Práctica: Conteo de Esporas de
Beuveria Bassiana
Jazmín Hernández 2009033 Análisis instrumental instrumental Ing. Blanca Alicia Rodríguez Patiño Marzo 27 de 2012
Introducción. Cuando dos medios son isotónicos, el total de la concentración molar de los solutos disueltos es el mismo en ambos. Cuando las células están en una solución isotónica, el movimiento de agua hacia afuera está balanceado con el movimiento de agua hacia adentro. Un 0.9% de solución de NaCl (salina) es isotónica para las células animales.
Hipotónico viene del griego "hypo," que significa bajo, y "tonos," que significa dilatarse. En una solución hipotónica, el total de la concentración molar de todas las partículas disueltas, es menos que el de otra solución o menos que el de la célula. Si las concentraciones de solutos disueltos son menos fuera de la célula que dentro, la concentración de agua afuera es correspondientemente más grande. Cuando una célula es expuesta a condiciones hipotónicas, hay un movimiento neto de agua hacia dentro de la célula. Las células sin pared celular se inflan y pueden explotar (lisis). Si el exceso de agua no es removido de la célula. Las células con paredes celulares a menudo se benefician de la presión que da rigidez en medios hipotónicos.
Hipertónica viene del griego "hyper," que significa sobre y "tonos," que significa expandirse. En una solución hipertónica, la concentración molar total de
todas las partículas de soluto disuelto, es más grande que el de la otra solución, o más grande que la concentración el la célula. Si las concentraciones de solutos disueltos son mayores fuera de la célula, la concentración de agua es correspondientemente menor. Como resultado, el agua dentro de la célula sale para alcanzar el equilibrio, produciendo un encogimiento de la célula. Al perder agua la célula también pierden su habilidad para funcionar o dividirse. Los medios hipertónicos, como la salmuera o jarabes, han sido utilizados desde la antigüedad para preservar la comida, debido a que los microbios que causan la putrefacción, son deshidratados en esos medios hipertónicos y son incapaces de funcionar
Conteo de esporas por la cámara de Neubauer ¿Qué es una cámara de recuento y dónde se utiliza? La cámara de recuento es un aparato de precisión hecho de vidrio óptico especial. Se utiliza para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el microscopio. Las cámaras de recuento se utilizan principalmente para el análisis de sangre (recuento de leucocitos, eritrocitos, trombocitos) y recuento de células en el licor. Además las cámaras de recuento sirven para contar bacterias, esperma y esporas de hongo
Recuento de las partículas:
Técnica de recuento: En la ilustración se ve las líneas triples del sistema Neubauer mejorado.
Para que las células, que están encima o cerca de las líneas delimitación, no se cuenten dos veces o se olvidan en el recuento, hay que cumplir determinadas reglas. Se cuentan todas las células que se encuentran dentro de una definida
zona de medición. También se cuentan las células (marcadas en negro) que tocan o están encima de 2 líneas en un lado.
Objetivo Observar y realizar el conteo del hongo
Beuveria Bassiana utilizando
la cámara de
Neubauer, así también observar las formas de los espermatozoides y los linfocitos de la sangre.
Materiales
Cámara de Neubauer
Microscopio
10 ml de Sangre
Semen
Cloruro de sodio
Micro pipetas
Aza de platino
Tubo de ensayo
Tween 80 al 0.01%
Espora
Centrifugadora
Beuveria Bassiana
Metodología.
Para la realización de la practica de laboratorio, se tomaron muestras se sangre y semen. Así mismo fue necesaria una solución de Tween 80 al 100% para el conteo de esporas en la cámara de Neubauer.
Se tomo una muestra de
Beuveria Bassiana del
tubo de ensaye y se diluyo en 20
ml de agua destilada. Con el diluyente de Tween se observaron y contaron las esporas de
Beuveria Bassiana utilizando
la cámara de Neubauer manipulado por
el microscopio (40x).
También se tomo una muestra de sangre y se realizaron tres lavados con NaCl, se centrifugó con un tiempo estimado de 3 minutos, posterior a la centrifugación, se extrajo una muestra colocándolo en la cámara de Neubauer para la observación en el microscopio.
Se coloco una pequeña muestra de semen en el portaobjeto y se observo en el microscopio (40 x) las diferentes formas del espermatozoide. . Resultados. De acuerdo a la metodología es necesario el conteo de las esporas de Bassiana ,
Beuveria
y a continuación se realizan los siguientes cálculos para determinar el
numero de esporas
Fórmula: X1 + X2 + X3 + X4 + X5 = X/5 = X X1 + X2 + X3 + X4 + X5 = X/5 = X X/2 = X
(V)(25)(10000)(V) = V esporas/ml
93 + 120 + 98 + 104 + 103 = 518/5 = 103.6
+ 102 + 99 + 127 + 81 + 102 = 511/5 = 102.2 205.8/2 = 102.9 (102.9 esporas)(25)(10000)(20 ml) = 514 500 000 esporas/ml.
Conclusiones Con la realización de la práctica se logro observar las diferentes formas de los espermatozoides y los linfocitos de la sangre. Así mismo con la cámara de Neubauer se logro realizar el conteo de las esporas del hongo
Bibliografia http://www.maph49.galeon.com/memb1/isotonic.html http://es.scribd.com/doc/55063448/Camara-de-neubauer
Beuveria Bassiana.
