LAPORAN TETAP PRKATIKUM TEKNOLOGI BIOPROSES IDENTIFIKASI IDENTIFIKASI PRAKTIKAN
Nama
: Chandra Fitri Kolakaningrum
NIM
: 03031381320018 03031381320018
Shift /Kelompok
: Senin Siang / 7
I.
JUDUL PERCOBAAN
: Inokulai
II.
TUJUAN PERCOBAAN
1! Mengetahui Mengetahui media"media media"media #ang digunakan digunakan dalam inokulai inokulai 2! Menget Mengetahu ahuii $ara $ara mengi mengiola olai i mikr mikro%a o%a 3! Mengetahui Mengetahui metode"metod metode"metodee dalam dalam teknik teknik inokulai inokulai III.
DASAR TEORI 3.1. 3.1. Inok Inokul ulas asii
&alam %idang ilmu mikro%iologi' untuk dapat menelaah %akteri khuun#a dalam kala la%oratorium' maka terle%ih dahulu kita haru menum%uhkan mereka dalam uatu %iakan #ang mana di dalamn#a han#a terdapat %akteri #ang kita %utuhkan tere%ut tanpa adan#a kontaminai dari mikro%a lain! (iakan #ang ema$am ini %iaan#a dikenal dengan itilah %iakan murni' untuk melakukan hal ini' harulah dimengerti )eni")eni nutrien #ang di i#aratkan oleh %akteri dan )uga ma$am"ma$am lingkungan *iik #ang men#ediakan kondii optimum %agi pertum%uhan %akteri tere%ut! Inokulai adalah menanam inokula e$ara aeptik ke dalam media teril %aik pada media padat maupun media $air! Inokula adalah %ahan #ang mengandung mikro%a %aik dalam keadaan $air maupun padat! +u)uan inokulai adalah untuk memurnikan memurnikan'' mengidenti* mengidenti*ikai' ikai' merema)akan' merema)akan' dan men#impan men#impan mikro%a! mikro%a! (iakan (iakan murni murni dilaku dilakukan kan untuk untuk keperlu keperluan an diagn diagnoti otik' k' karakt karakteri eriai ai mikroo mikroorga rganim nime' e' indutri *armai dan kegiatan lain #ang %erkaitan dengan mikroorganime! Nutrii dan lingkungan #ang menun)ang pertum%uhan mikroorganime erta uatu teknik ker)a aepti #ang dapat men$egah adan#a kontaminan dalam %iakan diperlukan diperlukan untuk mendapatkan mendapatkan kultur #ang murni! ,en$emaran terutama %eraal dari dari udara udara #ang #ang mengan mengandun dung g %an#ak %an#ak mikroo mikroorg rgani anime! me! -ntuk -ntuk mening meningkat katkan kan ke%erhailan inokulai mikro%a diperlukan %e%erapa media #aitu media tum%uh' 1
&alam teknik %iakan murni tidak a)a diperlukan %agaimana memperoleh uatu %iakan #ang murni' tetapi )uga %agaimana memelihara erta men$egah pen$emarann#a!
Inokulai
dimakudkan
menum%uhkan
dan
mendapatkan
populai mikro%a #ang murni! Inokulai adalah kegiatan memindahkan %akteri dari medium #ang lama ke medium #ang %aru dengan ketelitian #ang angat tinggi! Media untuk mem%iakkan %akteri harulah teril e%elum digunakan! ,en$emaran terutama %eraal dari udara #ang mengandung %an#ak mikroorganime! ,emindahan %iakan mikro%a #ang di%iakkan haru angat hati" hati dan mematuhi proedur la%oratorium agar tidak ter)adi kontaminai oleh mikroorganime dari lingkungan luar! leh karena itu' diperlukan teknik"teknik dalam pem%iakan mikroorganime #ang die%ut dengan teknik inokulai %iakan! Iolai %akteri merupakan uatu $ara untuk memiahkan mikro%a tertentu dari lingkungan ehingga diperoleh kultur atau %iakan murni! da %e%erapa $ara umum #ang dapat dilakukan #aitu dengan $ara gore' $ara te%ar' $ara tuang dan metode tuuk! Se$ara alami' %akteri di alam ditemukan dalam populai $ampuran! an#a dalam keadaan tertentu a)a populai ini ditemukan dalam keadaan murni! -ntuk dapat mempela)ari i*at %iakan' mor*ologi' dan i*at alin#a' maka organime #ang akan diteliti haru dapat dipiahkan! Ini %erarti %aha haru ada %iakan murni #ang han#a mengandung atu )eni %akteri
a)a!
