ESTUDIO FITOQUÍMICO Y FARMACOLOGICO DE LA SEMILLA DE “SACHA INCHI” Plukenetia volúbilis linneo UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Autor: MACHACA CAMPOMANES, Michael
RESUMEN El estudio estudio de los difere diferente nte compon component entes es de Plukenetia volúbilis linneo pretende aportar a las invest investiga igacion ciones es realiza realizadas das respec respecto to a estas estas espe especi cies es,, que que valid validen en cien cientí tífifica came ment nte e sus sus propiedades farmacológicas. El fin de esta investigación implica el estudio de los los dife difere rent ntes es compo compone nent ntes es a trav través és del tratam tratamien iento to del extrac extracto to hidroa hidroalco lcohól hólico ico con alco alcoho holl de 96°. 96°. Las Las prue prueba bass foto fotoqu quím ímica icass desa desarr rrol olla lada dass perm permititen en dete determ rmin inar ar que que los los componentes componentes mayoritarios mayoritarios presentes presentes en esta especie son los ácidos grasos, como: omega 3(acido linolenico) El monitoreo de la cromatografía de columna se ha realizado con la cromatografía de capa fina utilizando como eluyentes al cloroformo y etanol de 96° y el revelado con FeCl 3 al 1%; no se observan manchas en la cromatoplaca. Y en la marcha de solubilidad se observa que solo son solubles con compuestos apolares.
ABSTRACT The The stud studyy of them them diff differ eren entt comp compon onen ents ts of Plukenetia volúbilis linneo tries to reach to the invest investiga igatio tions ns realiz realized ed with with regard regard to these these species, which validate scien ientifi ific h is pharmacological properties. The end of this investigation implies the study of the different components across the treatment of the extract hidroalcohólico with alcohol of 96 °. The The phot photoc oche hemi mica call deve develo lope ped d test testss allo allow w determining that the majority present components in this species are the oily acids, since: omega 3 (acid linolenico). The monitoring of the column chromatography has been realized by the chromatography of thin cap using like elements to the chloroform and ethanol of 96 ° and the developing with FeCl3 to 1 %; spots are not observed in the cromatoplaca.
And in the march of solubility is observed that alon alone e they they are are solu solubl ble e with ith com compoun pounds ds apolares.
I. INTRODUCCIÓN Las Las posi posibi bililida dade dess de enco encont ntra rarr nuevo uevoss medi medica came ment ntos os que que aliv alivie ien n las las dife difere rent ntes es enfe enferm rmed edad ades es,, han han hech hecho o que que las las plan planta tass constituyan uno de los recursos terapéuticos de mayor uso. La gran diversidad de especies con variados principios activos, permiten hoy en día afianzar más las invest investiga igacio ciones nes con valor valor cientí científic fico, o, teniendo el antecedente etnobotánico. Muchos de estos estudios están dedicados al aislamiento de principios activos que tienen uso terapéutico como es a partir de la semilla de sach sacha a inch inchi. i. El estu estudi dio o de los los dife difere rent ntes es componentes de esta semilla pretende aportar a las investigaciones que se han podido realizar respecto a esta sta especie cie, que validen científicamente sus propiedades farmacológicas, teniendo como antecedente que esta especie es util utiliza izada da en la medi medicin cina a trad tradic icio iona nall con con el nombre de sacha maní o maní del inca. Esta invest investiga igación ción además además permit permitirá irá determ determina inarr a través de los análisis si estas especies tienen los metabo metabolito litoss secund secundari arios os para para los efecto efectoss terapéuticos.
biología floral y reproductiva del cultivo de sacha inchi (plukenetia volúbilis l.) – “eupho “euphorbi rbiace aceae” ae”,, nos indica indican n que el cultivo presenta un alto porcentaje de polinización cruzada, lo cual indica que se trata de una especie alegama, el conocimiento del tipo de reproducción es de una una suma suma impo import rtan anci cia a para para futu futuro ross trab trabaj ajos os de mejo mejora rami mien ento to genético de la especie. En el sacha inchi se observan 2 tipos de flores: son pequeñas, Masculinas: blan blanqu quec ecin inas as,, disp dispue uest stas as en racimos. Femeni Femeninas nas:: se encuen encuentra tran n en la base del racimo y ubicadas lateralmente de una a dos flores. Fruto: es una capsula, de 3.5 a 4.5 cm. De diámetro, con 4 lóbulos aristados (tetralobados) dentro de los cuales se encuentran 4 semillas. Excepcionalm Excepcionalmente, ente, algunos algunos eco tipos presentan capsulas con 4 a 7 lóbulos. Semilla: es ovalada, de color marrón
oscuro oscuro,, ligera ligeramen mente te abulta abultadas das en el centro centro y aplast aplastada adass hacia hacia el borde. borde. Según los eco tipos, el diámetro fluctúa entre 1.3 y 2.1 cm.
