Practica 6 de Bioquimica

Práctica N° 6: Acción de la xantino dehidrogenasa de la leche

Resultados: En la masa existe enzima llamada xantino deshidrogenasa; lo que estamos tratando de comprobar es la acción de esta enzima frente a un sustrato en este caso nosotros estamos incorporando el sustrato, siendo este el aldehído fórmico. Observaremos durante el procedimiento la acción de la enzima deshidrogenasa de la leche frente al aldehído fórmico, es decir la acción del xantino deshidrogenasa ello lo hacemos porque es uno de los ciclos que ocurre en los moluscos y en este caso, la leche. La idea es comprobar que el aldehído fórmico gracias a la xantino deshidrogenasa lo transforma en productos de ácido fórmico, ello podemos comprobarlo ya que el ácido fórmico constituye radicales hidrógenos, y este radical hidrogeno en condiciones anaerobioticas va transformar el FAD a FAD reducido y cuando se reduce este FAD a su vez va a oxidar al azul de metileno, quien este último para nosotros es el indicador, así que si existe decoloración de un tubo quiere decir que ha ocurrido todo el proceso ya descrito. Y por otro lado como este proceso es anaerobiotico no debe de haber presencia de oxígeno, para que el oxígeno no tenga ninguna reacción en este proceso debemos de colocar y agregar a los tubos, aceite; así estaríamos cerrándolo como una especie de capa aunque para ello también participa la parafina.

El alopurinol es un inhibidor de enzima. Y el aldehído fórmico es un sustrato.

Realizando

el

procedimiento

tendremos

como

resultado

la

indicado imagen

adjunta, siendo su color característico el celeste. Posteriormente haremos control cada 5 minutos en los que tienen que decolorarse; con temperatura a 37°C.


Cada control lo apuntaremos en la siguiente tabla

SISTEMAS Sustrato Enzima Decoloración de 0-5'

Decoloración 510' Decoloración 10-15'

TUBO 1

TUBO 2

TUBO 3

Aldehído fórmico Xantino deshidrogenasa -



Ligeramente oscuro Ligeramente oscuro

Ligeramente oscuro Claro

Más claro Más claro

OBSERVACIÓN

Se observa una ligera decoloración del aceite en los 3 tubos volviéndose transparente. I y II más oscuros I y III cambian, el tubo II presenta más descoloración.

Como producto final: El tubo 1: Tiene descoloración es decir está más transparente; ocurre toda la reacción la cual lo volvió incoloro. El tubo 2: Lo hervimos para inactivar la enzima, pero entonces no cambia color. El tubo 3: Alopurinol es quien inhibe la enzima, entonces la enzima no se forma. La condición es de acuerdo a la concentración, puede o no puede decolorar siendo su color entre celeste y blanquecino (intermedio).


I Decolorado

II Normal (celeste)

III Empieza a decolorarse

Discusión y conclusión: En la experiencia desarrollada hemos observado la actividad de una enzima en una sustancia orgánica (natural). En nuestra experiencia interviene el indicador de azul de metileno el cual usamos el más diluido para que el resultado sea el esperado, caso contrario si fuese más concentrado no se podría observar detalladamente la reacción, entonces la operación tendría que rehacerse. Ello ocurrió con el grupo de anterior horario:

Con la reacción de color osc puede

observar

ocurrió. En la experiencia también interviene la parafina, es decir la vela; quien reforzará la capa del aceite para que la reacción sea anaeróbiotica, es decir para que no intervenga el oxígeno. En este caso no hemos contado con la parafina, intuyendo así que el material no era indispensable para el desarrollo de la experiencia. Finalmente hemos cumplido con el objetivo dado, el cual sería determinar cualitativamente la acción de la xantino deshidrogenasa presente en la leche de vaca.

la

reacci

Practica 6 de Bioquimica

Recommend Documents