Informe n°1: Micropiteta y Microscopia. Pamela Espinoa ! "#rbara Marambio ! $odri%o &ep'lveda &ep'lveda ! (rancisca )ribe.
viernes, 30 de septiembre de 2016
Profesor El*as +eiva
ndice -betivos/////////////////////////////// -betivos//////////////////// //////////// / /////3 $esmen////////////////////// $esmen//////////// ///////////////////// /////////// 1
////3 Introdccin/////////////////////////////// //// Materiales//////////////////////////////// ////. Procedimiento E4perimental////////////////////////// $esltados//////////////////////////////// ///..10 5iscsin//////////////////////////////// ////..12 onclsin//////////////////////////////// ////12 $eferencias//////////////////////////////// ///..13
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$esmen 5entro de este informe, se podr# apreciar m#s a fondo dos instrmentos de laboratorio my importantes dentro del #mbito cient*fico, no de estos tiene la fncin de tomar vol'menes my pe7e8os para preparar disolciones, meclas, mestras etc. En este caso es la micropipeta, la meor 9erramienta para tomar vol'menes e4actos. +a otra 9erramienta importante tiene la fncin de poder amplificar im#%enes my pe7e8as para el oo 9mano, el microscopio, estos dos instrmentos siempre ser#n fndamentales en cal7ier investi%acin o trabao en n laboratorio. Pero cabe destacar 7e 9ay mc9as m#s 9erramientas 7e se san dentro del #mbito cient*fico pero en este caso definiremos las partes de la micropipeta y el microscopio, s mec#nica, como sarla, ss cidados, ss sos, etc.
-betivos • • • • •
onocer el so correcto de la micropipeta. onocer las distintas propiedades de la micropipeta y ss partes. onocer las diferentes medidas de volmen 7e peden ser tomadas con la micropipeta. prender sobre las partes de n microscopio. $econocer diferentes tipos de c;llas a trav;s del so del microscopio.
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Introdccin +a micropipeta es n instrmento de laboratorio empleado para absorber y transferir pe7e8os vol'menes de l*7idos y permitir s maneo en las distintas t;cnicas cient*ficas. E4isten micropipetas manales, en las 7e el volmen a aspirar se fia %irando n botn en s parte sperior 7e est# conectado a n sistema anal%ico de confirmacin de volmen, y atom#ticas, en las cales dic9o sistema es di%ital.
, absorbiendo el mismo volmen en todas ellas. ctalmente, se reconocen f#cilmente en el mercado dos de las meores marcas 7e e4isten: Eppendorf y ?ic9iryo.
Partes de la Micropipeta 5entro de las partes de na micropipeta encontramos las si%ientes: 1. "otn plsador 2. @ornillo del botn plsador 3. $eda dentada de %radacin del volmen. . ono de la pipeta. A. E4plsor de pnta. 6. Pnta o BtipC descartable
-peracin del E7ipo
•
@;cnica de pipeteo para l*7idos claros:
a) &e presiona el botn sperior savemente 9asta el primer tope. b) &e smer%e la pnta, en la solcin 7e se necesita pipetear estando se%ros 7e la pnta
este bien colocada y 7e no 9aya nin%'n tipo de residos entre la pnta y el cerpo de la pipeta. c) Manten%a la pipeta verticalmente mientras toma la solcin. d) )bi7e la pnta de la pipeta en la pared interior del vaso donde se depositar# la mestra en
n #n%lo de 10 a 0 %rados. Presione el botn savemente 9asta el primer tope. e) Para descartar la solcin de la pnta presione el botn 9asta el se%ndo tope. f) 5escarte las pntas tiliando el eyector 7e traen las pipetas. •
@;cnica de pipeteo para l*7idos con alta viscosidad:
a) Presione el botn sperior 9asta el primer tope. b) &mera la pnta en la solcin =2D3 mm> y selte el botn despacio. +a pnta tiene 7e
estar bien llena. c) 5escarte el l*7ido de la pnta presionando savemente el botn sperior 9asta el primer
tope. d) +e%o de la pel*cla creada, se procede a tomar la mestra normalmente.
El so de micropipetas permite emplear distintos l*7idos sin tener 7e lavar el aparato. Par a ello, se emplean pntas desec9ables, de pl#stico, 7e 9abitalmente son est;riles. stas var*an se%'n la cantidad 7e se re7iere pipetear.
