Hidrolisis de Las Grasas Por Accion de La Lipasa Pancreatica II

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA

2AO DE LA INVERSI3N PARA EL DESARROLLO DESARROLLO RURAL 4

UAP ESCUELA ) CURSO

)

DOCENTE DOCENTE )

1ARMACIA / BIOQUIMICA BIOQUIMICA II IN*+ IN*+ MILA*ROS MILA*ROS QUE,ADA QUE,ADA

CICLO ) VI INTE*RANTES) BRICEO BALMACEDA .ROSMER/ BERNAL LEON C/NT0IA PAOLA RAMOS RIOS /O0ANA

Univ Univer ersi sida dad d alas alas Per Perua uana nass-fa farm rma aia ia ! "i# "i#$u $u%m %mi iaa- i il# l# VI VI

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HIDROLISIS DE LAS GRASAS POR ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA I.

OBJETIVOS •

•

•

II.

Determinar los meq-acido grasos liberados por acción de la pancreática. pan creática. Observar como es que actua y que efectos trae las sales biliares sobre el aceite. Observar la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulación titulación de los acidos acidos grasos liberados utilizando en la titulación usando la base de idró!ido de sodio

FUNDAMENTO TEORICO

"as grasas de la dieta incluyen triglic#ridos$ fosfol%pidos y colesterol. "os trigleceridos trigleceridos son una rica fuente de calor%as$ y constituyen el mayor porcenta&e de las grasas incorporadas en la la dieta. "a digestión de las grasas comprenden la idrolisis de estos triglic#ridos a acidos grasos libres y monogliceridos para que puedan ser captados por las c#lulas. 'ste proceso comienza en el estomago$ mediante la lipasa gástrica que es secretada por las c#lulas principales que tambi#n tambi#n secretan secretan pepsina. 'sta lipasa gástrica es especialmente importante en el reci#n nacido para digerir la grasa de lece. "a lipasa pancreática es esencial para la absorción normal de las grasas$ pues en casos en que el páncreas no funcione en mas de un ()*$ la grasas no se absorbe. "as sales biliares tambi#n tienen un rol importante en la digestión y absorción de las grasa no se absorbe. "as sales biliares tambi#n tienen un rol importante en la digestión y absorción de las grasas. +on sintetizadas$ a partir del colesterol$ en el %gado en Univ Univer ersi sida dad d alas alas Per Perua uana nass-fa farm rma aia ia ! "i# "i#$u $u%m %mi iaa- i il# l# VI VI

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cantidad apro!imada de ,)) a ))mg. Por dia$ y e!cretadas e!cretadas en la bilis &unto con los aminoácidos glicina y taurina. "a mayor parte de las sales biliares con&ugadas se absorben nuevamente en el ilion$ y luego de entrar a la vena porta$ estan su&etas a la llamada circulación enteroepatica/ 0intestinoigado1. Por este proceso$ un 2)* de las sales biliares que llegan al ileon es reabsorbidos$ como consecuencia$ unos ,)) a )) mg. De sales biliares son e!cretadas e!cretadas en la materia fecal por dia$ a pesar de que sean 3ó 4 gr. gr. 5ue pasan a trav#s tra v#s del circulo enteroepatico mucas veces por dia. 'sto permite que pueda entrar al duodeno 0 a trav#s de la via biliar principal unos ,) a 3) gr. De sales biliares por dia para participar activamente$ en la digestión de los alimentos. +i el ileon esta enfermo o se lo a removido en una operación$ se produce una signi6cativa perdida de sales biliares por materia fecal. 'sto puede ocasionar una mala absorción de las grasas y de las vitaminas solubles en grasas$ como las vitaminas A$ D y 7. "os productos de la digestión y los trigleceridos 0acidos grasos libres y monogliceridos1 pueden luego penetrar en la celula intestinal 0 enterocito1. All% son sintetizados nuevamente y envueltos para ser liberados a la circulación y distribuidos por todo el organismo.

