Ingeniería Sanitaria – Bioensayo semillas de lechuga
INRODUCCION El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba estática de toxicidad aguda (120 horas de exposición) en el que se pueden evaluar los l os efectos fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas. Como puntos finales para la evaluación de los efectos fitotóxicos, se determina la inhibición en la germinación y la inhibición en la elongación en la raíz. Es importante destacar que durante el período de germinación y los primeros días de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos en los que la presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores externos adversos. Si bien L. sativa no es una especie representativa de ecosistemas acuáticos, la información generada a partir de esta prueba de toxicidad proporciona datos acerca del posible efecto de los contaminantes en las comunidades vegetales cercanas a las márgenes de cuerpos de agua contaminados, siendo también una especie interesante de considerar por su importancia desde el punto de vista hortícola. Por otra parte, es de fácil y rápida germinación por lo que es posible desarrollar la prueba en pocos días. Este bioensayo de toxicidad ha sido recomendado y aplicado por diferentes organismos de protección ambiental para la evaluación eco toxicológica de muestras ambientales y co mpuestos puros, además de la evaluación del efecto fitotóxico de plaguicidas sobre especies no blanco, necesarios para el registro de estos compuestos (OECD, 1984; Wang, 1987; USEPA, 1989). En la incorporación de esta prueba en una batería de bioensayos es importante considerar el compromiso entre la sensibilidad de la especie L. sativa, el reducido tiempo de exposición de la prueba con semillas, los bajos costos asociados y que no requiere equipamiento sofisticado, en particular en la aplicación a muestras ambientales o en el monitoreo de procesos de detoxificación, saneamiento, control de efluentes. Objetivo
Determinar la toxicidad de las muestras de agua utilizando la germinación de semillas de lechuga (Lactuca sativa).
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1. Materiales
4 placas de Petri (de plástico de 100 x 15 mm)
80 semillas de lechuga.
8 discos de papel absorbente, cortados para encajar dentro de las placas Petri (2 por placa).
4 pipetas para transferencia (10 ml)
Una probeta (cilindro graduado) de 100 ml.
4 cuadrados de papel de estaño (lo suficientemente grandes como para envolver las placas Petri)
Cinta adhesiva
Pinzas
Mondadientes.
Regla
Agua embotellada no carbonatada, para el control normal.
Solución madre de sal para el control positivo.
2 botellas para las muestras, de 1 litro cada una, etiquetadas diciendo Muestra #1 y Muestra #2.
2. Preparación de las muestras. a.
Control normal.- Para cada experimento, es necesario saber cómo crecerán o reaccionarán las semillas de lechuga cuando el agua no está contaminada por substancias tóxicas. Los controles Normales, o Negativos son muestras especiales de agua que no producen reacciones tóxicas pues el agua es de buena calidad. Para el control normal se hará uso de agua envasada.
b. Control positivo.- Las soluciones de control positivo están diseñadas para obtener resultados similares de los que se obtendrían con agua contaminada. Se preparara una serie de soluciones de agua salada, utilizando sal común de mesa (NaCl). Estas soluciones nos permitirán observar cómo reaccionan las semillas al agua contaminada. c.
Solución madre.- Esta solución consta de 11 gramos de sal común diluida en agua envasada no carbonatada.
d. Muestra 1.- La muestra 1, será el agua de rio, la cual ha sido recogida del rio Rímac en la intersección con la Av. Faucett. e.
Muestra 2.- Esta muestra será el agua potable, el cual se recogerá del caño.
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3. Desarrollo de la prueba.
Colocar en cada caja Petri dos discos de papel de filtro
Marcar correctamente cada caja con la dilución correspondiente, así como la fecha y hora de inicio y término del bioensayo
Saturar el papel de filtro con 4 o 5 ml de la dilución evitando que se formen bolsas de aire
Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas, dejando espacio suficiente entre las semillas para permitir la elongación de las raíces.
Tapar las placas Petri y envolverlas con papel estaño o aluminio, luego resguardarlas en un lugar fresco y seguro.
Terminado el período de exposición (120 horas), se procederá a contar y apuntar el número de semillas germinadas en cada placa.
Se saca cada semilla germinada, mide y apunta el largo de cada raíz en una hoja de datos.
4. Cálculos.
Largo total Largo promedio
=
% de variación en crecimiento de la raíz
% de variación en la germinación
=
Nº semillas germinadas
Largo total de la muestra
-
Largo prom. Del control normal
X 100
Largo promedio del control normal
=
# Semillas germinadas muestra
#semillas germinadas Control normal
X 100
Largo promedio del control normal
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5. Resultados. Los resultados, tanto de las semillas germinadas así como de la longitud de estas, en cada muestra se muestran en el siguiente cuadro. Así como el promedio y la variación del crecimiento de las raíces en comparación a la muestra del control normal. Control Normal
Agua
Positivo
Rio (M1)
Potable (M2)
1
31.0
9.0
29.0
20.0
2
28.0
9.0
27.0
16.0
3
23.0
9.0
24.0
17.0
4
23.0
8.0
26.0
23.0
5
25.0
11.0
25.0
20.0
6
20.0
11.0
26.0
19.0
7
21.0
11.0
24.0
21.0
8
15.0
8.0
28.0
19.0
9
19.0
9.0
29.0
22.0
10
25.0
8.0
26.0
19.0
11
25.0
7.0
23.0
9.0
12
28.0
12.0
26.0
4.0
13
25.0
7.0
18.0
0.0
14
19.0
9.0
20.0
0.0
15
24.0
6.0
23.0
0.0
16
21.0
0.0
0.0
0.0
17
20.0
0.0
0.0
0.0
18
28.0
0.0
0.0
0.0
19
0.0
0.0
0.0
0.0
20
0.0
0.0
0.0
0.0
23.3
8.9
24.3
17.4
-61.7
4.3
-25.4
-16.7
-16.7
-33.3
PROMEDIO Δ Long. Raíz Δ Germinación
6. Conclusiones.
El agua de las muestras 1 muestra una diferencia positiva de crecimiento con respecto al control normal, esto puede ser debido a la presencia de nutrientes, los cuales han sido favorables para la germinación y crecimiento de las semillas.
El control positivo es agua con una sustancia que es tóxica para la semilla de l echuga ya que las raíces crecieron un 33 % menos que el agua pura (control normal).
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7. Panel fotográfico.
Probeta graduada de 100 ml.
Pipetas de transferencia de 10 ml
Placas Petri plásticas y semillas
Placas Petri y papel absorbente
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Soluciones
Control normal (agua envasada)
Solución madre
Control positivo
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Muestra 1 (agua de rio)
Muestra 2 (agua potable)
Distribución de las semillas en las placas Petri.
Envolviendo las placas con papel aluminio.
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