UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLA FACULTAD DE INGENIERÍA PRÁCTICA N° 7 HIDRÓLISIS DE LAS GRASAS POR LA LIPASA PANCREATICA Bloque: FC-PREAGR04A1M Profesor: LOAYZA GUTIERREZ, LILLYAN TERESA
ALUMNOS:
CUSTODIO OSCCO, HAMMER DAVID LEIVA CASTRO , BRIGGITH PIMENTEL CORDOVA, UZIEL ABIDAN SOLLIER BUJAICO, RENGERK TELLO ZEGARRA, ROSSY TINTAYA CORTEZ, KAREN YOSSELINE
LIMA – PERÚ 2015-01
PRACTICA N° 7 HIDRÓLISIS DE LAS GRASAS POR LA LIPASA PANCREATICA I.
INTRODUCCIÓN
La lipasa pancreática es una enzima que actúa sobre los triglicéridos, los lípidos más importantes de la dieta, hidrolizándolos a diglicéridos, monoglicéridos y ácidos grasos. Su actividad se mide titulando con una base (NaOH 0.1N) los ácidos grasos liberados. En consecuencia, a mayor acidez, mayor gasto en titulación y mayor actividad enzimática. La acción de la enzima se ve potenciada por las sales biliares, que transforman las grasas en pequeñas micelas. El jugo pancreático contiene además diversas enzimas para la digestión de lípidos, llamadas lipasas. Entre las principales lipasas pancreáticas destacan la triacilglicerol hidrolasa, el colesterol éster hidrolasa y fosfolipasa A2. II. OBJETIVOS: a) Evaluar la actividad de la lipasa pancreática por titulación. b) Evidenciar el efecto de las sales biliares. III. MATERIALES: Materiales:
de
Sales biliares al 1%
pancreatina (extracto de
6 matraces de 50 ml de
Solución
al
2%
enzimas pancreáticas)
capacidad.
Tampón fosfato 0.2M de
5 pipetas de 5 ml.
pH 8
NaOH 0.1 N
fenolftaleína
Baño María a 37°C
Aceite
vegetal
neutralizado
IV. PROCEDIMIENTO Disponer tres tubos de ensayo de la siguiente manera:
5 ml de sales biliares
2 ml de aceite neutro
TUBO 1 1
3°
2°
3°
1°
2 ml de tampón fosfato 0.2M de pH8
2 ml de aceite neutro
TUBO 2
1° TUBO 3
2 ml de agua destilada
Sales biliares
2°
2 ml de tampón fosfato 0.2M de pH8
2 ml de agua destilada
3
2 ml de agua destilada
Agitar fuertemente. Observar y tomar nota del aspecto de cada uno. Incubar en baño maría a 37°C por 5 minutos
Tomando nota exacta del tiempo y con 5 minutos de intervalo, añadir a cada tubo 5 ml de solución de pancreatina, colocándolos inmediatamente en el baño maría para continuar la incubación por 45 minutos.
Titular cada tubo con NaOH 0.1N (usar 2 gotas de fenolftaleína como indicador).
V. RESULTADOS Tubo 1 1.3 mL
Tubo 2 0.85 mL
Tubo 1
Tubo 3 0.6 mL Tubo 2
NxV= #Eq. 0.1xV= #Eq. 0.1x (1.3-0.6) = #Eq. 0.045 = #mEq. 0.07 mEq ……… 45 min X ……………….1 min
………….5 mL Y ……………….1 mL
NxV= #Eq. 0.1xV= #Eq. 0.1x (0.85-0.6) = #Eq. 0.025 = #mEq. 0.025 mEq ……… 45 min X …………….….1 min
………….5 mL Y ……………….1 mL
VI. CUESTIONARIO 1.
¿Qué producto de la acción de lipasa es el responsable del viraje de color de la fenolftaleína? El viraje de color de la fenolftaleína a un color rosado se debe a que la solución ha alcanzado un pH entre 8.8 -9.0 aproximadamente. Este cambio de pH se da por la titulación con soda. Sin embargo, indirectamente, serían los ácidos grasos liberados por la acción de la lipasa los causantes de hacer virar el color, dado que la titulación se realiza específicamente para hallar la cantidad de números equivalentes, sean ácidos o básicos, presentes en la solución., En la hidrólisis de los triacilglicéridos, principales componentes de los lípidos de la dieta, durante la digestión en el lumen intestinal, gracias a la actuación de la lipasa, enzima que se sintetiza en el páncreas y que cada vez que llega alimento al intestino se vierte como constituyente del jugo pancreático. La reacción que tiene lugar se denomina saponificación y es contraria a la esterificación que tiene
lugar cuando los triacilglicéridos se forman a partir de glicerina y ácidos grasos. Una vez que actúa la lipasa y se produce la hidrólisis (saponificación), la glicerina y los ácidos grasos quedan libres como tales y liberan H+, produciendo un descenso del pH cuya magnitud depende de que el medio este tamponado o no. el indicador cambia de color como consecuencia del paso de pH de ácido a base. 2.
Si quisiera determinar el Km de la lipasa pancreática, ¿cómo tendría que modificar esta práctica? Fundamente su respuesta. La Km nos da una idea la afinidad que tiene el enzima por su sustrato, cuanto mayor es Km menor es la afinidad (predominan las formas E y S libres), cuanto menor es Km mayor es la afinidad (predomina la forma ES),
La velocidad se podría calcular mediante la producción de ácidos grasos (AG), y se sabe que el Km es la concentración del sustrato a la cual se obtiene la mitad de la velocidad máxima. Ya que también se podría hallar la concentración del sustrato.
CONCLUSIONES
En esta práctica se observa la digestión en el intestino delgado, teniendo como actores a las sales biliares y a la pancreatina que atacan al aceite.
Nos damos cuenta de la importancia que representan las sales biliares en el alto rendimiento de la pancreatina en la catálisis de los alimentos que consumimos, ya que por sí solas pueden degradar dicho alimento pero no de una forma eficiente.
En el intestino se agregan las lipasas, que es el jugo intestinal, y se absorben los nutrientes.
Entre otros indicadores, consideramos que la fenolftaleína es el mejor indicador.
A diferencia de la pancreatina la lipasa lingual y las estomacales no dependen de las sales biliares.
VI. BIBLIOGRAFÍA http://docsetools.com/articulos-utiles/article_106580.html .