III+ III+ MATE MATERI RIAL ALES ES.. EQUI EQUIPO POS S / REA REACT CTIV IVOS OS Univ Univer ersi sida dad d alas alas Per Perua uana nass-fa farm rma aia ia ! "i# "i#$u $u%m %mi iaa- i il# l# VI VI

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Aceite neutralizado 8enoltaleina 9aO: ;u" +ales biliares =* en bu" p: ?@ Páncreas =* en bu p:? @ Pipetas

VI+ PROCEDIMIENTO E7PERIMENTAL Univ Univer ersi sida dad d alas alas Per Perua uana nass-fa farm rma aia ia ! "i# "i#$u $u%m %mi iaa- i il# l# VI VI

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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA Primero cogemos (+ Primero

tres recipientes$ recipientes$ de los cuales agregamos cada muestra de aceite$ bilis y el páncreas .

Aceite

'!traemos =ml de aceite

Agregamos bu"

,. ogemos ogemos un un recipi recipiente ente y coloca colocamos mos a la la bilis bilis

;ilis

'!traemos =ml de sales biliares

ABadimos ).=mol>" de bu
3. 'n este caso traba&aremos con las páncreas$ la cual será e!tra%da una cierta cierta cantidad cantidad para e!perimentación e!perimentación.


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pancreas

'!traemos =ml de páncreas$ luego colocamos en otro recipiente la cual aBadimos bu"

4. para cada cada muestr muestra a de páncre páncreas$ as$ sales sales biliar biliares es y aceite. aceite. se va a medir el p:.

MUESTRA DE PANCREAS Antes de medir cada muestra$ se tiene que calibrar el pecimetro$ para cada muestra 'n esta imagen podemos observar que estamos agregando 9aO: a la muestra de páncreas para suber el p:$ y asi llegar asta p:?@

Agregamos poco a poco 9aO: a la muestra de páncreas$ empezó a aumentar el p:$ luego logramos nuestro ob&etivo p:? @


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MUESTRA

DE ACEITE

Observamos la muestra de aceite$ medimos su p:$ la fue el inicio (.=,$ como no llego a p:?@ tuvimos que aBadir unas cuantas gotas de 9aO: para alcanzar el p:?@

+e agrega 9aO: que es una base$ solo se aBade a la muestra en caso que no llegue a p:?@

Por ultimo ab%amos agregado 3 gotas de 9aO: a la muestra de aceite y nos dio dio como resultado apro!imadamente Univ Univer ersi sida dad dde alas alas Per Perua uana nass-fa farm rma aia ia ! "i# "i#$u $u%m %mi iaa- i il# l# VI VI p:?@.=,

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uestra de aceite

MUESTRA DE SALES

"a muestra de la sales biliares tubo p:?(.2( inical la cual no llego al p:?@

BILIARES

Por esta razón ab%amos aBadido 9aO: como resultado se obtuvo apro!imadamente p:?@.)3

C. 'n este procedi procedimient miento o utilizarem utilizaremos os 4 tubos de ensayo para para las siguientes muestras páncreas$ sales biliares y aceite.


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Tu"# N=(

Agremos aceite neutralizado =ml E ,ml de agua destilada E Cml de panceatina

ABadimos ,ml de sales biliares en

TUBO N=5 '!traemos =ml de aceite neutralizado E Cml de pancreatina

uestra de aceite neutralizado

ABadimos ,ml de bu" ).=mol>"


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Fambi#n Fambi#n vamos agregar agregar ,ml de agua destilada

Despu#s agregamos Cml de pancreatina

TUBO N= B( 'n el tubo 9G ;= aBadimos lo siguienteH de agua Univ Univer ersi sida dad d alas alas 3ml Peru Peruan anas as-fa -farm rma aia ia ! "i#$ "i#$u% u%mi mia a-- il il# # VI destilada

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,ml +ales biliares en bu
ABadimos Cml de pancreatina

Una vez que agregamos cada solución$ al tubo ;, empezamos agitar

TUBO N=B5

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'n el tubo 9G ;, aBadimos ,ml bu"

tubo 9G ;, agregamos 3ml de agua destilada Agitamos la muestra para que se pueda disolver bien

Cml de pancreatina

IV+ IV+

PROC PROCED EDIM IMIE IENT NTO O E7PE E7PERI RIEM EMNT NTAL AL Preparar tubos de ensayo segIn como se indica en la siguiente tabla.