II. ESTUDIO BOTANICO.
FRUTO DE Plukenetia volúbilis linneo.
2.1. Plukenetia volúbilis l. Planta: trepadora, voluble, semileñosa, de altura indeterminada. Hojas: son altern alternas, as, de color color verde verde oscuro, oval – elípticas, aserruchadas y pennitinervias, de 09 – 16 cm. de largo y 06 – 10cm 10cm.. Ancho ncho.. El ápic ápice e es puntiagudo y la base es plana o semiarriñonada. Flores: los resu resultltad ados os obte obteni nido doss a través del proyecto proyecto de de tesis titulado” titulado”
SEMILLA DE Plukenetia volúbilis linneo. TAXONOMIA La clasific clasificación ación botánica botánica según Ayala, Ayala, S.A. S.A. Y Field Museum… S.A (1996) de la planta es la siguiente:
Orden : Euphorbiales Fami Famillia : Euphorbiaceae Gene Generro : Plukenetia Especie: Volúbilis Linneo Nombre científico: Plukenetia volúbilis linneo. Nombre vulgar: sacha inchi. La especie plukenetia volúbilis l . es conocida de acuerdo al idioma o lugar con los siguientes nombres: Sacha inchic Sacha maní • Maní del monte • Maní del inca • Inca peanut
o sopa sopa de res res con con maní maní), ), en los los cual cuales es reem reempl plaz aza a al maní maní..
•
•
COMPOSICION QUIMICA DE LA SEMILLA DE Plukenetia volúbilis linneo
COMPONENTES Humedad
CONTENIDO (%) García Mejía 5,63 6,37
Proteína
24,39
24,21
Grasa
43,27
51,40
Fibra
16,53
11,30
Ceniza 7,72 Carbohidratos 2,80 Fuente: García 1992 y Mejía 1997.
En épocas antiguas antiguas la semilla de Plukenetia l. se cons consid ider ero o un elem elemen ento to importante tanto en la nutrición como en la medicina, es por ello que se represento en las armas de guerra así como el los huacos.
volú volúbi bili lis s
IV. MÉTODOS DE ANALISIS 4.1 ANÁLISIS FITOQUIMICO.
2,69 4,03
III. ASPECTOS ETNOBOTANICOS Plukenetia volúbilis linneo dentro de la medicina trad tradic icio iona nall y de acue acuerd rdo o a la info inform rmac ació ión n bibliográfica e información directa de personas que utilizan estas especies en el tratamiento de difere diferente ntess enferm enfermeda edades des,, cumple cumplen n un papel papel impo import rtan ante te que que se atri atribu buye ye a los los efec efecto toss terapéuticos. Las Las semi semillllas as tien tienen en dife difere rent ntes es usos usos,, tant tanto o farmacológicos como nutritivos. En medicina tradicional, las mujeres Mayorunas, Chayu Chayuhu huititas as,, Camp Campas as,, Huit Huitot otas as Ship Shipib ibas as,, Yaguas y Boras mezclan la harina con el aceite de sacha inchi y hacen una crema especial para revita revitaliz lizar ar y rejuve rejuvenec necer er la piel. piel. Los nativo nativoss Secoya Secoyas, s, Handos Handosas, as, Amuesh Amueshas, as, Cashib Cashibos, os, Dapanahuas y Boras comen los granos tostados de Plukenetia volúbilis para recuperar la fuerza y los usan como un tónico para afrontar el trabajo duro. duro. Con el aceite aceite frotan sus cuerpo cuerposs para para aliviar los dolores reumáticos y musculares. En la nutr nutric ició ión n segú según n los los rela relato toss de las pers person onas as que que mant mantie iene nen n sus sus trad tradic icio ione ness dicen:”el dicen:”el maní del del monte se muele y después después pasa a ser cocinado para preparar como una especie especie de mazamorra llamado inchi cucho (ají con maní), lechona api (mazamorra de plátano con maní), inchi capi (sopa de gallina con maní
Se ha real realiz izad ado o la marc marcha ha foto fotoqu quím ímic ica a que que corresponde a las siguientes pruebas: prueba del del clor clorur uro o férr férrico ico (fen (fenol oles es), ), prue prueba ba de la gelati gelatina na (tanin (taninos) os),, prueba prueba de dragen dragendor dorff ff y maye mayerr (alc (alcal aloi oide des) s),, prue prueba ba de shin shinod oda a (flavonoles) (flavonoles),, prueba prueba de seliwanoff seliwanoff (azucares), (azucares), prueba de la espuma (saponinas).
