UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Ing. Ambiental Experiencia educativa: Bi!uimica
"RAC#ICAS DE $AB%RA#%RI%
UNIVERSIDAD VERACRUZANA LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL PRÁCTICA No. 3 && de 'a( de &)*+
PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS HOJA DE RESULTADOS NOMBRE: Ivonne FEHA: !!"Ma#"
%$Lagunes
Herrera
GRUPO:
Ing.
Ambiental
1.- Anota tus observaciones en el siguiente cuadro: REACCIÓN
OBSERVACIONES. Se formaron dos capas, no se mezclaron entre s y entre ellas !aba un una superficie a) Precipitación con etanol y acetona. blan"uecina "ue impide "ue estas se mezclen. #a capa superior tena una consistencia m$s li"uida% menos densa. &on el Ag'(, la solución tomo un color blanco y en las paredes se "uedó ad!eridos b) Precipitación de las protenas por residuos del mismo color. *ra de un color blanco opaco. metales. *n cambio con el HgCl2 , no era tan opaco
c) Precipitación salina.
el color "ue ad"uirió +tambin blanco). Concentrc!" #$ %e&' ($ n %e&' saturado 1. g .// g 02 1.3 g ./ g 12 1.0 g ./ g #a pruebe revela "ue con diferentes concentraciones se puede filtrar diferentes cantidades de protenas, mientras m$s concentrado el reactivo mayor ser$ la cantidad de protena. *n la primera prueba, la albumina, al ser agregado 0 gotas de tunstanato de sodio, produ4o un precipitado, formando una sustancia blanca. Al agregarle el $cido actico, el precipitado se desplazó !acia la parte superior del tubo y se disolvió un poco. *n la segunda prueba, al ser agregado el
d) Precipitación de las protenas por $cido pcrico, ocasiono "ue se formaran los $cidos. partculas de color amarillo en la parte superior del tubo de ensaye. Al agregarle tunstato de sodio en la primera prueba se
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forman partculas de color blanco en el tubo coloc$ndose en la parte media de este y a lo largo, con el $cido actico. Al agregarle tricloacetico a otro tubo el resultado obtenido fue un precipitado blanco. *n la 5ltima prueba, al ser agregado acido pcrico, el precipitado se desplaza !acia la parte superior del tubo y se torna de color amarillo. Al ser a7adidas 0 gotas de sulfato de cobre a m# de la muestra, la sustancia paso a tornarse de color azul y se formó un e) Prueba de 6iuret para enlaces precipitado.
peptdicos.
Al agregar m# de 'a(8 al 92, se volvió de un color morado, se observó "ue en la parte superior el color era m$s fuerte, mientras "ue el fondo era m$s claro. *l morado es el color caracterstico para la identificación de protenas. Al mezclar vigorosamente la mezcla, se obtiene un color !omogneo en todo el tubo. Al agregarle m# de
HNO3 se formaron
dos capas, una amarilla en la parte media del tubo y una capa blancuzca encima de esta capa.
&alor
f) esnaturalización
p8 e;tremos
Al poner a calentar los otros tubos, el "ue contena acido se tornó ligeramente amarillo, el "ue contenida agua se puso blanco +ligeramente, como si se !ubiera cocido) , mientras "ue a"uel "ue contena !idró;ido se tornó gelatinoso +transparente), en las paredes del tubo se podan observar burbu4as ad!eridas. #os tubos alcalinos se solubilizaron mientras "ue los tubos cuyos p8s eran $cidos, se precipitaron.
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DISCUSIÓN DE RESULTADOS. *n la realización de esta pr$ctica no se encontraron dificultades algunas y se realizó satisfactoriamente, ya "ue los resultados fueron adecuados al ob4etivo planteado en esta pr$ctica, el cual fue determinar la presencia de protenas mediante reacciones de identificación especficas, como lo fueron por el mtodo del 6iuret, por desnaturalización en cambios de p8 y temperatura, precipitación por sales, metales y $cidos.
