Acción de la Lipasa Pancreática Introducción La lipasa es una enzima de la clase de las hidrolasas, que se usa en el organismo para disgregar los lípidos (grasas) de los alimentos de manera que se puedan absorber. Su función principal es catalizar la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol. Las lipasas se encuentran en gran variedad de seres vivos, al igual que las esterasas hidrolizan grasas y aceites en los procesos digestivos; también están involucradas en el rompimiento y movilización de los lípidos dentro de las células de un organismo y de la transferencia de lípidos de un organismo a otro. Las lipasas, cuya denominación bioquímica es acil-esterhidrolasas, son enzimas relativamente específicas en su actividad catalítica y algunas de ellas se distinguen por su alta estereoespecificidad. Poseen un sustrato específico y tienen una óptima actividad en un amplio rango de temperatura, esto las hace unos biocatalizadores versátiles. Las lipasas son enzimas lipoliticas que hidrolizan las uniones esteres de los trigliceridos, estas enzimas se encuentran ampliamente distribuidas en plantas, procariontes y eucariontes especialmente en animales, en vertebrados se encuentrantres isoenzimas tejido especificas (páncreas, hígado, intestino)se a
encontrado que estas enzimas están altamente asociadas a quilomicrones, y proteínas de bajo peso molecular. En estas proteínas se encuentra una región altamente conservada, la cual esta alrededor de una serina, la cual participa junto con residuos de histidina y acido aspartico en la estabilización de la molécula esta misma región se encuentra en otras lipasas procariotas como lecitin-colesterol aciltransferasa la cual cataliza ácidos grasos transferidos entre la fosfatidil colina y el colesterol. La función principal de esta lipasa gástrica es ayudar a la absorción de grasas. Hay que destacar que la producción de jugo gástrico está controlada por dos mecanismos: * nervioso (sensaciones visuales, gustativas, etc),hormonal * a través de la hormona Gastrina.
Fundamento Las lipasas hidrolizan triacilgliceroles de ácidos grasos, diacilglicerol, monoacilglicerol y glicerol, y son conocidas como hidrolasas de triacilglicerol acilo. Su principal función, es la hidrólisis de grasa, rompiendo y modificando los enlaces éster de lípidos y sus derivados. Algunos miembros de la familia de las lipasas como la Lipoproteína lipasa (LPL), lipasa hepática y lipasa pancreática poseen importantes funciones en el metabolismo lipídico. Lipasa pancreática es sintetizada por las células acinares pancreáticas que es secretada en el lumen intestinal y ayuda en la absorción intestinal de ácidos grasos de cadena larga como los triglicéridos, mientras que la LPL y lipasa hepática son criticas para la transformación de lipoproteínas circulantes. La lipasa hepática juega un papel en la absorción de colesterol HDL y se sintetiza exclusivamente en el hígado, donde se encuentran predominantemente. Recientemente, LPL ha sido implicado en la captación celular de lípidos, posiblemente formando un puente entre lipoproteínas de plasma y en los receptores de superficie de las células. Las lipasas son moléculas de dominio simple y tienen una organización estructural. El sitio activo de las lipasas contiene la triada catalítica: Ser105-His224-Asp187, común en todas las hidrolasas, donde Ser es el nucleófilo, His es el residuo básico, y Asp o Glu es el residuo ácido. El sitio activo consiste en una serina, histidina y una tríada de ácido carboxílico, que pueden estar protegidos por una cubierta, en donde la posición cerrada o abierta determina la conformación de la enzima, si está inactiva o activa, respectivamente. Objetivos * Aplicación y manejo adecuado de técnicas de laboratorio para la identificación, aislamiento de enzimas y determinación de la actividad enzimática * Entender de forma practica una parte importante del proceso digestivo que tiene lugar en el intestino delgado en el cual la lipasa pancreática consigue la hidrólisis de triacilgliceroles a ácidos grasos. Materiales Vaso de precipitado Varilla de vidrio Gotero 4 Tubos de ensaye 4 pipetas Baño maría Mechero Tripie Tela de asbesto
