UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO FACULT FACULTAD DE CIENCIA CI ENCIA E INGENIERÍA ING ENIERÍA EN ALIMENTOS INGENIERÍA BIOQUÍMICA INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO Datos informativos:
Integrantes: Espinosa Melany, Muñoz Diana, Solís Verónica Carrera: Ingeniería Bioquímica C!"# A!a$%&!#: Abril – Sepiembre !"#$ Asgnat'ra: Bioquímica I N(e": %uino &'( Pr#)es#r: )ic* Mg* Danae +ernn-ez .i/ero Pr*!t!a $e La+#rat#r# N,: ! Fe!-a $e Rea".a!/n: #0 1 "2 1 !"#$ Fe!-a $e Presenta!/n: 0" 1 "2 1 !"#$
3EMA4
IDENTIFICACI0N DE PROTEÍNAS OB1ETIVOS O+2et(# Genera" •
I-eni5icar la presencia -e proeínas en -i5erenes muesras me-iane el reaci/o -e Biure y la prueba -e 6in7i-rina*
O+2et(#s es3e!4)!#s Deerminar el comporamieno -e las -i5erenes muesras 5rene al reaci/o -e Biure
Esablecer que muesras presenan aminoci-os por la prueba -e 6in7i-rina
RESULTADOS 5 DISCUSI0N Cálculos:
C'SO6 Daos 89uS:;< = "*#M
V = "*"#!2 )
g= PM ∗V ∗ M
g=( 159.609
g mol )∗(0.0125 L)∗( 0.1 ) mol L
g= 0.1995
NaO7 Daos 86a:>< = #"?
P / V =
10
=
g soluto ml solución
V = #2ml
x 100
gsoluto 15 ml
g=0.10∗15 g= 1.5
Resultados:
Ta+"a N,89 .esula-os -e las pruebas realiza-as para -eecar presencia -e aminoci-os y proeínas*
M'estra
Rea!t(# $e B'ret
Nn-$rna
)ec7e naural
@
@
)ec7e comercial
@
@
Se/en up
9a5
Meionina
@
9lara -e 7ue/o
@
@
E"a+#ra$# 3#r: Espinosa, Muñoz, Solís C!"#$ F'ente: )aboraorio -e Bioquímica I, +9IA)
Ta+"a N,9 Muesras con el reaci/o -e Biure y 6in7i-rina
M'estra
Rea!t(# $e B'ret
Nn-$rna
)a pro-ucen los ppi-os y las proeínas, pero no los aminoci-os, ya que se -ebe a la presencia -el enlace pepí-ico C 9: 6> que se -esruye al liberarse los aminoci-os* 9uan-o una proeína se pone en conaco con un lcali concenra-o, se 5orma una susancia complea -enomina-a Biure9
Esa reacción es basane imporane, pues es uni/ersalmene emplea-a para -eecar cualiai/amene y cuaniai/amene a los aminoci-os* Fara los aminoci-os esa es la Gnica reacción -e color, /er-a-eramene imporane* )a 6in7i-irna es una agene oHi-ane -e los grupos al5aamino, liberan-o amoniaco, 9:! y el correspon-iene al-e7í-o*
Le!-e nat'ra"
Freseno un purpura basane inenso con relación a la lec7e comercial* Demosran-o con eso la presencia -e gran cani-a-e proeínas*
.esula-o posii/o 5rene a la prueba -e nin7i-rinas i-eni5ica-o me-iane el /irae -e color que presenó*
Le!-e !#&er!a"
En esa prueba el color purpura 5ue ms inenso que en la -e nin7i-rina* Sin embargo 5ue menos inenso que el /irae -e la lec7e naural*
Fresenó resula-os posii/os para la presencia -e aminoci-os, mosró un color menos purpura que el -e la lec7e naural*
Met#nna
)a meionina es un aminoci-o y no una proeína, por lo ano no presena enlaces pepí-icos, por esa razón la prueba -e Biure salió negai/a*
)a nin7i-rina al ser Gil Gnicamene para -eecar aminoci-os, -io un /irae -e color a purpura, sien-o eso un resula-o posii/o*
C"ara $e -'e(#
En esa prueba se obu/o un color purpura basane inenso, -an-o a conocer la gran cani-a-e proeínas presenes*
)a clara -e 7ue/o posee gran /arie-a-e aminoci-os, por lo ano el resula-o 5rene a esa prueba 5ue posii/o*
