PRÁCTICA 5: ACCIÓN DE LOS INHIBIDORES COMPETITIVOS Y NO COMPETITIVOS SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA I. REACTIVOS A UTILIZAR -
Buff Buffer er fosf fosfat ato o 0.1 0.1 M, pH 7.2 7.2
-
Succ Succin inat ato o de de sodi odio 0.1 0.1 M
-
Succ Succin inat ato o de de sodi odio 0.5 0.5 M
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2 – 6 Dic Diclo loro rofe feno noli lind ndof ofen enol ol
-
Mal Malonat onato o de sodi sodio o 0.1 0.1 M
-
Cloruro de de e ercurio
-
Hoo! oo!en eni" i"ad ado o #ep$ #ep$ti tico co 10 %
II. PROCEDIMIENTO /B)S C)M)S +l Buffer fosfato 0.1M pH 7.2 Succinato de sodio 0.1 M Succinato de sodio 0.5 M Cloruro de ercurio 0.1 M Malonato de sodio 0.1 M 2 – 6 diclorofenolindofenol Hoo!eni"ado 10 %
3 2.0 1.0 1.0
33 1. 0.2 1.0 1.0
333 1. ' 0. 2 0. 5 1. 0 1. 0
34 1.' 0.2 0.5 1.0 1.0
4 1.0 0.5 0.5 1.0 1.0
De&ar en reposo por '0 inutos a la teperatura a(iente. )(ser*ar los resultados en cada uno de los tu(os +ca(io de color. C)M)S Succinato de sodio 0.5 M Buffer fosfato 0.1M pH 7.2
33 0 .5
333 0 .5 -
34 0 .5 -
De&ar en reposo 15 inutos a la teperatura a(iente lue!o o(ser*ar los resultados.
III. RESULTADOS a) TUBO DE ENSAYO 01: n este prier
tu(o encontraos
(uffer
fosfato, el indicador +2,6-
diclorofenolindofenol la en"ia, no lle!aos a encontrar sustrato por tanto no se reali"a la reaccin al no #a(er aporte de electrones. or consi!uiente o(teneos el color a"ul.
b) TUBO DE
ENSAYO 02:
n el tu(o 33 teneos
(uffer fosfato, sustrato, en"ia
+des#idro!enasa
succ8nica el indicador. or tanto si se
lo!ra una reaccin catal8tica a 9ue #a productos, #a li(eracin de electrones esto lle*a a 9ue el indicador *ar:e de color, #aciendo 9ue el color a"ul se decolore.
) TUBO DE
ENSAYO 0!:
n el tu(o 333 ade$s
del (uffer fosfato, sustrato, en"ia e
indicador ta(i;n
presenciaos un in#i(idor
copetiti*o +alonato
de sodio. or tanto este in#i(idor
ocupar:a el lu!ar del sustrato no se producir:a reaccin 9uedar:a de color a"ul.
") TUBO DE ENSAYO 0#: n el tu(o 34 teneos (uffer fosfato, sustrato, en"ia e indicador, ade$s presenciaos un in#i(idor no copetiti*o +cloruro de ercurio. or consi!uiente la presencia de este in#i(idor no peritir$ 9ue se lle*e a ca(o la reaccin 9uedando de un color a"ul dic#o tu(o.
$) TUBO DE ENSAYO 05:
Se coloc succinato alonato, a(os copitieron por unirse al sitio acti*o de la des#idro!enasa succ:nica sin e(ar!o de(ido a 9ue la concentracin de succinato+sustrato fue un poco aor 9ue la del alonato +in#i(idor, la reaccin catal:tica pudo lle*arse a ca(o pero no de fora copleta. sto pudo e*idenciarse en la coloracin a"ulada 9ue a
U%&'&(a*+ '*+ %,b*+ II- III IV /aa $ '* ,$ *,$ ',$3* "$ a3$3a'$ &$%a+ +,+%a4&a+: a
TUBO DE ENSAYO 02: ste tu(o se antiene i!ual 9ue en el sistea anterior, nos *a a ser*ir coo tu(o control para poder co pararlo con las de$s reacciones.
(
TUBO DE ENSAYO 0!: n el si!uiente tu(o en un inici se detu*o la reaccin por edio de un in#i(idor +alonato de sodio 9ue *a a actuar de anera re*ersi(le, a 9ue al a!re!arle $s sustrato al sistea, este in#i(idor fue despla"ado la reaccin continu su rito. or tanto nos indica 9ue el in#i(idor usado *endr:a a ser copetiti*o. os daos cuenta de esto a 9ue el indicador nos deuestra una *ariacin en el color, #aci;ndose $s claro.
c
TUBO DE ENSAYO 0#: n el tu(o 34 se #i"o uso de un in#i(idor +cloruro de ercurio, en este tu(o a pesar de 9ue se le a!re! aor cantidad de sustrato no pudios #acer 9ue la reaccin contin
IV. DISCUSIÓN: n esta pr$ctica identificaos 9ue el sustrato *endr:a a ser el succinato de sodio, la en"ia es el #oo!eni"ado des#idro!enasa succ:nica los in#i(idores lo conforar:an el cloruro de ercurio +in#i(idor no copetiti*o el alonato de sodio +in#i(idor copetiti*o. a(i;n #aceos uso de un indicador redo= 9ue estar:a representado por el 2,6-diclorofenolindofenol, 9ue en estado o=idado es de color a"ul oscuro.
