UNIVERSIDAD AUT AUTONOMA ONOMA DEL ESTADO DE MORELOS FACULTAD DE FARMACIA.
Práctica No. 2 ACTIVIDAD ENZIMATICA. Lab. De bioquimica.
Alumnos: Cruz Rodríguez Esly Reboollar Mtz. Eduardo D. Aaron 5ª B
12/03/14
PRACTICA 2. ACTIVIDAD ENZIMATICA. Objetivo: Estudiar la actividad de una enzima que cataliza una reacción oxidoreducción bajo la influencia de los factores de concentración, temperatura y pH. Introducción:
Las estructuras que forman el cuerpo de los seres vivos se encuentran realizando un sinfín de reacciones químicas estas, dan lugar a las funciones que todo ser vivo realiza, en esta práctica nos centramos en la enzimas que son las encargadas de dirigir esa variedad de reacciones: hacen que ocurra la reacción necesaria, en el lugar adecuado y en el momento preciso. Dichas enzimas son de moléculas de naturaleza proteica que actúan como catalizadores en todas las reacciones del metabolismo. Para que ocurran estas reacciones es generalmente necesaria la presencia de un catalizador (sustancia que facilita la reacción y de este modo aumenta la velocidad a la que esta se desarrolla, catador que, además, ha de ser específico para determinada reacción (pues de lo contrario podrían ocurrir reacciones no deseables). Las enzimas, por tanto, además de ser catalizadores, han de ser capaces de reconocer sobre qué sustancia (s) han de actuar (sustrato o sustratos de la enzima) y también han de ser capaces de provocar una transformación. Todas estas condiciones las enzimas las pueden cumplir por ser moléculas de estructura proteica (terciaria globular). Eso hace que tengan en su superficie solo tengan un centro activo, en el cual solo encaja una molécula: sustrato. Mientras está encajado el sustrato en el centro activo tiene lugar la transformación del sustrato dando lugar a los productos de la reacción. Estos se separan de la enzima, quedando el centro activo de esta libre y la enzima esta lista para volverse a unir a otra molécula de sustrato, es decir, lista para volver a actuar. En esta práctica estudiamos la actividad de una enzima la cual puede determinarse midiendo la cantidad de producto formado (o de sustrato consumido) por unidad de tiempo. Pero por otro lado evaluamos la existencia de distintos factores que pueden modificar dicha actividad enzimática. Los factores que ocasiona esto son: concentración de enzima, concentración de sustrato, temperatura, pH e inhibidores. Temperatura: para toda enzima existe una temperatura óptima de actividad, a la cual la velocidad de la reacción es máxima. A temperatura por debajo
de esta temperatura, la frecuencia de choques entre la enzima y el sustrato es baja y, por lo tanto, la velocidad de reacción también lo es. Conforme se incrementa la temperatura, aumenta la frecuencia de choques y se favorece la velocidad de reacción. Pero si la temperatura es muy elevad, pueden romperse las fuerzas de van der Waals y los puentes de hidrogeno que estabilizan la estructura de las enzimas; como consecuencia, se produce su desnaturalización y la perdida de la actividad enzimática. Efecto del pH sobre la actividad enzimática: La estructura de la enzima se encuentra estabilizada por una serie de enlace no covalentes (hidrofóbicos, puentes de hidrogeno, atracciones electrostáticas) y covalentes (puentes disulfuro) en los aminoácidos. Los cambios de pH modifican las cargas de los grupos R de los aminoácidos que no son neutros (aspartato, lisina, arginina y glutamato), e interfieren con las reacciones electrostáticas y su estabilidad estructural, lo que provoca una pérdida total o parcial en su actividad enzimática. Para cada enzima existe un pH óptimo en relación con la actividad, el cual varía según la región celular en que se encuentre dicha enzima: por ejemplo, el pH dentro del lisosoma o en el estómago es alrededor de 2 (y ese es el pH óptimo de las enzimas allí localizadas), mientras que las enzimas presentes en el plasma o en el duodeno tienen un pH óptimo de actividad entre 7.0 y 8.0. Efecto de la concentración de la enzima sobre la actividad enzimática: en toda reacción enzimática, si se incrementa la concentración de enzima, se forma mayor cantidad de producto por unidad de tiempo. El incremento en la velocidad de reacción es directamente proporcional al incremento en la concentración de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante, es decir, que el sustrato no llegue a agotarse. Para poder evaluar estas condiciones utilizamos el modelo propuesto por Leonor Michaelis y Maud Menten, que consiste en graficar la velocidad de la actividad enzimática y la concentración del sustrato. Esta representación gráfica permite determinar la constante de Michaelis-Menten (KM) al interpolar la mitad de la velocidad máxima (V máx). En esta práctica se empleará la enzima catalasa de la levadura y la peroxidasa de la zanahoria y para para analizar algunos aspectos de la cinética enzimática.
Imágenes:
*Efecto de la concentración de la enzima.
*Efecto de la inhibición:
El (burbujas) tubo 3 contiene Producción de oxígeno de la en inhibidor NaCN 5% enzima peroxidasa eny papa y zanahoria a Pb(NO 3)2. el tubo 4 contiene concentraciones de 0.1, 0.25 y 0.5 gr.
*Efecto de la temperatura:
*Efecto del pH:
pH 10 pH 4
Bibliografías:
pH 7
http://books.google.com.mx/books?id=8SAtkthrFEkC&pg=PA1&lpg=PA1&dq=pract ica+actividad+enzimatica+concentracion,+temperatura+y+pH&source=bl&ots=oDrj zpq04e&sig=Qme2gmYZF7jtA1pYXVCNbTne7MY&hl=es&sa=X&ei=HuklUT5LOPM2AXmr4HYCw&ved=0CFEQ6AEwBw#v=onepage&q=practica%20activid ad%20enzimatica%20concentracion%2C%20temperatura%20y%20pH&f=false http://www.uaq.mx/investigacion/difusion/veranos/memorias2010/12%20Verano%20Ciencia%20Region%20Centro/UAQ%20Cedillo%20Jimen ez.pdf http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/profesor/practicas/Actividad_ enzimatica.pdf