E"a+#ra$# 3#r: Espinosa, Muñoz, Solís C!"#$ F'ente: )aboraorio -e Bioquímica I, +9IA)
Ds!'s/n )as proeínas iner/ienen en casi o-as las propie-a-es que caracerizan a los seres /i/os* Son las macromolculas inracelulares ms abun-anes y se encuenran en o-os los comparimienos -e las clulas* racias a la acción -e las proeínas, los seres /i/os son capaces -e pro-ucir miles -e molculas -i5erenes a parir -e 5oones solares, elemenos y compuesos sencillos como :!, 6!, >!:, 6>0, 9:! y glucosa* 9a-a una -e esas molculas se sineiza en el momeno preciso y en la cani-a- a-ecua-a para que las clulas se a-apen a las con-iciones ambienales y se repro-uzcan CSnc7ez, !"#2* Fara eso se uilizó muesras como ca5, clara -e 7ue/o, se/en up, lec7e naural, lec7e comercial y la meionina para realizar la i-eni5icación -e proeínas y aminoci-os* Café
El ca5 es un pro-uco -e origen /egeal que, como al, presena una serie -e componenes similares a oros enconra-os en 5ruas y /er-uras, en el cacao o en el * 9oniene /iaminas, minerales y cienos -e compuesos -i5erenes que pue-en ener e5ecos -i/ersos sobre el organismo 7umano* SegGn +ranco y )izarraga, C!"#;* El ca5 es compueso por ms -e #*""" subsancias químicas -isinas, incluyen-o aminoci-os y oros compuesos nirogena-os, polisacri-os, azGcares, riglicri-os, ci-o linoleico, -ierpenos Cca5esol y Ja7Keol, ci-os /oliles C5órmico y acico y no /oliles Clcico, arrico, pirG/ico, círico, compuesos 5enólicos Cci-o clorognico, ca5eína, subsancias /oliles /iaminas y minerales* Sin embargo los resula-os -el ca5 5rene a las pruebas -e 6in7i-rinas y el .eaci/o -e 6iure, que sir/en para -eecar la presencia -e aminoci-os y proeínas respeci/amene 5ueron negai/os, lo que conra-ice la in5ormación obeni-a -e la 5uene con respeco a que iene aminoci-os, ya que no cambio -e color en la prueba -e 6in7i-rina* Clara de Huevo
)a clara, -e eHura /iscosa y ransparene, es 5orma-a en un L"? -e agua, el reso lo consiuyen las proeínas Co/oalbGmina, la ms abun-ane y /iaminas* )a proeína -el 7ue/o es consi-era-a como parón -e re5erencia para comparar nuricionalmene a las -ems proeínas -e los -i5erenes alimenos* Eso se -ebe a que es la proeína -e ms alo /alor biológico Cconiene los aminoci-os esenciales para el organismo* C)icaa, !"##* +rene a las pruebas realiza-as la clara -e 7ue/o -io resula-os posii/os para las -os, ya que cambio -e color, ornn-ose -e su color amarillo claro inicial a un color /iolea* )os aminoci-os y la cani-a- -e ellos que se encuenran el #"" g -e clara -e 7ue/o se muesra a coninuación, con el 5in -e enen-er la razón -el /irae -e color y el resula-o posii/o -e las pruebas realiza-as*
Ta+"a N,;9 Aminoci-os y cani-a- presenes en #"" g -e clara -e 7ue/o* N'trente Á!$# as3*rt!# Á!$# g"'t*&!# A"anna Argnna Cstna Fen"a"anna G"!na 7$r#<3r#"na 7st$na Is#"e'!na
Cant$a$ #"$! mg* #;#$ mg* #$ mg* 2N mg* !2" mg* $2$ mg* ;0! mg* " mg* !;! mg*
N'trente Le'!na Lsna Met#nna Pr#"na Serna Tr#sna Tre#nna Tr3t#)an# Va"na
$0L mg* E"a+#ra$# 3#r: Espinosa, Muñoz, Solís C!"#$ F'ente: Feña, !"#"
Cant$a$ L0! mg* $0L mg* ;"$ mg* ;0! mg* L; mg* 0L mg* 2"# mg* #0 mg* N;$ mg*