CONCLUSIONES. #as protenas son sustancias "ue forman un grupo de compuestos con gran diversidad estructural y funcional, y se comportan como electrolitos. Son molculas compuestas por o m$s amino$cidos distintos, "ue est$n en ellas con un oren y proporción definidos genticamente para cada protena. *sta unión se da por los enlaces peptdicos. #as protenas pueden tener diferentes tipos estructuras, como lo son la estructura primaria +secuencia lineal de los residuos de los amino$cidos), secundaria +conformación "ue se repite en la cadena polipeptidica y permite la formación de !lices alfa o placas beta), terciaria +conformación tridimensional) y por 5ltimo la estructura cuaternaria +dos o mas cadenas polipeptidicas iguales o diferentes). *stas estructuras pueden romperse y ser identificadas por diferentes medios, como lo son por el mtodo del 6iuret, por un cambio en el p8 o temperatura o al ser agregados ciertos agentes "umicos especficos para romper el enlace peptdico donde se encuentre un determinado amino$cido.
CUESTIONARIO. 1.-*scriba la reacción de formación de biurea por calentamiento de la urea. CO ( NH ) 2 (¿¿ 2 )+ N H −−− →C H N O ¿ 2
2
2
2
6
4
2
.-*scriba la fórmula del comple4o de coordinación de la biurea con los iones &u<.
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2
+¿−−−→Cu ( C H N O ) ¿ C H N O +Cu 2
2
6
4
6
4
2
2
.-escribe el mtodo colorimtrico para evaluar protenas bas$ndose en la formación de comple4os tipo 6iuret. Se basa en la formación de un comple4o coloreado entre el &u< y los grupos '8 de los enlaces peptdicos en medio b$sico.
2 +¿
Cu
¿
se acomple4a con 9'8. #a
intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de protenas +enlaces peptdicos) y la reacción es bastante especfica, de manera "ue pocas sustancias interfieren. 9.-#as protenas pueden clasificarse seg5n sus funciones biológicas en: *structurales, transporte, defensa, !ormonales, factores de crecimiento, catalticas o enzimas, contr$ctiles, receptoras y de transferencia de electrones. 0.- =&u$l de las siguientes protenas tiene una estructura cuaternaria> *;plica tu respuesta. a) ?-"uimotripsina tiene m$s de una cadena polipeptidica y tiene estructura globular. b) !emoglobina @iene cuatro cadenas polipeptidicas. c) nsulina d) Bioglobina @iene estructura cuaternaria. #a mioglobina es una protena globular formada por una 5nica cadena polipeptidica de 10 residuos de amino$cidos de secuencia conocida. e) @ripsina *s una protena oligomrica, ya "ue es una enzima alosterica, la cual cuenta con el sitio activo y el sitio alosterico, en el sito activo es donde se ad!iere el sustrato y en el alosterico donde la co-enzima.
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LABORATORIO DE BIOQUÍMICA PRÁCTICA No. ) OBTENCIÓN DE CATALASA * AMILASA NOMBRE: Ivonne FEHA: !!"Ma#"
%$Lagunes
Herrera
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Ambiental
1.-=Cu función tienen las enzimas en los procesos metabólicos> #as enzimas son protenas de alto peso molecular, act5an como catalizadores y controlan los procesos metabólicos de la clula, determinando el inicio y la marc!a de algunas reacciones. .-=Cu es un cofactor o coenzima> Dn cofactor es un componente de tipo no proteico "ue complementa a una enzima +"ue es una sustancia proteica). *l cofactor tiene "ue estar presente en cantidades adecuadas para "ue la enzima pueda actuar, catalizando una reacción bio"umica. Son cofactores las coenzimas y los iones met$licos. Dna coenzima es un tipo de cofactor% es un cofactor org$nico no proteico "ue se re"uiere 4unto con la protena enzim$tica para "ue tenga lugar la reacción enzim$tica.