@ipo de Micropipeta P10 P20 P100 P200 P1000
Folmen 0,A Gl D 10 Gl 0,A Gl D 20 Gl 10 Gl D100 Gl 20 Gl D200 Gl 100 Gl D1000 Gl
@ipo de pnta marillas o blancas marillas o blancas marillas marillas les o blancas
5entro de los instrmentos de laboratorio 7e se tilian en la bio7*mica, el microscopio es no de los m#s importantes al realiar na investi%acin a fondo de or%anismos, enimas, virs, etc. El
A
microscopio es n instrmento 7e nos permite amplificar el sentido visal a trav;s de ;l para ver na ima%en 7e a simple vista del oo 9mano no se pede detectar por7e es my, my diminto. El oo 9mano tiene la capacidad visal de ver 9asta na distancia de 0,2mm, con n microscopio pede amentar s %rado de visin 9asta n valor de A00nm. E4isten dos tipos de microscopios 7e tilian investi%adores en los laboratorios, los de ptica =fncin de l> y el;ctrico =fncin de electrones>, la diferencia de estos dos es my obvio, el de fncionamiento de l es a base de ondas 7e emite la l para poder observar con m#s e4actitd la ima%en 7e se desea ver, este microscopio se sa mc9o m#s 7e el el;ctrico por7e este tiene 7e sar los electrones para ilminar la mestra y por lo tanto s l*mite de resolcin es menor al ptico.
Partes del microscopio ptico. El microscopio ptico est# formado por dos sistemas: I> El sistema mec#nico, 7e le da soporte y estrctra al microscopio: +os elementos b#sicos 7e lo componen son el pie, 7e soporta el microscopio, la colmna, donde se apoyan las pieas restantes, el tbo, 7e es el elemento de nin entre el oclar y el revlver =piea %iratoria 7e contiene los obetivos>, la platina, sobre la 7e se apoya la preparacin a observar, y los tornillos microm;trico y macrom;trico 7e se tilian para enfocar la preparacinH el macrom;trico se sa para los astes %resos y el microm;trico para el aste fino o de precisin. II> El sistema ptico, 7e permite la formacin de la ima%enH est# formado por: •
5os sistemas de lentes 7e amplifican la ima%en del obeto: 1) +entes obetivos. +os lentes de 4, 104 y 04 reciben el nombre de obetivos secos
y el de 100, obetivo de inmersin, debido 7e en los primeros no se tilia n medio entre la mestra y el lente, solo 9ay aire, pero, en 100 se coloca aceite de inmersin. 2) +entes oclares, se encentran en la parte sperior del tbo, por lo %eneral tienen
n amento de 4, 104 o 124. •
ondensador, 7e concentrar la l sobre la preparacin y permitir re%lar s intensidad.
•
5iafra%ma o irisH 7e permite re%lar la cantidad de l 7e sale de ;ste.
•
nillo porta filtro, 7e permite adicionar n filtro de color al condensador para destacar estrctras de inter;s en la preparacin.
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)&- 5E+ MI$-&-PI1) olo7e el microscopio en na posicin cmoda sobre na sperficie plana. @melo
siempre del brao o colmna. &i desea cambiar la posicin del instrmento lev#ntelo y ?lo arrastre por el mesn. 2) l inicio del laboratorio, es conveniente c9e7ear la limpiea de los diferentes lentes antes
de comenar la observacin. +os lentes deben limpiarse con solcin limpiadora de microscopio y pa8elos desec9ables o n pa8o 9medecido con ilol o l*7ido limpiador de microscopio. 3) Encienda la l#mpara, bae el condensador y abra el diafra%ma completamente. 4) &i se tilia aceite de inmersin, el lente obetivo de 1004 debe limpiarse al finaliar la
observacin. 5) ando finalice la observacin bae la platina, retire la preparacin. +impie el obetivo y la
preparacin con n pa8o 9medecido con ilol. pa%e la l#mpara y enrolle el cordn en el pie del microscopio.
Materiales J
Materiales Micropipeta Puntas Vaso de precipitado Microscopio óptico Azul de metileno Pinzas Cebolla Muestras de bacterias
Saliva Bisturí Portaobjetos Cubreobjetos Etanol Pañuelos desechables orula Aceite de
Procedimiento e4perimental Micropipeta
1. @ome y vac*e los si%ientes vol'menes de a%a: 2 ml, 1.A ml, 1.3 ml, 2A0 l, 200
l, 0 l, 1 l, 2 l. 2. @ome y vac*e los si%ientes vol'menes de alco9ol: 2 ml, 1.A ml, 1.3 ml, 2A0l, 200
l, 0 l, 1 l, 2 l. 3. @ome y vac*e los si%ientes vol'menes de aceite: 2 ml, 1.A ml, 1.3 ml, 2A0l, 200
l, 0 l, 1 l, 2 l. a> @omar la micropipeta adecada para el volmen solicitado =7e no sea mayor al m#4imo especificado en la micropipeta>
b> olocar na pnta neva 7e corresponda al volmen de la micropipeta, seleccionar el volmen deseado. c> Para sccionar se debe presionar 9asta el primer tope en el aire y le%o smer%ir la micropipeta en el l*7ido y soltar el botn con savidad. En el caso del Klicerol es m#s complicado de pipetear, ya 7e es n l*7ido m#s viscoso 7e el a%a. Por esto se debe 9acer na Lmedicin de prebaL para 7e no se prodca n error en la medicin, con esta medicin se crea na capa de l*7ido en las paredes internas de la pnta, y as* resltan resltados m#s e4actos.
on el etanol se debe tener cidado en el momento de pipetear, ya 7e pede saltar li7ido dentro de la micropipeta, esto se debe a 7e es menos viscoso 7e el a%a. d> Para soltar, se debe bicar la pnta en la pared interior del recipiente y apretar el botn 9asta el primer tope. pretar 9asta el se%ndo tope para eliminar los restos 7e pedan 7edar en la pnta. e> $emover la micropipeta por arrastre sobre la sperficie del recipiente. 5esec9ar la pnta para tiliar otro l*7ido.