4.4 MARCHA DE SOLUBILIDAD. Los ensayos de la solubilidad de un extracto, son son impo import rtan ante tess por por que que perm permitite e eleg elegir ir el solv solven ente te adec adecua uado do para para su extr extrac acci ción ón y determinar determinar su polaridad polaridad de los constituyentes constituyentes químicos.
4.3 CROMATOGRAFIA. Las técnicas cromatográficas son proced procedimie imiento ntoss fisicoq fisicoquím uímicos icos que permit permiten en sepa separa rarr los los comp compon onen ente tess de una una mezc mezcla la median mediante te el despla desplazam zamien iento to difere diferenci nciado ado de cada cada uno uno de ello elloss sobr sobre e una una sup superfi erfici cie e esta estaci cion onar aria ia por por acci acción ón de un sist sistem ema a de solventes. Las Las técn técnic ica a crom cromat atog ográ ráfi fica ca util utiliz izad ada a cromatografía en capa fina (ccf).
es: es:
V. PARTE EXPERIMENTAL 5.1. POBLACIÓN DE MUESTRA Lugar Lugar de Recole Recolecci cción ón – Pluken Plukeneti etia a volúbi volúbilis lis linneo: Oxapampa (1,814 msnm)
Estadi Estadio o y Época Época de Recole Recolecci cción: ón: Florac Floración ión (febrero a abril 2008) Cantidad de muestra: 1 Kg.
Oxapampa se encuentra a una altura de 1,814 msnm msnm,, entr entre e las las coor coorde dena nada dass geog geográ ráfifica cass 10°35'25" de latitud sur y 75°23'55" de longitud oeste del meridiano de Grennwich. Cuenta con una superficie de 982.04 km2.
5.2 OBTENCIÓN DE EXTRACTOS.
Las semillas fueron extraídas de plantas sanas, sembradas sembradas en el campo de multiplicación multiplicación de la espe especi cie. e. Se elig eligie iero ron n frut fruto os madu madurros, os, dehiscentes, antes de la cosecha programada.
5.2.1 COSECHA La cose cosech cha a del del sach sacha a inch inchi,i, bajo bajo cual cualqu quie ier r circunstancia de su uso o destino, tiene lugar generalmente cuando los frutos o capsulas se torn tornan an de un color color marr marrón ón oscu oscuro ro o negr negro o cenizo. Se realiza recolectando las capsulas con la mano, pues estas se desprenden fácilmente, algu alguna nass vece vecess se prod produc ucen en perd perdid idas as por por dehiscencia, por ello es recomendable cosechar cada 15 días. ), La cosecha se estabiliza a partir de los 14 meses. Generalmente, cuando 3se real realiz iza a la cose cosech cha, a, se encu encuen entr tran an algu alguna nass capsul capsulas as inmadu inmaduras ras,, que todaví todavía a conser conservan van algo de color verde y se dejan en el campo para la siguiente cosecha, talvez ya no se cosechen debido a su dehiscencia. Por Por lo tant tanto, o, en esto estoss caso casos, s, lo que que se recomienda es cosecharlas y poner las capsulas inmediatamente al sol, para evitar el ataque de hongos, y así no se deteriore la calidad del producto.
5.2.3 MOLIENDA El prime primerr paso es el desc descas asca cara rado do de las las semillas, semillas, para después después llevarlo llevarlo al horno horno a una temp temper erat atur ura a de 50 ° C .Una .Una vez vez seca secass la especie vegetal, someterla a molienda.
Plukenetia Plukenetia volúbilis volúbilis linneo linneo.