menum%uhkan
+eknik iolai mikro%a
mikroorganime adalah
diluar
dari
lingkungan
uatu uaha
alamiahn#a!
untuk
,emiahan
mikroorganime dari lingkungann#a ini %ertu)uan untuk memperoleh %iakan %akteri #ang udah tidak %er$ampur lagi dengan %akteri"%akteri dan die%ut %iakan murni! Kegagalan dalam pemindakan mikro%a dapat men#e%a%kan kontaminai pada pertum%uhan mikro%a di alam media' ehingga #ang melatar%elakangi pengadaan praktikum #ang dilakukan ini adalah untuk mengetahui teknik iolai mikroorganime agar tidak ter)adi kontaminai dalam pertum%uhan mikro%a! -ntuk memperoleh %iakan murni dapat dilakukan pengen$eran dengan menggunakan %ahan $air atau padat! ,ada mulan#a digunakan gelatin e%agai %ahan pemadat! +eknik untuk memperoleh %iakan murni ada 3 $ara' #aitu: teknik penggorean agar' teknik agar tuang' teknik agar e%ar! +eknik inokulai
1.
merupakan uatu peker)aan memindahkan %akteri dari medium #ang lama ke medium #ang %aru dengan tingkat ketelitian #ang angat tinggi! &engan demikian akan diperoleh %iakan mikroorganime #ang dapat digunakan untuk pem%ela)aran mikro%iologi! ,ada praktikum ini akan dilakukan teknik inokulai %iakan mikroorganime pada medium teril untuk mempela)ari mikro%iologi dengan atu kultur murni a)a! Identi*ikai %iakan mikroorganime ering kali memerlukan pemindahan ke %iakan egar tanpa ter)adi pen$emaran! ,emindahan mikroorganime ini dilakukan dengan teknik aeptik untuk mempertahankan kemurnian %iakan elama pemindahan %erulang kali! Mikroorganime dapat ditum%uhkan dalam %iakan $air atau padat! Kekeruhan dalam kaldu menun)ukkan ter)adin#a pertum%uhan mikroorganime! (ila mikroorganime menumpuk pada daar ta%ung maka akan mem%entuk edimen' edangkan pada permukaan kaldu pertum%uhann#a terlihat e%agai pelikel! (erdaarkan hal diata' maka dilakukan praktikum Inokulai dan pemurnian %akteri ini guna untuk mem%erikan pemahaman kepada mahaia untuk mengiolai dan menginokulai %akteri dari lingkungann#a di alam! ,enanaman %akteri atau %iaa die%ut )uga inokulai adalah peker)aan memindahkan %akteri dari medium #ang lama ke medium #ang %aru dengan tingkat ketelitian #ang angat tinggi! -ntuk melakukan penanaman %akteri inokulai4 terle%ih dahulu diuakan agar emua alat #ang ada dalam hu%ungann#a dengan medium agar tetap teril' hal ini agar menghindari ter)adin#a kontaminai! da %e%erapa tahap #ang haru dilakukan e%elum melakukan teknik penanaman %akteri inokulai4' #aitu: 1! Men#iapkan ruangan 5uang tempat penanaman %akteri haru %erih dan keadann#a haru teril agar tidak ter)adi kealahan dalam pengamatan atau per$o%aaan !dalam la%otarium pem%uataanerum 6akin dan e%again#a! Inokulai dapat dilakukan dalam e%uah kotak ka$a en$at 4 udara #ang leat dalam kotak tere%ut dileatkan aringan melalui uatu )alanagar tekena inar ultra6iolet! 2! ,emindahan dengan pipet
1.