MUESTRAS Aei@e neu@raliad# ml =

@u"#s ;=

,

;,


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Buer f#sfa@# ?+( m#lL F0<ml

=

Sales "iliares en "uer ml A'ua des@ilada ml Panreas ml

,

,

, C

3 C

•

• •

≡≡≡

≡≡≡

=

≡≡≡

, ≡≡≡

, C

≡≡≡

, ≡ ≡≡

3 C

:omogenizer y de&ar incubar por = ora a 3(G 0baBo maria1 Agregar 3 gotas de fenoltaleina y omogenizar "uego titular con 9aO: ).)C9 0empezar con los tubos blancos1$ asta una coloración rosa$ anotarel gasto en ml.

RESULTADOS Jestar Jestar los blancos de sus respectivos tubos =y ,$ para obtener el gasto de cada sistema. K=? K;=? K=-K;=? K,? K;,? K,-K;,?

Calular l#s milie$uivalen@es de ada sis@ema+ eq-ácido graso? Lol. 9aO: M09aO:1 eq-ácido graso = ? 0K=-K;=1! ).)C ?).=2C eq-ácido graso , ? 0K=-K;=1! ).)C ?).)4= 'n la parte de la titulación con 9aO: seBalaremos el gasto del mismo en el siguiente cuadroH


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V#lumen de NaO0 'as@ad#s

@u"#s =

;=

,

;,

Jealice Jealice un cuadro de comparación con las otras mesas

Mesa ( 5 6

VI+

m

E$

(

m

E$

5

CUESTIONARIO =. NUA" '+ '+ "A AO9 AO9 D' "A+ +A"'+ +A"'+ ;"AJ'+ ;"AJ'+ '9 '" ++F'A D' J'AO9

,. NPor qu# +' U+O ;U88'J 8O+8A 8O+8AFO ).= A P:@ '9 '" ++F'A Por qu# es una solución capaz de resistir cambios en el p:. onsiste de una mezcla de ácidos y bases con&ugados. Al mezclarlos$ se transforman en otra solución que gana y pierde protones. "os sistemas bu

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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA iones de fosfato de idrógeno 0:PO4,1 los aceptan. Ambos iones están en equilibrio el uno con el otro.. uando el Quido celular llega a ser más ácido$ :PO43 reacciona con iones e!tra de idrógeno para formar :,PO4 y el equilibrio se instala en la izquierda. uando el Quido celular llega a ser alcalino$ los iones de idró!ido reaccionan reaccionan con :,PO4 para formar :PO4, y el equilibrio pasa a la dereca.

3. NPAJ NPAJA A 5U' +' U+AJO9 "O+ "O+ FU;O+ FU;O+ ;"A9O+ '9 "A PJAFA

4. 'MP"5U' 'MP"5U' '" PJO'+O D' DK'+FO9 DK'+FO9 R A;+OJ A;+OJO9 D' "O+ "PDO+. El consumo diario de lípidos es de unos 60-100 g. En su mayor parte son triglicéridos y sólo una pequeña porción se encuentra en forma de lecitinas, ésteres de colesterol o vitaminas liposolules. Emulsificación, digestión e incorporación a las micelas !a soluili"ación sólo es posile por incorporación a las micelas de la ilis. #uando la ilis se me"cla con las gotitas de lípidos en el intestino, los lípidos se asoren en las micelas y así se


