1. Objetivos 1.1 Objetivo general
Obtener etanol a partir de melaza como materia prima mediante fermentación realizada por la Saccharomyces cerevisiae. 1.2 Objetivo específicos
Utilizar el método para determinación de azucares azuc ares reductores totales con DNS (acido 3,5-dinitrosalicilico) y el método de conteo celular por cámara de Neubauer, como herramientas para el seguimiento del proceso de fermentación y determinar si hay problemas durante el proceso
2 Diagrama de flujo de proceso. Conteo con Cámara de Neubauer
Preparar una disolución para la medición en la cámara
La concnetracionrecomendada de es 10^6 celulas/ml, asi se logra un estimado correcto de celulas
Si la concentracion es de menos de 250000 celulas /m, los resultados obtenidos son poco confiables
Usando una micropipeta, se toma 10 µL de la disolución
Se tiñe la muestra con azul de metilo, el cual tiñe las células muertas.
Si la concentracion es superiro a 2,5 millones de celulas/ml, el error de conteo y el esfuerzo se multiplicaran
Se coloca la cámara en el microscopio y se la cubre con un cubreobjetos, dejando un espacio para introducir la muestra
Se acerca la punta de la micropipeta, y se deposita la muestra, asegurándose de llenar toda la cámara y no derramar muestra
Se posiciona la cámara en el microscopio. Se única con el objetivo 4X, y se incrementa el aumento hasta llegar a 40X
Calculo de número de células aplicando al formula de #Células=células contadas/volumen. Si es necesario se hace la corrección por disolución
Si la célula toca el límite de arriba o el limite izquierdo se cuenta, caso contrario si está tocando el límite inferior y el limite derecho
Se ubica el cuadrante superior izquierdo y se procede a contar las células. Se leerá cada división del cuadrante en zigzag empezando de la esquina superior izquierda
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3. Muestra de cálculos [1]: 3.1. Se usará la fórmula para diluciones:
= 1 Al fijar la concentración de células a medir en la cámara de 106 células/mL, se tiene C2. V2 será un volumen al que se aforará para obtener la concentración deseada, para este caso se tomará igual a 10 mL. Para el primer conteo, se tiene C1, dependiendo de cómo se haya inoculado de levadura. 3.2. Con estos datos se calcula V1, se toma este volumen del inóculo y se afora hasta V2 con agua destilada. 3.3. También se usará la fórmula de la cámara de Neubauer, esta es:
) = ú é ó ( á Como el número de células es un promedio de los 4 cuadros grandes en los que se cuentan, y el volumen de la cámara es de 10-4 mL, entonces se tiene que:
ú é∗ 10 ó () = 2 4 Para hallar la concentración en el inóculo, se reemplaza la concentración de la ecuación (2) en la ecuación (1), siendo esta C2, obteniendo así que:
ú é∗ 10 ó ó() = ∗ 4 3.4. Con la concentración hallada, se calcula un estimado de cuanto se espera que tenga el inóculo en la próxima medición, se toma como C1 y se repite el procedimiento desde el punto 3.1. Bibliografía: [1]. http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara-Neubauer.pdf