La planta ya es adulta y ya están listos los frutos para ser cosechados
5.2.2 RECOLECCIÓN El material vegetal se recolecto en la provincia de Oxapampa; es la provincia más extensa del depart departame amento nto de Pasco Pasco y se locali localiza za en la part parte e cent centrral del del Perú. erú. La Provi rovinc ncia ia de Oxapam Oxapampa pa esta esta confor conformad mada a por 7 distri distritos tos:: Oxap Oxapam ampa pa,, Vill Villa a Rica, ica, Chon Chonttabam abamba ba,, Huanca Huancabam bamba, ba, Pozuzo Pozuzo,, Puerto Puerto Bermúd Bermúdez ez y Palcazú. Se encuentra ubicada en la margen derecha del río río Huan Huanca caba bamb mba, a, que que divi divide de al dist distri rito to de Oxapampa con el distrito de Chontabamba.
Después de la molienda se peso de nuevo la droga vegetal y se observo que la cantidad de la muestra muestra se reduce a 600 600 g. y 400 g (cáscara (cáscara y humedad). Esta última obtención se llevo a una botell botella a de color color ámbar ámbar y despué despuéss se agrego agrego alco alcoho holl de 96°. 96°. El mace macerrado ado obte obteni nido doss corresponden a soluciones hidroalcohólicas. Que desp despué uéss de una una sema semana na (tie (tiemp mpo o míni mínimo mo de maceración) se procede a la filtración.
El pelado de las semillas es en tres etapas:
1. El fruto entero. (figura 1) 2. Las semillas con cáscara(figura 2) 3. Las semillas descascaradas(figura 3)
(Figura 3) DIAGRAMA DE FLUJO DE EXTRACCIÓN
(Figura 1)
Siembra de sacha inchi
Cosecha de Sacha inchi
Acopio de semillas
(Figura 2)
Transporte de las semillas
Selección y descascarado de semillas
Macerado de las semillas
Filtrado del macerado
Ensayos fotoquímicos
VI. ENSAYOS PRELIMNARES. Los ensayos preliminares preliminares como solubilidad solubilidad y la marcha fotoquímica que son análisis cualitativos permiten determinar la presencia de metabolitos y la cantidad de éstos en forma muy cualitativa. Los resultados de estos ensayos se aprecian en los siguientes cuadros.
6.1 MARCHA DE SOLUBILIDAD En la marcha de solubilidad obtuve lo siguiente:
En esta foto se muestra como el concentrado del extracto de Plukenetia Plukenetia volúbilis volúbilis l. son insolubles en los compuestos polares. 6.2 GLUCIDOS En los ensayos de caracterización de glúcidos se obtiene lo siguiente:
Cuadro 1
SOLUBILIDADES Plukenetia volúbilis l. SOLVENTES H2O (-) ALCOHOL 20° (-) ALCOHOL 30° (-) ALCOHOL 40° (-) ALCOHOL 50° (-) ALCOHOL 60° (-) ALCOHOL 70° (-) ALCOHOL 80° (-) ALCOHOL 96° (-) HCl (-) NaOH (+ -) ACIDO ACETICO (+ -) ETER (+ -) BENCINA (+ -) N-HEXANO (+ -) CLOROFORMO (+ +) (-) = insoluble; (+-) = poco soluble; (++) = soluble
Cuadro 2 CARACTERIZACION DE GLUCIDOS REACTIVOS RESULTADOS (+++)azucares Reacción con molish reductores (++)azucares Reacción con fehling reductores (++)azucares Reacción con benedit reductores (++)azucares Reacción con tollens reductores Reacción con (++)azucares selivanoff reductores (-) = No hay presencia de metabolitos (+) = Escasa presencia de metabolito (++) = Regular presencia de metabolito (+++) = Abundante presencia de metabolito
REACCIÓN CON MOLISH
Se torna de color amarillo
Anillo de color violeta
REACCIÓN CON TOLLENS REACCIÓN CON FEHLING Se forma un espejo de plata Precipitado de color naranja
REACCIÓN CON SELIVANOFF
Se torna color naranja
REACCIÓN CON BENEDIT
Cuadro 4 CARACTERIZACION DE COMPUESTO FENOLICOS(TANINOS) REACTIVOS RESULTADOS Reacción con FeCl3 (-) (-) = No hay presencia de metabolitos (+) = Escasa presencia de metabolito (++) = Regular presencia de metabolito (+++) = Abundante presencia de metabolito
REACCIÓN CON FeCl3
Reacción negativa por que no se torna de color azul-negruzco
