BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Populasi mikroorganisme di alam sekitar kita sangat besar dan komplek. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba berada disekitar kita. Mikroorganisme ada yang menguntungkan dan ada yang merugikan. Mikroorganisme yang merugikan yaitu mikroorganisme yang dapat menyebabkan infeksi, menghasilkan racun dan merusak bahan dengan cara menyebabkan pembusukan, menguraikan bahan-bahan. bahan-bahan. Terdapatnya mikroorganisme dalam sediaan farmasi, makanan, minuman sebagai kontaminasi, kemungkinan disebabkan oleh cara pengolahan yang tidak bersih dan sehat, cara pengepakan yang kurang bagus, cara penyimpanan yang tidak baik dan lain-lain. Sedangkan sumbernya kemungkinan dari udara, tanah, air, perala tan yang digunakan dalam pengolahan, atau pekerja yang melakukan proses pembuatan. Makanan, minuman, obat tarisional, sediaan non steril, serta kosmetik merupan suatu sediaan yang berasal dari hewan, tumbuhan, mineral, maupun suatu sediaan yang berasal dari hewan, tumbuhan, mineral, maupun dari zat-z at kimia sintetik. Pada umunya sediaan-sediaan tersebut, diproduksi oleh industri secara besar-besaran dan biasanya bias anya memakan waktu yang cukup lama dalam produksi, penyimpanan, penyimpanan, distribusi dan akhirnya sampai ke tangan konsumen. konsumen. Jadi kemungkinan dapat terjadi pertumbuhan mikroba di dalamnya. Jenis pengujian yang di perlukan untuk masing-masing masin g-masing produk tidak sama. Untuk produk makanan di uji cemaran cemar an mikrobanya. Uji angka lempeng total merupakan tolak ukur mikrobiologis untuk mengetahui kebersi han pengolahan dan penanganan produk makanan dan minuman maupun produk lainnya yang juga merupakan suatu indikasi layak atau tidak lakanya suatu produk untuk di di gunakan.
Berdasarkan hal tersebut maka perlu dilakukan praktikum uji mikrobiologis terhadap produk sediaan farmasi non steril. B. Maksud percobaan Untuk mengetahui dan memahami cara-cara pengujian dan perhitungan kuantitas cemaran mikroorganisme dari sediaan non steril. C. Tujuan Percobaan a.
Menentukan angka lempeng total (ALT) bakteri dan kapang/khamir sampel obat non steril (obat bismuthi subnitrat, magnesi corbonas, lactosum)
b.
Menentukan jenis cemaran bakteri patogen dari sampel obat non steril (obat bismuthi subnitrat, magnesi corbonas, lactosum)
D. Prinsip percobaan Prinsip percobaan ini yaitu pengujian mikrobiologi terhadap sampel dengan metode angka lempeng total bakteri dan identifikasi bakteri.
BAB II
TINJAUN PUSTAKA
A. Teori umum Mikroorganisme ada yang menguntungkan dan ada yang merugikan. Mikroorganisme yang merugikan yaitu mikroorganisme yang dapat menyebabkan infeksi, menghasilkan racun, dan merusak bahan dengan cara menyebabkan pembusukan atau menguraikan bahan-bahan. Tepatnya, terdapat mikroorganisme dalam sediaan farmasi., makanan, minuman, sebagai kontaminasi. Kemungkinan disebabkan oleh cara pengolahan yang tidak bersih dan tidak sehat., cara pengepakan yang kurang bagus, cara penyimpanan yang tidak baik, dan lain-lain. Sedangkan sumbernya mungkin dari udara, tanah, air, peralatan, yang digunakan dalam pengolahan, pekerjaan yang melakukan proses pembuatan. Pemeriksaan mirobiologi terhadap produk-produk yang langsung dimakan dilakukan terhadap bakteri-bakteri penyebab infeksi dan keracunaan makanan seperti yang disebutkan di atas dan juga terhadap angka lempeng total sebagai indikasi tentang kebersihan dan sanitasi pada proses pengolahan produk-produk tersebut. Kualitas mikrobiologis dari obat-obatan merupakan suatu masalah yang penting untuk diperhatian. Obat-obatan steril sudah lama dikenal syarat kualitas mikrobiologisnya, tetapi preparat farmasi non steril baru beberapa tahun terakhir ini mendapat perhatian dan mulai diadakannya persyaratan, pada umumnya obat-obatan di buat oleh industry secara besar-besaran, sehingga sediaan tersebut memakan waktu yang lamadalam penyimpanan, dan hal ini selama dalam penyimpanan atau pendistribusiannya kemungkinan dapat terjadi pertumbuhan mikroba didalamnya. Adanya mikroba di dalam obat-obatan non steril tidak dikehendaki karena dapat menyebabkan perubahan-perubahan
dalam karakterorganoleptis, perubahan atau kemunduran, dan bahkan aktivitas didalam obat yang bersangkutan. Selain itu, mikroba yang tumbuh dapat berbahaya. Baik patogen maupun non patogen, bila jumlahnya dapat menimbulkan hal-hal yang merugikan. Penyakit penyakit yang timbul dapat mengakibatkan terjadinya infeksi dari bakteri patogen ataupun bakteri penghasil racun. (DJide, 2003) B. Uraian bahan 1. Bismut subnitrat ( FI edisi III hal 118 ) Nama resmi
: BISMUT SUBNITRAT
Nama lain
: Bismuthi subnitras
Pemerian
: Serbuk hablur renik, putih, tidak berbau, tidak berasa.