Esos aminoci-os se combinan para 5ormar proeínas* )as proeínas -e la clara -e 7ue/o son usa-as por nuesro organismo para 5ormar nuesros mGsculos y ambin son necesarias para manener nuesra masa muscular CFeña, !"#"* Seven up
Se/en up es una bebi-a gaseosa re5rescane -e eHracos con aromas naurales -e lima y limón* Oaramillo !"", menciona que las llama-as bebi-as gaseosas con en-ulzanes por sorpren-ene que pue-a parecer son los Gnicos líqui-os que ingieren a lo largo -el -ía millones -e personas -e o-o el mun-o* En muc7os casos 7a susiui-o 7asa el agua, imprescin-ible para la /i-a* SegGn .uiz !"#2, la se/en up no cuena con ningGn /alor nuricional, aunque cuenan con nurienes, no ienen proeínas, /iaminas o minerales* 3o-o lo que coniene es agua 5ilra-a, la -añina azGcar re5ina-a, ca5eína, ci-os, coloranes y conser/anes, lo que genera un eHceso -e so-io en el organismo* Es asi como se -ealla a coninuación la in5ormación nuricional -e la se/en up4
Ta+"a N, 6: In5ormación nuricional -e la Se/en 'p
+uene4 6uñez, !"#0
Es por ello que cuan-o se omó una muesra -e se/en up y se colocó el reaci/o -e biure presenó un resula-o negai/o a la presencia -e proeínas y cuan-o se 7izo con la prueba -e 6in-rina ambin presenó un resula-o negai/o a la presencia -e aminoci-os* Leche Natural
)a lec7e -e /aca es un alimeno animal rico en proeínas compleas, lo que signi5ica que pue-e cubrir las necesi-a-es -e aminoci-os -el organismo* A-ems -e su ala cani-a- -e proeínas -e cali-a-, la lec7e -e /aca -esaca por su /alor biológico y nuricional y iene un gran poencial como regula-or y poencia-or -el crecimieno C>ernn-ez, !"#;
SegGn )ópez !"#", Enre el 0 y el 0,2? -e la lec7e -e /aca, es 5orma-o por proeínas* Esas proeínas se pue-en clasi5icar -e acuer-o a sus 5unciones biológicas y ambin -e acuer-o a sus propie-a-es químicas y 5ísicas* Se -isribuyen en seroproeínas o proeínas solubles, caseínas y oras susancias nirogena-as -e nauraleza no proeica* 3orres !"#;, menciona que la caseína es la principal proeína -e la lec7e, que se encuenra -ispersa como un gran nGmero -e parículas sóli-as an pequeñas que no se-imenan, y permanecen en suspensión* Esas parículas se llaman micelas y la -ispersión -e las mismas en la lec7e se llama suspensión coloi-al*
Ta+"a N, =4 Froeínas -e la lec7e
+uene4 >ernn-ez, !"#;
9omo la lec7e presena proeínas y por en-e aminoci-os -io resula-o posii/o al reaci/o -e Biure y a la prueba -e 6in7i-rina* Leche comercial
)a muesra uiliza-a en la prcica 5ue lec7e enera, esa presena el mayor coneni-o en grasa lcea, SegGn Fez C!"#" un mínimo -e 0,! gramos por #"" gramos -e pro-uco* 3ano su /alor calórico como su porcenae -e coleserol son ms ele/a-os con respeco a la lec7e semi-escrema-a o -escrema-a*
Esa lec7e -i5iere -e la lec7e naural ya que 7a si-o somei-a a un raamieno rmico -urane un iempo y una emperaura su5iciene para -esruir los microorganismos paógenos presenes en esa, aunque no sus esporas C5ormas -e resisencia -e los microorganismos* SegGn .eybanpac 9*A* C!"#! El incon/eniene es que el proceso -e in-usrialización pro/oca la pr-i-a -e /iaminas B#, B!, B0, así como -e algunos aminoci-os esenciales* For ello, la in-usria lcea aña-e 5recuenemene esos nurienes a las lec7es somei-as a ese raamieno* Al aña-ir esos nurienes -e 5orma ari5icial, se pro-uce una aleración a su composición y eso se /io re5lea-o en el cambio -e onali-a- que proporcionaron los mo-os -e biure y nin7i-rina, ya que al compararlos se pu-o apreciar una mayor concenración -e proeínas en la lec7e naural que en la comercial* Metionina