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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA mantienen mantienen estales estales pasando de formar formar parte de gotas cuyo di$metro di$metro era de 0,% a 1 &, a micelas cuyo di$metro es de ' a 6 nm (apro)imadamente 1.000 veces m$s pequeñas*. !a digestión de los lípidos se lleva a cao a nivel de intestino delgado gracias a la presencia de las en"imas en"imas lipolíti lipolíticas cas del p$ncreas. p$ncreas. !a lipasa pancreática, pancreática, es la m$s importan importante, te, desdola desdola los triglicéridos en monogliceridos y $cidos grasos+ tamién parece e)istir una lipasa g$strica, capa" de digerir triglicéridos de cadena corta, pero su actividad es muy reducida. !a fosfolipasa disocia fosfolipasa disocia las lecitinas en lisolecitinas y $cidos grasos. !a colesterol-ésterhidrolasa colesterol-ésterhidrolasa idroli"a idroli"a el colesterol esterificado, originando $cidos grasos y colesterol lire. l mismo tiempo, la lipasa se asore tamién, manteniéndose anclada a los $cidos iliares gracia gracias s a una proteí proteína, na, la colip colipasa asa pancre pancre$ti $tica. ca. Entonc Entonces es se produc produce e la idról idrólisi isis s de los triglicéridos, con formación de monoglicéridos y $cidos grasos, que se incorporan a las micelas ya que los productos de la idrólisis de los lípidos son compuestos insolules en el medio acuoso intestinal. Entrada al enterocito o célula epitelial intestinal na ve" producida la incorporación a las micelas mi)tas, los productos de la digestión de los lípidos pueden ya ponerse en contacto con las microvellosidades y asorerse a través de la memrana memrana celular celular por difusión. difusión. /ara penetrar penetrar en el interior interior de los enterocitos, enterocitos, las moléculas moléculas lipídicas lipídicas difunden difunden primero primero a la "ona de líquido líquido que rodea a éstos y luego penetran a través de la memrana epitelial. !as micelas difunden entonces en sentido retrógrado y vuelven a asorer nuevos lípidos, que son transportados acia las células de las vellosidades. !a asorción intestinal de los lípidos es un proceso muy efica". $s del %2 de los mismos se recuperan, fundamentalmente a nivel duodenal, y sólo una pequeña cantidad se pierde cada día a través de las eces.

Metabolismo celular y formación de quilomicrones na ve" en el interior de las células intestinales, los productos de la digestión de los lípidos se unen a una proteína transportadora de a3o peso molecular, la cual los lleva asta el retículo endopl endoplasm asm$ti $tico co liso. liso. En éste éste tiene tiene lugar lugar la resíntesis de trigli triglicér cérido idos, s, la de leciti lecitinas nas y la de colesterol esterificado.


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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA !os diferentes lípidos se agrupan posteriormente y se rodean de una cuierta de etalipoproteínas formadas en el aparato de 4olgi, dando lugar a la aparición de los quilomicrones . 5u composición apro)i apro)imad mada a sería sería 782 de trigli triglicér cérido idos, s, 2 de fosfol fosfolípi ípidos dos y colest colestero eroll lire lire,, 92 colest colestero eroll esterificado y 12 de vitaminas liposolules y proteínas.

PJO'D'9FO A;+OJO9 A;+OJO9 R DK'+FO9


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C. J'A"' J'A"' U9 '+5U'A '+5U'A D' "A "A+8A "A+8AO9 O9 D' "O+ "PDO+

VII+ VII+ CON CONCLUS CLUSIO IONE NES S

VIII+ VIII+ RECOMEND RECOMENDACION ACIONES ES Univ Univer ersi sida dad d alas alas Peru Peruan anas as-fa -farm rma aia ia ! "i#$ "i#$u% u%mi mia a-- il il# # VI

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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA •

antenga la limpieza y el orden en los lugares de traba&o.

•

"os reactivos deben estar siempre colocados en el lugar que se indique. 'sta proibido acer e!perimentos no autorizados por el profesor. 's obligatorio el uso permanente de la bata y gafas de seguridad dentro del laboratorio. 9o toque con las manos directamente los productos qu%micos$ ni los pruebe.

I7+ I7+ 1UEN 1UENTE TES S DE DE CON CONSU SUL LTA "aguna.fmedic$unam.m!> evasquez> S>triacilglecerido.tml TTT.doscivos.com>display.aspD?C(8 soco.com.ar>;iolog%a>cuerpoS>ApVdig.tm


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