Cara ini dilakukan dalam pen#elidikan air minum atau pada pen#elidikan untuk diam%il1 ml $ontoh #ang akan dien$erkan oleh air e%an#ak ml murni! 3! ,emindahan dengan kaat inokulai Kaat inokulai e%alikn#a dari platina atau nikel !u)ungn#a %oleh luru )uga %oleh %erupa kolongan #ang diametrn#a 1"3mm! &alam melakukuan penanaman %akteri kaat ini terle%ih dahulu dipi)arkan edangkan ian#a tungkai $ukup dileatkan n#ala api a)a etelah dingin kem%ali kaat itu dientuhkan lagi dalam pada n#ala! Media +S adalah media #ang dikenal e%agai media #ang umum karena media ini dapat digunakan untuk menum%uhkan mikrooorganime euai #ang diinginkan! Sedangkan media o%ell adalah media #ang elekti*' karena media ini han#a dapat ditum%uhi oleh %akteri #ang %eraal dari air laut a)a! Iolai
%akteri
adalah
uatu
kegiatan
memiahkan
%akteri
dari
lingkungann#a di alam! Inokulai %akteri merupakan kegiatan menum%uhkan %akteri e%agai kultur murni dalam media %uatan #aitu media +S dan media 9o%ell 221;! Sedangkan puri*ikai #aitu permurnian %akteri kultur #ang telah diiolai! +eknik iolai mikro%a untuk memiahkan dan mengidenti*ikai' )eni mikro%a dari %iakan dapat diklai*ikaikan %erdaarkan i*at pertum%uhan #ang nampak pada media! 3.. T!knik Inokulasi
Inokulai adalah kegiatan memindahkan %akteri dari medium #ang lama ke medium #ang %aru dengan tingkat ketelitian #ang angat tinggi! Iolai adalah kegiatan memiahkan %akteri dari lingkungann#a dialam! da %e%erapa metode #ang digunakan untuk mengiolai %iakan murni mikroorganime' #aitu metode gore' metode te%ar' metode tuang' metode tuuk' metode penanaman pagar' dan metode pengen$eran! 3!2!1! Metode
1.
digorekan di permukaan media agar nutrien dalam $aaan petri dengan )arum pindah lup inokulai4! &i antara gari"gari gorean akan terdapat el"el #ang $ukup terpiah ehingga dapat tum%uh men)adi koloni! Cara penggarian dilakukan pada e%uah medium pem%iakan padat %entuk lempengan! (ila dilakukan dengan %aik dan %enar' teknik inilah #ang paling prakti! &alam penger)aann#a terkadang %er%eda
pada maing"maing
la%oratorium tapi
tu)uann#a adalah ama #aitu untuk mem%uat gorean e%an#ak mungkin pada lempengan medium pem%iakan! da %e%erapa metode penggorean #ang %er%eda' namun ke emua metode %ertu)uan untuk meletakkan e%agian %ear organime pada %e%erapa gorean pertama! pa%ila e%aran dilakukan dengan menggerakkan kaat gelang kian kemari dari atu %agian ke %agian lain' maka pada $aan petri' %akteri #ang tertinggal pada kaat gelang emakin %erkurang! =ika dilakukan e$ara empurna' gorean akhir akan meninggalkan %akteri indi6idual $ukup terpiah atu ama lain' ehingga etelah mengalami pertum%uhan' koloni #ang %eraal dari %akteri indi6idual akan %enar"%enar terpiah antara atu ama lainn#a! Kemudian koloni tunggal dapat ditinggalkan kemedium teril' dan tum%uh %iakan murni! 3!2!2! Metode +e%ar Setete inokolum diletakan dalam e%uah medium agar nutrien dalam $aan petridih dan dengan menggunakan %atang ka$a #ang %engkok dan teril! Inokulai itu die%arkan dalam medium %atang #ang ama dapat digunakan dapat menginokulaikan pinggan kedua untuk dapat men)amin pen#e%aran %akteri #ang merata dengan %aik! ,ada %e%erapa pinggan akan mun$ul koloni koloni #ang terpiah"piah! 3!2!3! Metode +uang Iolai menggunakan media $air dengan $ara pengen$eran! &aar melakukan pengen$eran adalah penurunan )umlah mikroorganime ehingga pada uatu aat han#a ditemukan atu el di dalam ta%ung! +erdiri ata penginokulaian %iakan $ampuran kedalam ta%ung u)i #ang mengandung agar men$air #ang telah didinginkan pada uhu .> 0C! iin#a diaduk untuk memen$arkan %akteri keeluruh medium! &alam praktek' ering piringan kedua digore kem%ali dengan organim
1.