Kelarutan
: Praktis tidak larut dalam air dan dalam pelarut organik, larut sempurna dalam asam klorida p dan dalam asam nitrat p.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya Khasiat
: Adstringen pencernaan
2. Magnesii carbonas ( FI edisi III hal 352 ) Nama resmi
: MAGNESII CARBONAS PONDEROSUS
Nama lain
: Magnesium karbonat berat
Pemerian
: Serbuk putih, tidak berbau, tidak berasa
Kelarutan
: Praktis tidak larut dalam air, larut dalam asam encer disertai terjadinya buih yang kuat.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik Khasiat
: Laksativum
3. Lactosum ( FI edisi III hal 338 ) Nama resmi
: LACTOSUM
Nama lain
: Saccharum lactis
BM
: 36,30
Pemerian
: Serbuk hablur putih, tidak berbau rasa agak manis.
Kelarutan
Larut dalam 6 bagian air, larut dalam 1 bagian air mendidih, sukar larut dalam etanol (95%) p, praktis tidak larut dalam kloroform p dan dalam eter p
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik Khasiat
: Zat tambahan
4. Aquadest ( Ditjen POM, 1979 ) Nama resmi
: AQUA DESTILLATA
Nama lain
: air suling
Pemerian
: cairan jernih, tidak berbau, tidak berasa, tidak berwarna
5. Media PW ( Pepton water ) Komposis
: a. Pepton water casein 10,0 b. Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate 9,0 c. Potasium dihydrogen phosphate 1,5 d. Sodium chloride 5
6. Media SDA ( sabouraud dextrose agar ) Komposisi
: a. My cological peptone 10 gram b. Glucose 40 gram c. Agar 15 gram
7. Media PCA ( Plate count agar ) Komposisi
: a. Pepton from casein 5,0 b. Yeast extraet c. D-glukose 1,0 d. Agar-agar 14,0
8. Media TSB ( Tryptic Soy Broth ) Komposisi
:
a. Peptone from casein 17,0 b. Pepton from soymeal 3,0 c. D (+) glucose 2,5 d. Sodium chloride 5,0 e. Di-potasium hydrogen phosphate 2,5 9. Media VJA ( Vogel Johnson Agar ) Komposisi
: a. Pepton from casein 10,0 b. Yeast extract 5,0 c. Di-potasium hydrogen phosphate 5,0 d. D(-)mannitol 10,0 e. Lithium chloride 5,0 f.
Glycine 10,0
g. Phenol red 0,025 h. Agar-agar 13 10. Media CETA ( Cetrimid Agar ) Komposisi
: a. Gelatin 20,0 b. MgCl 1,4 c. Potassium sulfat10,0 d. Cetrimide 0,3 e. Agar 13,0 f.
Sodium chloride 5,0
g. Dipotassium phosphate 15,0 11. Media EMBA ( Eosin Methylene Blue Agar ) Komposisi
: a. Pepton 10,0 b. Lactose 10,0 c. Eosin 0,4 d. Methylen blue 0,06 e. Agar 15,0
f.