8(EA * F*SD#@A(S 1.- Fealice una tabla donde indi"ue la intensidad del burbu4eo "ue apreció en cada tubo de cada serie. .- Anote la temperatura observada en el calormetro para cada segundos. .- escriba los cambios de color para cada tiempo en la obtención de la amilasa salival. && de 'a( de &)*+
•
•
Precipitación de etanol y acetona: #a parte superior se aprecia de otro color
Precipitación por mtales: o
o
•
•
Ag '( Se precipita con un color blanco ligero y el otro con un blanco espeso. 8g&l: Precipita un color blanco espeso.
Precipitado por acido: 6lanco transparente y se aprecia una separación Prueba de biuret: Se aprecia un precipitado morado y espuma blanca, toma consistencia gelatinosa.
S&DSG' * F*SD#@A(S Por la desnaturalización cambió de calor ya "ue se incrementó la temperatura y cambió en su p8.
&('&#DS('*S *n la mayora de las protenas se presentó una desnaturalización debido a los incrementos en la temperatura y es por ello "ue algunos presentaron cambio de color y se separaron en dos fases.
&D*S@('AF( 1.- =Cu son las pero;isomas y "ue importancia tienen dic!os organismos celulares> *s el organelo celular en el "ue asientan algunas vas del metabolismo lipdico y de algunos amino$cidos y, de forma destacada, numerosas actividades enzim$ticas de tipo o;idasa.
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.- #a catalasa rompe el peró;ido de !idrógeno cerca de 1H veces m$s r$pido "ue la reacción no catalizada. Si la 5ltima re"uiere un a7o, =cu$nto tiempo se necesitara para la reacción catalasa-catalizador> .-escribe otros dos mtodos empleados para determinar la actividad de amilasa. M+to'o 'e L!ntner : Bide principalmente la actividad de la beta-amilasa de malta o de 4arabes y se basa en producir maltosa por un infuso de malta, !aciendo actuar una solución de enzima en solución tampón, ba4o condiciones est$ndares de tiempo y temperatura. #os grados de #intner se calculan a partir del poder reductor o contenido de maltosa del almidón convertido, determinado ya sea por el ferricianuro o por la solución de Ie!ling +91). #os grados de #intner, multiplicados por el factor 9, dan el e"uivalente en maltosa. M+to'o 'e , M,to&: Se basa en suspender 1 g de !arina en 9/ ml de solución tampón de p8 9,0-9, e incubar por 1 !ora a JK&. *sto permite "ue la enzima presente en la !arina act5e sobre el almidón y lo convierte en maltosa, la "ue se determina por el mtodo del ferricianuro. *l valor de maltosa se define como los mg de maltosa producidos por 1 g de !arina ba4o las condiciones ya se7aladas. 9.-=&u$les son los dos tipos de amilasa "ue se conocen> pancre$tica o amilopsina y salival 0.-Benciona los productos de la acción de la ?-amilasa cuando se !idroliza un enlace glicosdico de;trinas y algunos monosac$ridos
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UNIVERSIDAD VERACRUZANA LABORATORIO DE BIOQUÍMICA PRÁCTICA No. EFECTO DEL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA UREASA NOMBRE: Ivonne FEHA: !!"Ma#"
%$Lagunes
Herrera
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Ing.
Ambiental
PF*LD'@AS PF*#A6(FA@(F( 1.- =Cu es la ureasa> *s una enzima "ue cataliza la !idrólisis de urea a dió;ido de carbono y amonaco. .- *n donde se encuentra la ureasa> Se encuentran en numerosas bacterias, !ongos, algas, plantas y algunos invertebrados, as como en los suelos, como una enzima del suelo.
8(EA * F*SD#@A(S 1.- Lrafi"ue en papel milimtrico los micromoles de urea !idrolizados +ordenadas) contra el p8 o temperatura seg5n sea el caso +abscisas) y una los puntos en lnea recta.