SegGn Díaz C!""; menciona que la meionina es un aminoci-o esencial y es clasi5ica-o como no polar* Ouno con la ciseina, la meionina es uno -e los -os aminoci-os proeinognicos conenien-o azu5re* Es un inerme-iario en la biosínesis -e ciseina, carniina aurina, leciina, y oros 5os5olípi-os* Al usar el mo-o -e Biure no se apreció un cambio -e color, eso se -ebe a que el mo-o esu-ia-o no reacciona con aminoci-os sino con enlaces pepí-icos ya que segGn .eyes C!""N, menciona que ese mo-o se basa en la 5ormación -e un compleo colorea-o enre el 9u!@ y los grupos 6> -e los enlaces pepí-icos en me-io bsico* )a inensi-a- -e coloración es -irecamene proporcional a la cani-a- -e proeínas Cenlaces pepí-icos y la reacción es basane especí5ica, -e manera que pocas susancias iner5ieren* Mienras que al usar el mo-o -e nin7i-rina se obser/ó una coloración /iolea lo que -a un resula-o posii/o, eso se -ebe a que la nin7i-rina C7i-rao -e riceo7i-rin-eno reacciona con aminoci-os que engan el grupo amino libre, -an-o lugar a la 5ormación -e amoniaco y an7í-ri-o carbónico, con re-ucción -el reaci/o Cnin7i-rina* )a 7i-rin-anina reacciona a su /ez con el amoniaco y ora molcula -e nin7i-rina para -ar un compueso -e a-ición -oble que presena una coloración azulpGrpura, con la eHcepción -e la prolina que -a una coloración amarillena* Cuirrez, !"#; Es imporane recalcar que el mo-o -e 6in7i-rina es usa-o para la i-eni5icación ano -e proeínas, ppi-os y aminoci-os, mienras que el mo-o -e Biure reacciona con los enlaces pepí-icos -e las proeínas 7acien-o -e ese mo-o mas seleci/o*
CONCLUSIONES 5 RECOMENDACIONES
C#n!"'s#nes Fara esa i-eni5icación se uilizó el reaci/o -e Biure para i-eni5icar las proeínas y la prueba -e 6in7i-rina para i-eni5icar los aminoci-os que esn presenes en las muesras uiliza-as, con lo cual se obser/ó el cambio -e inensi-a- -e color como un in-ica-or -e la presencia -e proeínas y aminoci-os*
Al aña-ir el reaci/o -e Biure a ca-a una -e las muesras se obser/ó que en las muesras -e lec7e naural, lec7e comercial y clara -e 7ue/o u/o un color pGrpura lo cual -io como resula-o posii/o a la presencia -e proeínas, mienras que en las muesras -e ca5, se/en up y meionina manu/o el color azul -e reaci/o -an-o un resula-o negai/o a la presencia -e proeínas y -emosran-o que esas muesras no ienen proeínas en su composición nuricional*
Despus -el baño maría -e ca-a una -e las muesras con la solución -e nin7i-rina se obser/ó que las muesras que presenan aminoci-os son la lec7e naural, lec7e comercial, clara -e 7ue/o que son alimenos que al poseer aminoci-os pue-en 5ormar gran-es ca-enas -e proeínas imporanes para el organismo y la meionina, que-an-o -emosra-o que es un aminoci-o*
Re!#&en$a!#nes
o