#ang %eraal dari koloni #ang diidolai untuk men)amin %aha hail #ang diperoleh adalah %iakan murni! 3!2!.! Metode +uuk Metode tuuk #aitu dengan dengan $ara menetekan atau menuukan u)ung )arumoe #ang didalamn#a terdapat inokolum' kemudian dimaukkan ke dalam media! ,er%edaan Inokulai )amur dan %akteri adalah )ika pada inokulai )amur menggunakan )arum oe %entuk %atang! i*a #ang %er%entuk eperti %enang mudah diam%il dengan )arum oe %atang dan mudah ekali tum%uh di dalam uatu media! Sedankan' inokulai %akteri menggunakan )arum oe %entuk %ulat! ,ada u)ung )arum oe #ang %er%entuk %ulat' %akteri akan dapat teram%il dalam )umlah #ang relati* %an#ak! 3!2!>! Metode ,enanaman ,ada gar ,ada metode penanaman pada agar' )ika edikit a)a el diletakkan dalam medium agar' maka tiap el akan tum%uh men)adi koloni #ang terpiah! =ika upeni el $ukup dien$erkan' koloni akan terpiah dengan %aik' ehingga maing"maing memiliki kemungkinan tinggi untuk diturunkan men)adi el tunggal! Namun untuk mem%uat #ang demikian' penting untuk mengam%il atu tipe koloni #ang diinginkan! namun ke emua metode %ertu)uan untuk meletakkan e%agian %ear organime pada %e%erapa gorean! 3!2!! Metode ,engen$eran Metode #ang edikit dapat diper$a#a adalah pengen$eran! Supeni dien$erkan eri dan $ontoh maing"maing pengen$eran ditanam pada agar! =ika han#a edikit $ontoh dari pengen$eran tertentu menun)ukkan pertum%uhan' diperkirakan %aha %e%erapa dari %iakan tadi dimulai dari el tunggal! Metode ini tidak digunakan ke$uali )ika penanaman pada agar tidak dimungkinkan karena %e%erapa alaan!
Iolai ,ada gar Caan ,rinip pada metode iolai pada agar $aan adalah mengen$erkan mikroorganime ehingga diperoleh indi6idu peie #ang dapat dipiahkan dari organime lainn#a! etiap koloni #ang terpiah #ang tampak pada $aan
1.
tere%ut etelah diinku%ai %eraaldari atu el tunggal! +erdapat %e%erapa $ara dalam metode iolai pada agar $aan' #aitu: metode gore kuadran dan metode agar $aan tuang! (ila metode gore kuadran dilakukan dengan %aik akan menghailkan teriolain#a mikroorganime' dimana etiap koloni %eraal dari atu el! 2!
Iolai ,ada Medium Cair Metode iolai pada medium $air dilakukan %ila mikroorganime tidak dapat tum%uh pada agar $aan medium padat4' tetapi han#a dapat tum%uh pada kultur $air! Metode ini )uga perlu dilakukann#a pengen$eran dengan %e%erapa erial pengen$eran! Semakin tinggi dan eringn#a pengen$eran' maka peluang untuk mendapatkan atu el emakin %ear!
3!