En esta foto se muestra todas reacciones de glúcidos que dan positivo a la reacción. 6.3 ACEITES FIJOS En los ensayos ensayos de caracterización caracterización para aceites aceites fijos fijos se realizo realizo con el reactiv reactivo o sudan sudan III y se obtuvo lo siguiente: Cuadro 3 CARACTERIZACION DE ACEITES FIJOS REACTIVOS RESULTADOS Reacción con sudan (+++) III (-) = No hay presencia de metabolitos (+) = Escasa presencia de metabolito (++) = Regular presencia de metabolito (+++) = Abundante presencia de metabolito
6.5 PROTEINAS En el reconocimiento de proteínas se uso los reactivos: Biuret y Ninhidrina. Cuadro 5 CARACTERIZACION DE PROTEÍNAS REACTIVOS RESULTADOS Reacción con biuret ( ++ ) Reacción con (+) ninhidrina (-) = No hay presencia de metabolitos (+) = Escasa presencia de metabolito (++) = Regular presencia de metabolito (+++) = Abundante presencia de metabolito
Reacción con biuret
Sudan III
Extracto con sudan III
Aceite con sudan III
6.4 FENOLES Para el reconocimie reconocimiento nto de compuesto compuesto fenolicos fenolicos se obtuvo: Reacción positiva por que se puso de color REACCIÓN violetaCON NINHIDRINA
CARACTERIZACION DE ALCALOIDES REACTIVOS RESULTADOS Reacción con (-) dragendorff Reacción con mayer (+) (-) = No hay presencia de metabolitos (+) = Escasa presencia de metabolito (++) = Regular presencia de metabolito (+++) = Abundante presencia de metabolito REACCIÓN CON MAYER Reacción positiva por que se puso un mínimo de color violeta
Reacción donde hay una escasa presencia de metabolitos
6.6 FLAVONIODES Para el reconocimiento de flavonoides se utilizo el reactivo de shinoda, y se obtuvo lo siguiente: Cuadro 6 CARACTERIZACION DE FLAVONOIDES REACTIVOS RESULTADOS Reacción con shinoda (-) (-) = No hay presencia de metabolitos (+) = Escasa presencia de metabolito (++) = Regular presencia de metabolito (+++) = Abundante presencia de metabolito
REACCIÓN CON SHINODA
Anali naliza zand ndo o los los resu result ltad ados os de la prue prueba ba foto fotoqu quím ímica ica para para acei aceite tess fijo fijoss del del extr extrac acto to hidroa hidroalco lcohol holico ico se puede puede observ observar ar que existe existe una una gran gran cant cantid idad ad de acei aceite te fijo fijo que que con con lo recaudado en la bibliografía se puede corroborar que la especie Plukenetia volúbilis linneo si tiene presencia del omega 3.
VII. CROMATOLOGRAFÍA DE CAPA FINA. 7.1 CROMATOGRAFIA DE PAPEL 1° se corta el papel watman. Reacción negativa
6.7 ALCALOIDES En el ensayo de caracterización de alcaloides se obtuvo lo siguiente: Cuadro 7
2° luego se puentea los extractos con unos capilares sobre el papel dejando 2 cm. sobre el borde inferior.
Los resultados fueron que no hubo presencia de flavonoides.
Ensayo negativo 3° el solvente se prepara con: cloroformo y etanol 2:1.
ESTRUCTURAS: En la semilla de Plukenetia volúbilis linneo se enco encont ntró ró grasos:
los los siguien siguiente tes s ácidos ácidos
COOH H3C
COOH H3C
4° revelador: en este caso se utilizo al FeCl3 para el reconocimiento de flavonoides.
CONCLUSIONES
1. Las semilla de
Plukenetia volúbilis l.
tiene abundante cantidad de glúcidos.
2. Al experimentar experimentar para ver ver los aceites aceites fijos, esto nos explica la gran cantidad aceite omega 3 que posee esta semilla (Plukenetia volúbilis l.)
3. Al real realiz izar ar la crom cromat atog ogra rafí fía a de capa capa fina para el reconocimie imien nto de flavonoides esta resulta negativa lo que cabe deducir que tiene flavonoides. 4.
En la la march marcha a de solub solubili ilida dad, d, tene tenemo moss como como result resultado ado que que el extra extracto cto es soluble en compuestos apolares.
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