Mezclar las muesras con el reaci/o -e Biure y esperar unos minuos 7asa que reaccionen esos -os, para obser/ar si 7ay cambio -e color y por lo ano si 7ay presencia o no -e proeínas*
o
3ener en cuena el color que -ebe -ar posii/o para el reaci/o -e Biure y posii/o para la prueba -e 6in7i-rina para po-er -eerminar que muesra presena proeínas y aminoci-os*
CUESTIONARIO †
P%u muesra presenó mayor coneni-o -e proeínasQ +un-amene su respuesa* )a lec7e naural presenó mayor coneni-o -e proeína, ya que se obser/ó un color /iolena muc7o ms inenso que las -ems muesras si omamos como re5erencia la .eacción -el Biure, ya que esa al no ser procesa-a conser/a sus caracerísicas -e alimeno compleo, -ebi-o a su riqueza en grasas emulsi5ic-as, -esacan-o las buíricas -e la manequilla, proeínas como la caseína, azGcares como la lacosa,
/iaminas liposolubles como las A, D y E y minerales, principalmene el calcio y magnesio, ya que su 5unción principal es alimenar a sus crías, al ener un raamieno ya sea 5ísico o químico como a lec7e comercial se per-er en algunas proporciones la cani-a- -e proeínas propias -e esa*C+lores, !"## †
P9ómo po-ríamos saber que una susancia -esconoci-a es una proeínaQ EHisen /arios mo-os para -eerminar si una susancia -esconoci-a es una proeína los mo-os ms usa-os son4 Ω La reacción del Biuret 4 Si una solución 5ueremene alcalina -e sul5ao cGprico C9uS:; se aña-e a una solución -e proeína se 5orma una compleo enre el ion cGprico y los enlaces pepí-icos, con aparición -e una coloración /iolea pGrpura, que presena un mHimo -e absorción a 2;" nm Ω El método de Lowry: es un mo-o colorimrico -e /aloración cuaniai/a -e las proeínas que consa -e -os eapas , la reacción -e Biure y la reacción -e +olin* Ω Método de Bradford: 9onsise en la 5ormación -e un compueso -e a-sorción -e coloración azul enre los resi-uos -e aminoci-os bsicos -e las proeínas y el colorane Azul 9oomassie* Ω Método del ácido Bicincónico: Es basa-o en la re-ucción en me-io alcalino -e 9uCII a 9uCI en me-io alcalino y la 5ormación -e un compleo ci-o bicincónico49uCI, con un mHimo -e absorbancia a 2$! nm* Ω Absorción en el ultravioleta4 )as proeínas poseen una ban-a -e absorción a !N" nm como consecuencia -e la absorción -e los resi-uos -e irosilo y ripo5anilo en esa región -el especro* Ω Métodos inmunológicos: Son mo-os especí5icos, basa-os en la reacción anígenoanicuerpo* C.o-ríguez, !"#0
†
PFor qu el reaci/o -e Biure no es Gil en la i -eni5icación -e aminoci-osQ )a reacción -e Biure se basa en la 5ormación -e un compueso -e color /iolea, -ebi-o a la 5ormación -e un compleo -e coor-inación enre los iones 9u!@ y los pares -e elecrones no compari-os -el nirógeno que 5orma pare -e los enlaces pepí-icos, un aminoci-o no presena enlaces pepí-icos ya que los aminoci-os son compuesos que se combinan para 5ormar proeínas, por al razón el reaci/o -e Biure reacciona solo con proeínas y no con sus aminoci-os* C.amos, !"##
†
P'na proeína coagula-a po-ría -ar la reacción -e BiureQ Si, ya que el reaci/o -e Biure reacciona con cualquier ipo -e proeína sea esa liqui-a o sóli-a, la Gnica con-ición o limiane -e ese mo-o es la presencia -e enlaces pepí-icos en la muesra a analizar* CSoria, !"#!
