HIDROLISIS DE LOS LÍPIDOS DE LA LECHE CON LIPASA Y SALES BILIARES Objetivo general: •
Verifiar Verifiar la ativi!a! en"i#$tia !e la entera%a li&a%a en la 'i!roli%i% ( !e%nat)rali"ai*n !e lo% l+&i!o%,
Objetivo E%&e+fio%, •
•
•
Co#&robar in vitro la i#&ortania !e la% %ale% biliare% -ta)rolorato !e %o!io. en la !ige%ti*n !e lo% l+&i!o%, E%tableer la efetivi!a! !e la 'i!roli%i% !e la% entera%a% en &re%enia !e %ale% biliare% 'aien!o )%o% !e lo% $l)lo% /)+#io%, Ob%ervar la ativi!a! !e la en"i#a li&a%a in!ireta#ente &or tit)lai*n !e lo% $i!o% gra%o% libera!o% )tili"an!o o#o ba%e al 'i!r*0i!o !e &ota%io,
Intro!)i*n En la% la%e% !e en"i#a% /)e atali"an la 'i!r*li%i% !e !iver%o% 1%tere% 'a( !iferenia entre la% li&a%a% ( la% e%tera%a%, E%ta !iferenia %e ba%a en %) e%&eifii!a! &referenial ( gra%a%2 o %ea trigli1ri!o% !e $i!o% gra%o%2 !e a!ena larga2 #ientra% /)e lo% %)b%trato% nat)rale% !e la% e%tera%a%2 %on lo% e%tere% %enillo% !e $i!o% !e bajo &e%o #ole)lar, Sin e#bargo la% !o% la%e% !e en"i#a% %on %)#a#ente ine%&e+fia% en )anto a %) ai*n2 ( la nat)rale"a !el $i!o gra%o o !el alo'ol tiene efeto no en la e%&eifii!a! %ino en la veloi!a! !e reai*n, La 'i!r*li%i% !e lo% trigli1ri!o% /)e on%)#en lo% ani#ale% %)&eriore% %e lleva a abo &rini&al#ente en el inte%tino !elga!o2 &or #e!io !e en"i#a% li&ol3tia% elabora!a% en el &$nrea%, La% li&a%a% &anre$tia% e0i%ten en !o% ti&o%: la% e%&e+fia% &ara ro#&er la )ni*n 1%ter en la &o%ii*n alfa o alfa &ri#a !e lo% trigli1ri!o%2 ( la% e%&e+fia% &ara la% )nione% beta, La 'i!r*li%i% o#&leta !e lo% trigli1ri!o% &roe!e entone% &or &a%o%, Pri#ero %e 'i!roli"an r$&i!a#ente la% )nione% alfa ( alfa &ri#a2 l)ego lenta#ente %e ro#&e la% )nione% beta,
4aro te*rio, Li&a%a: La li&a%a -EC,5,6,6,5. -triail glierol ail 'i!rogena%a., 7a#bi1n lla#a!a antig)a#ente e%tea&%ina2 e0tra+!a !e !iferente% f)ente% biol*gia%2 ontiene %ie#&re !iver%a% fraione% &roteia% !e #)( !iver%o% &e%o% #ole)lare%2 /)e van !e%!e 582999 'a%ta 9929992 to!a% ella% on ativi!a! li&ol3a, E%ta% e%tera%a% 'i!r*li%i% %)b%trato% e#)l%ifia!or2 ( no ataa a %)b%trato% en ver!a!era %ol)i*n, Se ree /)e e%to %e !ebe a /)e la en"i#a %e ab%orbe a %) %)b%trato e#)l%ifia!or2 ( a la veloi!a! iniial !e reai*n e%t$ en f)ni*n !el n;#ero !e #ol1)la% !e en"i#a a!%orbi!a% en la interfa%e, Se le lla#a Panreatina a )n e0trato !e &$nrea% on f)erte ativi!a! li&olitia, El #1to!o titri#a #a%a2 filtra en el glo#1r)lo renal2 &ero e% o#&leta#ente reab%orbi!a en lo% t;b)lo%2 &or lo /)e e% in!etetable en orina, No %e 'an !e%rito for#a% #ole)lare% !e inter1% &ara el laboratorio l+nio, Co#o #)e%tra !ebe e#&lear%e %)ero (a /)e e0i%ten !)!a% %obre el &o%ible efeto interferente !e lo% antioag)lante%, La li&a%a e% #)( e%table en %)ero2 &or lo /)e &)e!e al#aenar%e vario% !+a% a te#&erat)ra a#biente, La onentrai*n atal+tia !e li&a%a &)e!e #e!ir%e on #1to!o% titri#1trio%2 t)rbi!i#1trio% ( olori#1trio%, 7a#bi1n e0i%ten vario% ti&o% !e in#)noan$li%i% &ara #e!ir %) onentrai*n !e #a%a, De lo% #1to!o% ante% #eniona!o%2 la% #$% #o!erna% ( on #ejore% &re%taione% %on lo% olori#1trio%2 en lo% /)e %e ao&lan varia% reaione% en"i#$tia% a la &rini&al 'a%ta on%eg)ir la for#ai*n !e )n &ro!)to olorea!,
4eto!olog+a: 4ateriale%: • • • • • • • • • • • • •
? 7)bo% !e en%a(o = -gra!illa. @ Erlen#e(er !e 699 #l Pi&eta% !e ? ( 69 #l 6 Probeta !e ?9 #l 6 B)reta !e ? #l 6 Pi&etea!or, 6 Pi&eta vol)#1tria 69 #l 6 va%o &rei&ita!o !e ?9 #l 6 Pin"a% !e t)bo !e en%a(o% 6 7er#*#etro 6 C)beta !e al)#inio Plaa !e alenta#iento, Ba>o !e ag)a ter#o%t$tia,
Reativo: • • • • • •
E0trato &anre$tio 6 li&a%a Hi!r*0i!o !e &ota%io 929? 4 enolftale+na al 926 en etanol Etanol 8@ 7a)rolorato !e %o!io al 6 Ag)a !e%tila!a,
Diagrama de proceso.