Dipotassium hydrogen phosphate 2,0
12. Media SSA Komposisi
: a. Peptone 10,0 b. Lactose 10,0 c. Citrate 10,0 d. Sodium thiosulfate 8,5 e. Ammonium iron (III) citra green 0,0003 f. Neutral red 0,025 g. Agar-agar 12,0
13. Media TCBSA Komposisi
: a. Pepton from casein 5,0 b. Pepton from meat 5,0 c. Yeast extract 5,0 d. Sodium citrate 10,0 e. Sodium thiosulfate 10,0 f.
Oxbile dried 5,0
g. Sodium cholate 3,0 h. Sucrose 20,0 i.
Sodium chloride 10,0
j.
Iron (III) citrate 1,0
k. Thymol blue 0,04 l.
Bromothymol blue 0,04
m. Agar-agar 14
BAB III
METODE KERJA
A. Alat dan bahan yang digunakan 1. Alat yang di gunakan a. Tabung reaksi b. Otoklaf c. Batang pengaduk d. Cawan petri e. Lampu spiritus f.
Erlenmeyer
g. Ose bulat h. Rak tabung i.
Sendok tanduk
j.
Spoit 1 ml dan 3 ml
k. Beaker gelas l.
Incubator
m. Koloni counter n. Spidol o. Botol pengencer p. Timbangan analitik q. Korek api r.
Kertas label
s. Kapas 2. Bahan yang di gunakan a. Aquadest b. Sediaan antasida c. Media PW d. Media SDA e. Media PCA f.
Media TSB
g. Media VJA h. Media SSA i.
Media EMBA
j.
Media CETA
k. Media TCBSA B. Prosedur kerja 1. Penyimpanan media a. Di siapakan alat dan bahan b. Di timbang media PW sebanyak 12,75 gram dilarutkan dalam 500 ml air, di panaskan hingga larut. Dimasukkan dalam wadah, kemudian wadah disumbat dengan kapas dan disterilkan dalam otoklaf. Demikian pula untuk media lainnya, jumlah yang di buat sesuai kebutuhan jumlah mahasiswa yang praktikum. 2. Pengenceran sampel a. Disiapkan alat dan bahan b. Diukur 2 gram sampel kemudian di masukkan secara aseptis ke dalam 9 ml aquadest steril lalu dihomogenkan. c. Disiapkan tabung reaksi pengenceran 10ˉ² dan 10ˉ³ yang telah berisi 9 ml air steril. Dari tabung pengencer 10ˉ¹ diambil 1 ml sampel lalu dimasukkan ke dalam tabung pengencer 10ˉ², kemudian diambil 1 ml dari tabung pengencer 10ˉ² dimasukkan kedalam tabung 10ˉ³ 3. Uji ALT ( Angka lempeng total ) a. Diambil masing-masing 1 ml pengenceran 10ˉ¹´ 10ˉ²´ 10ˉ³ kemudian dimasukkan ke dalam cawan petri yang berisi PCA b. Di ambil masing-masing 1 ml pengencer 10ˉ¹` 10ˉ²` 10ˉ³ kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi SDA. c. Dihomogenkan, diberikan memadat, kemudian dimasukkan ke dalam inkubasi selama 1 x 24 jam. 4. Uji cemaran bakteri patogen a. Disiapkan media SSA, VJA, TCBSA, EMBA, CETA.