†
P%u grupos 5uncionales se re/elan en la reacción -e 6in7i-rina Q Esa es una reacción para cualquier aminoci-o y es -ebi-o a la presencia -el grupo amino C6>!, -e manera -e que o-os los al5a aminoci-os y por supueso las proeínas -an posii/a a esa reacción* A-ems -e cualquier susancia proeica que conenga un grupo al5a6>!* C9orrea, !""L
†
P%u papel uega la emperaura en la prueba con la 6in7i-rinaQ )a emperaura uega un papel 5un-amenal en esa prueba ya que para obener resula-os precisos en esa prueba se necesia una emperaura mayor a la emperaura ambiene o un iempo ms prolonga-o Cms -e ; min pue-e -ar un resula-o 5also posii/o* CArias, !"#2
†
PEs a-ecua-a la reacción -e 6in7i-rina para -isinguir aminoci-os -e proeínasQ PFor quQ Sí, porque la reacción -e 6in7i-rina .eacciona con o-os los aminoci-os al5a cuyo p> se encuenra enre ; y N, -an-o una coloración que /aría -e azul a /iolea inenso, lo que ayu-ara a ener una i-ea -e los posibles aminoci-os que se encuenran en ese iner/alo -e p>* CMn-ez, !""$
BIBLIOGRAFÍA: Arias A* C!"#2* Fruebas bioquímicas para la i-eni5icación -e bacerias -e imporancia clínica* Bogo 9olombia* !-a E-ición* .ecupera-o el !N -e mayo -e !"#$ -e4 7ps411booJs*google*com 9orrea 3* C!""L* Froeínas y reacción -e 6in7i-rina .ecupera-o el !N -e mayo -e !"#$ -e4 7p411KKK*bioquimica*-ogsleep*ne13eoria1arc7i/os1'ni-a-0"*p-5 Díaz
9*
C!"";*
+iome,
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el
!N
-e
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-e
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-elec7e uirrez * C!"#;* Mo-os -e cuani5icación -e proeínas* .ecupera-o el !N -e mayo -e !"#$ -e47p411KKK*uco*es1-pos1bioquimicabiolmol1p-5s1!?!"M?90?NL3:D:S
?!"FA.A?!")A?!"9'A63I+I9A9I?90?L06?!"DE?!"F.:3E ?90?ND6AS*p-5 >ernn-ez O* !"#;* )a lec7e y sus proeínas* .ecupera-o el !N -e mayo -el !"#$ -e 7p411alimenosproeinas*com1lec7e Oaramillo )* !""* El abuso -e las bebi-as con gas* .ecupera-o el !N -e mayo -el !"#$ -e 7p411KKK*-salu-*com1in-eH*p7pQpagina=ariculoTc=00 )icara, .* C!"##* El 7ue/o4 )as cuali-a-es nurii/as -e un eHcelene alimeno proico* .ecupera-o el !N -e mayo -e !"#$ -e4 7p411KKK*zona-ie*com1comi-a17ue/o propie-a-es*7m )ópez A* !"#"* Froeínas -e lec7e* .ecupera-o el !N -e mayo -el !"#$ -e 7p411KKK*5oo- in5o*ne1es1proein1milJ*7m Mn-ez A* C!""$* Mo-os cuaniai/os para la i-eni5icación -e aminoci-os y proeínas* .ecupera-o
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!N
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mayo
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.ecupera-o
el
!N
-e
mayo
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C!"#!* In5ormación nuricional .ecupera-o el !N -e mayo -e !"#$ -e4
7p411KKK*reylec7e*com1comerciales*p7p .o-ríguez D* C!"#0* Mo-os -e anlisis -e proeínas .ecupera-o el !N -e mayo -e !"#$ -e4 7p411KKK;*uaen*es1esiles13EMA0F.:3EI6ASalumno*p-5 .uiz M* !"#2* E5ecos negai/os -e las bebi-as gaseosas* .ecupera-o el !N -e mayo -el !"#$ -e gaseosas*7ml
7p411KKK*buenasalu-*ne1!"#21"!1#21e5ecosnegai/os-elasbebi-as
Snc7ez I* !"#2* I-eni5icación -e proeínas* .ecupera-o el !N -e mayo -el !"#$ -e 7p411-ocumens*ips1-ocumens1in5orme-ebioquimicai-eni5icacion-eproeinas !"#0#*7ml Soria M* C!"#!* .eacción -e Biure* .ecupera-o -e4 7ps411KKK*clubensayos*com13emas Varia-os1.eaccionDeBiure1L!20*7ml 3orres E* !"#;* 9omposición -e la lec7e y /alor nurii/o* .ecupera-o el !N -e mayo -el !"#$ -e 7p411KKK*agrobi*com1In5oRecnica1ana-eria1pro-Rlec7era1A"""""!pr*7m