Cuando el 2,6-diclorofenolindofenol participa en un estado redo= se o(ser*ar:a un ca(io de color si es 9ue #a reaccin si es 9ue no, la coloracin a"ul se antendr:a. stos ca(ios de color nos auda a deterinar cuando una reaccin se reali" cuando se interrupi por in#i(idores.
V. CONCLUSIONES: Se deostr 9ue en el sistea en"i$tica des#idro!enasa succ:nica, el alonato de sodio el cloruro de ercurio act
VI. CUESTIONARIO 1. P* ,6 $' a'*4a%* $+ &47&b&"* */$%&%&*8 l alonato es un in#i(idor copetiti*o por9ue copite con el succinato por unirse al sitio catal:tico de la des#idro!enasa succ:nica.anto el succinato coo el alonato pueden unirse al sitio acti*o de la des#idro!enasa succ:nica por tener estructuras 9u:icas see&antes, forando un cople&o S o 3. Sin e(ar!o, dado 9ue el alonato slo contiene un car(ono alfa, no puede des#idro!enarse por lo tanto i pide la foracin de producto.
2. P* ,6 $' '*,* "$ $,&* $+ &47&b&"* 4* */$%&%&*8 l cloruro de ercurio es un in#i(idor no copetiti*o por9ue no copite con el sustrato+en este caso succinato por unirse a la en"ia des#idro!enasa succ:nica. ste in#i(idor presenta una estructura poco parecida a la del succinato, en consecuencia se une a una parte de la en"ia diferente al sitio catal:tico.
!. C9* /*"a ,+%$" "$*+%a ,$ 'a &47&b&&94 /*",&"a /* $' '*,* "$ $,&* $+ * 4* $$+&b'$8 Se podr:a deostrar 9ue el cloruro de ercurio es un in#i(idor re*ersi(le si ;ste se eliina del edio por di$lisis o siple dilucin.
#. D$ ,+%$" /* '* $4*+ "*+ $;$/'*+ "$ +,+%a4&a+ ,$ /*",$4 &47&b&&94 */$%&%&a $4 $' +&+%$a D$+7&"*3$4a+a +,4&a<+,&4a%*- a"$=+ "$ a'*4a%* ,%&'&(a"* $4 $' /$+$4%$ $>/$&$4%*. =isten sustancias parecidas al succinato 9ue pueden co(inarse con la des#idro!enasa succ:nica coo>
?lutaato
)=alato
)=alacetato @-aino(en"oato @-aino(encenosulfonaida
5. S$?a'$ /* '* $4*+ %$+ $;$/'*+ "$ +,+%a4&a+ ,$ /,$"$4 /*",& &47&b&&94 4* */$%&%&a $$+&b'$- +&4 *4+&"$a $' '*,* "$ $,&*.
Cianuro> 3n#i(e a la citocroo o=idadsa
Aluoruro> eue*e iones Ma!nesio Man!aneso in#i(iendo a la en"ia enolasa consecuenteente a la !luclisis.
3doacetato> 3n#i(e a las en"ias 9ue ten!an !rupos SH- en sus centros acti*os.
@. ,6 "&$$4&a+ /,$"$ ,+%$" $+%ab'$$ $4%$ 'a &47&b&&94 */$%&%&a 'a &47&b&&94 a'*+%6&a8
TIPOS CRITERIOS
INHIBICIÓN
INHIBICIÓN
COMPETITIVA
ALOSTRICA
Sitio
L,3a "$ ,4&94
catal:tico
de
la
Sitio
alost;rico
de
la
en"ia
en"ia
Siilar a la del sustrato
oca o nin!una siilitud
P**a $+$ "$ 'a
uento
con el sustrato Disinucin
&47&b&&94
concentracin de sustrato
E+%,%,a
de
la
concentracin
de
la del
producto final
. D6 /* '* $4*+ "*+ +$$;a4(a+ $4%$ 'a &47&b&&94 4* */$%&%&a $$+&b'$ $ &47&b&&94 a'*+%6&a.
oca o nin!una siilitud estructural con el sustrato
/nin a un lu!ar diferente al sitio catal:tico
/nin es re*ersi(le no co*alente
VII. REERENCIAS BIBLIOFRAICAS Murra , Bender D, Bot#a M, ennell E, odFell 4G, Geil . Harper Bio9u:ica •
3lustrada. 2 dicin. M;=ico> ditorial Mc?raF-Hill 2012. elson DI, Co= MM. rincipios de Bio9u:ica. 6ta ed. Barcelona> ditorial )e!a 201'.