b. Di ambil ose bulat, dicelupkan ke dalam tabung pengenceran yang paling keruh, digoreskan ke masing-masing media secara aseptis. c. Dimasukkan ke dalam incubator selama 1 x 24 jam, kemudian diamati.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Data pengamatan 1. Uji angka lempeng total Media
Jumlah koloni 10ˉ¹
10ˉ²
Hasil 10ˉ³
SDA
TBUD
TBUD TBUD
-
PCA
TBUD
TBUD TBUD
-
Uji identifikasi bakteri dengan media PW dan TSB Hasil Media
10ˉ¹
10ˉ²
10ˉ³
PW
-
-
-
TSB
-
-
-
2. Uji media selektif EMBA
TCBSA
SSA
-
-
-
CETA -
VJA -
B. Pembahasan Pada percobaan kali ini, dilakukan uji mikrogiologis pada sampel obat tersebut. Pengujian yang dilakukan meliputi ALT bakteri dan kapang/kamir serta uji patogen terhadap bakteri Escherechia coli, Salmonella thyposa, Pseudomonas aeruginosa, vibrio cholera, dan Straphylococcus aerus menggunakan media selektif. Dalam percobaan ini digunakan media PW dan TSB dalam uji angka lempeng total (ALT). Sedangkan pada uji cemaran bakteri digunakan media PW dan TSB sebagai media enrichment, yang selanjutnya diuji pada media selektif EMBA, SSA, VJA, CETA, TCBSA. Prinsip dari metode pengujian angka lempeng total adalah jika sel mikroba yang masih hidup ditambahkan pada medium agar, maka sel mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dengan mata apapun menggunakan bantuan colony counter . Metode ini merupakan cara yang paling efektif untuk menghitung jumlah koloni dengan alasan sebagai berikut : 1. Hanya sel yang masih hidup yang dapat dihitung 2. Beberapa jenis mikroba dapat dihitung sekaligus 3. Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba karena koloni yang berbentuk mungkin berasal dari satu sel yang penampakan pertumbuhan fisik. Selain keuntungan tersebut, adapula kelemahan dari metode ini,diantaranya yaitu: 1. Hasil hitungan tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang sebenarnya, karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni 2. Medium dan kondisi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbeda
3. Mikroba ynag ditumbuhkan harus tumbuh pada medium padat dan membentuk koloni kompak, jelas, dan tidak menyebar. 4. Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi beberapa hari untuk menghitung jumlah koloni. Uji cemaran bakteri yang dilakukan menggunakan PW sebagai media inkubasi selama 24 jam, pada tabung reaksi tidak menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri secara kasat mata. Untuk proses lebih lanjut suspense pada sedia PW digores pada media selektif, yaitu EMBA, SSA, VJA, Dan TCBSA, dan suspense pada media TSB digores pada media CETE. Media selektif ini kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. terjadi pertumbuhan bakteri, namun tidak sesuai dengan cirri spesifik yang terdapat pada semua media selektif yang digunakan. Pada penentuan angka lempeng total bakteri digunakan tiga pengencer 10ˉ¹, 10ˉ², dan 10ˉ³ dengan media PCA dan SDA. Dengan bantuan colony counter , dapat dilihat adanya pertumbuhan bakteri pada media PCA yaitu 5, 6, Dan 28, tetapi tidak dapat dihutung sebab tidak memenuhi persyaratan perhitungan ALT yaitu pada range 30-300 koloni. Sedangkan
pada
media
SDA,
dinyatakan
negative
mengandung
kapang/kamir sebab tidak ditemukan adanya pertumbuhan koloni.
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan Dari hasil pengujian menggunakan sampel obat non steril, maka dapat disimpulkan bahwa: 1. Angka lempeng total untuk bakteri dan kapang/khamir adalah TBUD (tidak boleh untuk dihitung) karena tidak memenuhi persyaratan range jumlah koloni. 2. Tidak ditemukan adanya cemaran bakteri patogen melalui uji media selektif untuk bakteri Escherechia coli, salmonella thyposa,
pseudomonas
aeruginosa,
vibrio
cholera, dan
straphylococcus aereus. B. Saran Adapun saran untuk percobaan selanjutnya, praktikun sebaiknya memperhatikan kesterian alat-alat yang digunakan, serta senantiasa bekerje secara aseptis agar tidak terjadi kontaminasi pada saat pengujian berlangsung.
DAFTAR PUSTAKA Djide, Natsir, dkk, 2008. “ Mikrobiologi farmasi terapan “. Fak MIPA-UH: Makassar, Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia adisi III, Jakart: Depkes RI Pakadang, S.R. 2017. Penuntun praktikum mikrobiologi farmasi. Makassar. Poltekkes Kemenkes Makassar. Pratiwi, Sylvia T. 2008. Mikrobiologi farmasi, fakultas farmasi, universitas Gadjah Mada : Yogyakarta. Sari,
Revireski,
2003 ,
Analisis
mikrobiologi
produk
farmasi,
reskisari.blogspot.co.id/2013/05/analisis-mikrobiologi-produkfarmasi.html diakses pada 30 september 2017.
http://rv-