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*l n5mero de micromoles de urea !idrolizados en cada tubo es igual a los ml de 8&l .1 ' multiplicados por 0, "ue se deduce de la siguiente forma: se necesitan dos moles de 8&l por cada mol de urea !idrolizada. As, la solución de 8&l .1 ' contiene 1 micromolesMml, por lo "ue a cada ml le corresponden 0 micromoles de urea !idrolizados.
P! 0 / H. 1 @emperatura 9 0 /
Bl de 8&l .1'
Bl de urea !idrolizados 1.1 0.0 1.0 H.0 19./ H .9 9 1.1 Lotas de 8&l .1 Bl de 8& .1 ' !idrolizados ' 1 .0 .0 1 .0 .0 .1 0 .10 H.0 .1 0
de
.- *scriba la reacción balanceada y con fórmulas desarrolladas, de la !idrólisis de la urea.
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.- *scriba la reacción "ue ocurre entre el carbonato de amonio y el 8&l durante la titulación. 8&l +ac) < 'a8&( +ac) --N 'a&l +ac) < 8&( +ac) 9.- e acuerdo con los resultados de tu grafica =cu$l es el p8 óptimo y la temperatura óptima para la ureasa> #a temperatura optima de 9 ya "ue se acerca a un p! neutro
DISCUSIÓN DE RESULTADOS Al presentarse cambio de temperatura tambin presenta tambin cambios de p!
CONCLUSIONES *l p! depende de la temperatura ya "ue en cuanto cambia la temperatura cambie el p! y "ue la temperatura indicada es 9 ya "ue obtienes un p! neutro.
CUESTIONARIO 1.- Dna enzima la cual tiene su actividad m$;ima en p8 0 e;!ibe una gran reducción de su actividad en p8 H *;plica brevemente =por "u> #a mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de p8. esviaciones de pocas dcimas por encima o por deba4o del p8 óptimo pueden afectar dr$sticamente su actividad. *s por ello "ue se !an desarrollado sistemas m$s o menos comple4os para mantener estable el p8 intracelular: #os amortiguadores fisiológicos. .-=Cu par$metros fundamentales influyen en la constante de velocidad de una reacción enzim$tica> =Cu par$metros influyen en la velocidad de una reacción enzim$tica> epende de la cantidad de enzima con sustrato suficiente. #a O ser$ igual y la saturación depender$ de la concentración de enzima .-*n las reacciones "umicas org$nicas e inorg$nicas la temperatura es incrementada m$s r$pidamente. *sta misma dirección es observada cuando una reacción de la enzima catalizada es llevada a cabo a 10, 0 y 9K &. Sin embargo
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a 90 y 0 K & la velocidad dereacción disminuye fuertemente. *;plica =Por "u sucede esto> Al principio la velocidad de reacción aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energa cintica de la energa de las molculas reactantes.Sin embargo, al final, la energa cintica de la enzima e;cede a la barrera energtica para romper los enlaces dbiles de !idrogeno "ue conservan su estructura secundaria y terciaria. 9.-ndica si los siguientes enunciados son Ialsos o Oerdaderos, si el enunciado es falso, corrgelo. a) *l valor de la Om$; es una caracterstica fundamental para cada enzima. b) *nzimas las cuales se a4ustan a la cintica de Bic!aelis-Benten no est$n directamente involucradas en cual"uier regulación de realimentación. c) *l 8&l puede actuar como un $cido general de la cat$lisis
REERENCIAS BIBLIOGRÁICAS #e!ninger, Albert. PF'&P(S * 6(CDB&A. 9 *. 6AF&*#('A. (B*LA. 0 #ALD'A E(S*, *'FCD* PQA et.al, Bioquímica de Laguna, /K edición Pe7a. 6io"umica. B;ico. #imusa. 9 8AFP*F, Bioquímica ilustrada, 1HK edición.
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