2 ;., Hegarra 8., [uáre2 A., árdenas . y &a2 =. Gu"a de &rácticas para $gronom"a I'$. #???. 11.&a2. ;, 'oriega &., ;ernal ., Hegarra 8., 1#. &rácticas de aboratorio. urso de ;ioqu"mica. Ini!ersidad de hile. 1N5:. 14. tryer ., ;erg [.<. y %ymoc2Jo [.. ;ioquimica. +ditorial Ae!erté. .$ ;arcelona+spaCa. #??E.

1?1

PRESENTACION &onemos a disposición de nuestros alumnos de =ngenier"a ;iotecnológica de la Ini!ersidad atólica de anta
os $utores

1?#

NOM8RE DEL CURSO2   GRUPO Nº APELLIDOS2 NOM8RES2

  

DIAHORA2  LA8ORATORIO2   NOM8RE DEL PROFESOR2  

1?4

COOCH4

740

CH4 ALA < Si'$!s! COSCoA SUCCINIL SCoA HSCoA 740 CH  COO NH3

COO < CH4 CH4

ALA < Si'$!s!

GLICINA

740

COO< CH4 CH4 CO

COO < @ ANINO CH4 LEVULINATO CH4 7ALA0 740 CH4 CO CH4 NH3 NH3

M

P

V

H M

P

V M

PROTOPORFIRINA III

M

P

M

P

M

P

M

Pro$o*orfiri&('o O>i+!s! M V

M V

N F( N N

F(rro-"(!$!s! HEMO Si'$!s! M V

CH  COO< NH3

AMINO CETO ADIPICO

<

N

M P

F(4

CO

V

M

GRUPO HEMO

PROTOPORFIRINOGENO III

 CO4

 H4O



 O4 Co*ro*orfiri'o('!s!

4 H4O

ALA  D(s;i+r!s! Porfo)ii'&('o Si'$!s! COO< COO < CH4 CH4 CH4

H3N

C

C

C

CH

A P A

 5

3 NH

M

M

P

P

Hi+ro>i%($i)i!'o Si'$!s! P P C

US

A C

Uro*orfiri'&('o III Cosi'$!s!

* A *

P A UROPORFIRINOGENO I

UC A P

M

COPROPORFIRINOGENO III

A P P A P C C C C C CH C CH C CH CH C C CH4 NH CH4 NH CH4 NH CH4 NH A C



P

PORFO8ILINOGENO

NH

CH4

H3N

M

5 CO4

FRED WEGARRA A A

P

CESAR CACERES W A

ULITWA PAREDES F

P A Ar(-"i*!  P(r, 1?F UROPORFIRINOGENO III 415

P

1?>