Gradilla Termometro Reactivos Fenolftaleína CarbonatoSódico .2M Bilis Pancreatina Leche de vaca Agua destilada Método Añadir unos 30 ml de leche de vaca al vaso de precipitado y adicionar unas gotas de fenolftaleína. Agitar e irle añadiendo, gota a gota, disolución de carbonato sódico 0,2 M, agitando continuamente con la varilla, hasta que el líquido adquiera una coloración rosa persistente, de intensidad moderada. Se numeran, a continuación, cuatro tubos de ensayo y se les añade las siguientes cantidades (en ml) de los reactivos indicados: Reactivo | 1 ml | 2 ml | 3 ml | 4 ml | Leche de vaca | 5 | 5 | 5 | 5 | Agua destilada | 1,5 | 1 | 0,5 | 0 | Bilis | 0 | 0,5 | 0 | 0,5 | Pancreatina | 0 | 0 | 1 | 1 | Agitar todos los tubos hasta total homogeneización, y situarlos en el baño termostático a 37 ºC, observando lo que sucede en ellos a lo largo del tiempo. Anotar las decoloraciones que tengan lugar, y el tiempo en que se producen, contado desde el comienzo de la reacción. 30ml de leche 3 gts de Fenolftaleína Carbonato sódico Adicionar Adicionar hasta lograr un tono rosa 5ml de leche de la preparación anterior Agua destilada Bilis Pancreatina ml= 1.5 1 .5 0 ml= 0 .5 0 .5 ml= 0 0 1 1 Poner a baño maría a 37ºC hasta cambio de color Diagrama Resultados Tubos | Uno | Dos | Tres | Cuatro | Solución Inicial | Rosa | Rosa | Rosa | Rosa |
Adición de los reactivos | Rosa | Rosa | Amarillo | Amarillo | Después
del calentamiento | Rosa | Rosa pálido | Amarillo con sedimentación | Amarillo con floculación | Conclusiones Se pudo comprobar la acción de la Pancreatina y bilis en conjunto y por separado, las cuales son capaces de hidrolizar a ácidos Grasos los triglicéridos contenidos en la leche, mediante la adicción de un indicador, fenolftaleína en este caso, el cual nos permitió obtener un cambio de color, de rosa a amarillo, al presentarse la reacción en la solución, además se obtuvo floculación en el tubo en el cual se adicionaron las dos sustancias. La bilis no tiene un efecto de hidrólisis si se adiciona sola y la pancreatina causa el mismo efecto sola, que en conjunto con la bilis. Glosario Hidrolasas: es una enzima capaz de hidrolizar un enlace químico Triacilglicerol: triglicéridos, triacilglicéridos o triacilgliceroles son acilgliceroles, un tipo de lípidos, formados por una molécula de glicerol, que tiene esterificados sus tres grupos hidroxilo por tres ácidos grasos, saturados o insaturados. Esterasas: son enzimas que catalizan reacciones de hidrólisis (fase I de la biotransformación) de ésteres carboxílicos (carboxiesterasas), amidas (amidasas), ésteres de fosfato (fosfatasas), etc. Estereoespecificidad: si reactivos que difieren sólo en su estereoisometría son transformados preferentemente o exclusivamente en productos que se diferencian también sólo en su estereoisomería. Esto es, la estereoquímica de los reactivos de partida condiciona la estereoquímica de los productos resultantes. Lipoliticas: Que causa lipolisis, desintegración o división química de las grasas Isoenzimas: son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero que
catalizan la misma reacción química. Quilomicrones: son lipoproteínas sintetizadas en el epitelio del intestino caracterizadas por poseer baja densidad (inferior a 0,94) y gran diámetro, entre 75 y 1.200 nm. Serina: (abreviada Ser o S) es uno de los veinte aminoácidos componentes de las proteínas codificado en el genoma. Histidina: es un aminoácido esencial (no puede ser fabricado por el propio organismo y debe ser ingerido en la dieta). Es uno de los 22 aminoácidos que forman parte de proteínas codificadas genéticamentes se abrevia como His o H. Acido aspartico: o su forma ionizada, el aspartato (símbolos Asp y D) es uno de los veinte aminoácidos con los que las células forman las proteínas. En el ARN se encuentra codificado por los codones GAU o GAC. Presenta un grupo carboxilo (COOH) en el extremo de la cadena lateral. Su fórmula química es HO2CCH(NH2)CH2CO2H. Bibliografía 1. VALENZUELA, SANCHUEZA J & NIETO S; 2002; El Uso De Lipidos Estructurados En La Nutrición: Una Tecnología Que Abre Nuevas Perspectivas En El Desarrollo De Productos Innovadores; Rev Chil Nutr Vol. 29, N°2 2. WONG, H. DAVIS, R. THURENLL;1994; Lipoprotein Lipase Domain Function; The Journal of Biological chemetry. Vol. 269, No. 14, Issue ofApril 8, pp. 1031910323. 3. WONG, H. SCHOTZ, M.; 2002; The lipase gene family; Journal of Lipid Research, Vol. 43, 993