Microscopio
1.- Microscopia Básica.
&e nos facilita na mestra de ". sbtilis la cal observaremos en el microscopio con los diferentes obetivos. 2.- Microscopía célula eucariota vegetal. Epidermis de cebolla con tinción.
)tiliando na 9oa de bistr* y pinas, se e4trao n troo pe7e8o de la epidermis de cebolla =tela de cebolla> y se coloc n portaobetos. &e a8aden dos %otas de al de metileno y se cbri con n cbreobetos. on el microscopio se observ s estrctra cellar a diferentes obetivos 3.- Microscopía célula eucariota animal: élulas descamativas de mucosa bucal con tinción.
on na torla rasparemos savemente la cara interna de la meilla de n compa8ero. +e%o, colocaremos na %ota de a%a destilada sobre n portaobeto y depositaremos el prodcto obtenido en la torla, e4tendi;ndolo con precacin. %re%aremos 2 %otas de al de metileno y pondremos n cbreobetos de#ndolo caer savemente sobre la mestra del portaobeto. -bservar con todos los obetivos del microscopio.
$esltados Microscopia Básica.
B. Subtilis: Se aprecia los bacilos en forma de "tubos"
en color morado.
Microscopía célula eucariota vegetal. Epidermis de cebolla con tinción.
Cebolla: Se nota a simple vista la estructura de las capas de cebolla
Microscopía célula eucariota animal: élulas descamativas de mucosa bucal con tinción.
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Saliva: Células
5iscsin. En la primera parte de reconocimiento de la micro pipeta, se debe esclarecer la relevancia de bscar 11
la micro pipeta correcta 7e se%'n la tabla pede ser P donde 4 indica el valor m#4imo 7e soporta en micro litros y 7e est#n cate%oriadas por colores en el mercado. ?o se pede obviar adem#s 7e es n instrmento anal%ico y por ende e4iste n error instrmental y n error asociado a 7ien est# midiendo, en la actalidad ya e4isten micro pipetas di%itales mc9o m#s precisas a las tiliadas en el laboratorio. En la parte de reconocimiento del so del microscopio aparte de diferenciar el microscopio electrnico del de l, no ptico como s nombre lo indica sa lentes para amentar, en cambio no electrnico sa n rayo de electrones 7 rebota en los obetos de acerdo a esa informacin la pantalla crea na ima%en del obeto. +a diferencia en canto al amento 7e se pede lo%rar es 7e en no de l pede lle%ar 9asta A00.000 amentos comparados con los 1000 amentos de los meores microscopios pticos, esto debido a 7e la lon%itd de onda de los electrones es mc9o menor 7e la de los fotones.
onclsin Este caso a modo e4perimental se llevaron a cabo las actividades de calibracin y so de la micro pipeta en diferentes l*7idos y le%o el so del microscopio. &i bien las im#%enes captadas por el microscopio en el primer caso los bacilos, las capas de la cebolla y de la saliva, aparte de identificar diferentes ran%os de operacin las im#%enes obtenidas feron my claras denotando la precisin en el so del microscopio. Pero a pesar de ello se deben considerar las casas posibles con problemas en las im#%enes: •
Ferificar la ilminacin correcta
•
Ferificar los lentes del obetivo est;n limpias
•
omprobar 7e entre el diafra%ma de campo y el de abertra no e4ista nin%'n filtro difsor
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El centrado del revolver portaobetos debe ser el correcto
•
$evisar la limpiea de todo el sistema ptico
•
•
•
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omprobar 7e el aceite de inmersin sea el sficiente, sin brbas ni impreas, y 7e no sea florescente. se%rarse de 7e el obetivo est# bien enroscado. Ferificar el %rosor del cbreobetos, portaobetos y medio de montae, 7e es decisivo, sobre todo en medianos y %randes amentos. Es importante, i%almente, no colocar dos cbreobetos sperpestos. +a montra del condensador debe estar bien central
$eferencias. •
9ttp:NNOOO.e7iposylaboratorio.comNsitioNcontenidosmo.p9pQitR1031 12
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K*a de +aboratorio n°1: Maneo de micropipetas.
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K*a de +aboratorio n°2: Microscopia.
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