En%a(o 6: E0trato &anre$tio ( Li&a%a, Pre&arai*n !el blano, En )n erlen#e(er agregar 69 #l !e le'e 'o#ogeni"a!a Calentar 5 #l !e e0trato &anre$tio A!iionar #l !e ta)rolorato !e %o!io ( #e"lar en el erlen#e(er
Calentar !)rante 9 #in)to% a 5C
Agregar 5 gota% !e fenolftale+na
Titular con Hidróxido de
Ai*n !el e0trato &anre$tio li&a%a %obre lo% l+&i!o% !e la le'e, &n 4 erlenmeyer agregar 10 ml de lec'e 'omogeni(ada en
Titular con !"H al 0#0$ % agitando contantemente
A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1% y
Cada 20 minutos retirar uno a uno los erlenmeyer y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de
En%a(o : E0trato &anre$tio li&a%a #$% ta)rolorato !e %o!io, Pre&arai*n !el Blano &n 4 erlenmeyer agregar 10 ml de lec'e 'omogeni(ada en
Titular con !"H al 0#0$ % agitando contantemente
A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1%# a cada erlenmeyer agregar 2 ml de
Cada 20 minutos retirar uno a uno los erlenmeyer y agregar 10 ml de etanol con 3 gotas de
Ai*n !el e0trato &anre$tio -li&a%a. ( el ta)rolorato en la 'i!roli%i% !e lo% l+&i!o% !e la le'e, &n 4 erlenmeyer agregar 10 ml de lec'e 'omogeni(ada en
A los 4 erlenmeyer agregar 3 ml de extracto pancreático 1% y 2 ml de tauroclorato 1%# me(clar Calentar a
Cada 20 minutos retirar uno a Titular con !"H al 0#0$uno % los erlenmeyer y agregar 10 agitando contantementeml de etanol con 3 gotas de
En%a(o 5: ta)rolorato: Pre&arai*n !el Blano &n 4 erlenmeyer agregar 10 ml de lec'e 'omogeni(ada en
Calentar en e+ullición 3 ml de extracto pancreático 1%# a,adir a la lec'e el extracto acompa,ado de 2 ml
Titular con !"H al 0#0$ % agitando contantemente
Calentar a 37C en +a,o mar*a# retirar cada tu+o en inter-alos de 20 min y agregar 10 ml de etanol con 3
Acción del tauroclorato de sodio en la 'idrolisis de los l*pidos &n 4 erlenmeyer agregar 10 ml de lec'e 'omogeni(ada en
A los 4 erlenmeyer agregar 2 ml de extracto de tauroclorato 1%
Titular con !"H al 0#0$ % agitando contantemente
Calentar a 37C en +a,o mar*a# retirar cada tu+o en inter-alos de 20 min y agregar 10 ml de etanol con 3
Re%)lta!o%: 7abla N6, L+&i!o% !e la le'e #$% e0trato &anre$tio li&a%a, &rlenmeye r
Tiempo minutos
lanco 1 2 3 4
20 20 40 0 50
-olumen +ase -olumen +ase consumida.ml/ consumida.lts/ de !"H 0#0$ de !"H 0#0$ 34 243$ 7$ 7$
000 0034 00243$ 0007$ 0007$
oles de ácido presentes
oles de ácido producidas por la 'idrólisis
00004$ 000170 000122 00004 000035
00000000 00012$00 000077$ 0000037$ 6000007$0
7abla N, L+&i!o% !e la le'e #$% e0trato &anre$tio #$% ta)rolorato, &rlenmeye r
Tiempo minutos
lanco 1 2 3 4
20 20 40 0 50
-olumen +ase -olumen +ase consumida.ml/ consumida.lts/ de !"H 0#0$ de !"H 0#0$ 1$ 1$ 224 247 2$2
001$ 001$ 00224 00247 002$2
oles de ácido presentes
oles de ácido producidas por la 'idrólisis
000075 00005 000112 000124 00012
00000000 00001$0 00003400 00004$$0 00004500
oles de ácido presentes
oles de ácido producidas por la 'idrólisis
0000$ 0000$ 0000$ 0000$ 0000$
0 0 0 0 0
7abla N5, L+&i!o% !e la le'e #$% ta)rolorato, &rlenmeye r
Tiempo minutos
lanco 1 2 3 4
20 20 40 0 50
-olumen +ase -olumen +ase consumida.ml/ consumida.lts/ de !"H 0#0$ de !"H 0#0$ 10 10 10 10 10
001 001 001 001 001