Iolai Sel +unggal Metode
iolai
el
tunggal
dilakukan
untuk
mengiolai
el
mikroorganime %erukuran %ear #ang tidak dapat diiolai dengan metode agar $aan/medium $air! Sel mikroorganime dilihat dengan menggunakan per%earan ekitar 100 kali! Kemudian el tere%ut dipiahkan dengan menggunakan pipet kapiler #ang angat halu ataupun mikromanipulator' #ang dilakukan e$ara aepti! &alam kegiatan mikro%iologi pem%uatan iolat dilakukan dengan $ara mengam%il ampel mikro%iologi dari lingkungan #ang diteliti! Kemudian ampel #ang diperoleh dari lingkungan tere%ut di%iakkan di mana pem%iakan dengan mengunakan media uni6eral atau media elekti* #ang pemilihan media %iakann#a tergantung tu)uan #ang akan di$apai! =ika proe pem%iakan menggunakan media uni6eral maka akan diperoleh %iakan mikro%a $ampuran! Sedangkan untuk proe identi*ikai maupun iolai )eni tertentu a)a' dapat dilakukan proe pem%uatan iolat tunggal dari iolat $ampuran tere%ut! Iolat tunggal atau %iakan murni merupakan %iakan #ang aaln#a dari pem%elahan el tunggal! 3.3. Ma"a#$Ma"a# M!%ia
da %e%erapa ma$am media #ang digunakan untuk mekanime atau proe pada per$o%aan inokulai #aitu: 1!
Mixed culture : %erii dua atau le%ih peie mikroorganime!
1.
2!
Plate culture : media padat dalam petridish!
3!
Slant culture : media padat dalam ta%ung reaki!
.!
Stap culture
>!
Liquid culture : media $air dalam ta%ung reaki!
!
Shake culture : media $air dalam ta%ung reaki' penanamann#a diko$ok!
: media padat dalam ta%ung reaki' penanamann#a dituuk!
3.&. S'a(a)$S'a(a) Inokulasi
dapun #arat"#arat dari inokulai' #aitu men#iapkan ruangan dan melakukan pemindahan menggunakan kaat inokulai! 5uangan tempat inokulai haru ke$il' %erih' dan %e%a angin! &inding ruangan #ang %aah akan men#e%a%kan %utiran de%u menempel kepadan#a! ,ada aktu mengadakan inokulai' akan le%ih %aik )ika me)a tempat inokulai itu dialai dengan kain %aah! Sedangkan' pada #arat #ang melakukan pemindahan dengan kaat inokulai' u)ung kaat inokulai e%aikn#a dari platina atau nikrom! (oleh luru atau %erupa kolongan #ang %erdiameter 1"3 mm! ?e%ih dahulu u)ung kaat ini dipi)arkan' edangkan ian#a ampai tangkai $ukup dileatkan pada n#ala api a)a! Setelah dingin kem%ali' u)ung kaat itu dientuhkan ke uatu koloni' mulut ta%ung tempat pem%iakan dipanai etelah um%atn#a di%uka! -)ung kaat #ang ada ampel mikroorganime inokulum4' digeekkan pada medium! Setelah penggeekan eleai' mulut ta%ung dipanai kem%ali! Kemudian dium%at eperti emula! Medium #ang digunakan untuk menum%uhkan )amur ialah medium agar kentang dektroa dan untuk menum%uhkan %akteri ialah medium agar nutrii! =amur #ang tum%uh pada medium agar kentang dektroa tere%ut adalah )amur Aspergilus niger ! Media"media $air merupakan uatu media untuk mem%iakan mikro%a' media ini tentun#a %er%entuk $air #ang dapat digunakan untuk menum%uhkan uatu mikro%a' penelaah *ermentai' u)i"u)i' dan mengidenti*ikai )eni dari uatu mikro%a! Mialkan kita ingin menggunakan media $air %er%entuk agar $air pada Bacillus' Staphylococcus aureus' dan Pseudomonas aeruginosa' %erikut reaki terhadap inokulai pada media $air :
1.
1! Bacillus dengan medium agar $air : ,ada media ini' kita akan melihat %akteri tere%ut dengan adan#a peru%ahan arna pada media $air men)adi keruh! &an kita akan melihat ke%an#akan pertum%uhan %akteri ini %erada di permukaan media $air karena Bacillus ini %eri*at aero% mem%utuhkan okigen4 2! Staphylococcus aureus dengan medium agar $air : (er%eda haln#a dengan Bacillus, mikro%a ini akan tum%uh euai ditempatkann#a' namun a)a mikro%a ini tidak akan mendekati permukaan karena i*at %akteri ini anaero%i$ *akultati*' dan meki dalam media $air' mikro%a ini akan tetap tum%uh! 3! Pseudomonas aeruginosa dengan medium agar $air : (akteri ini akan tum%uh dari permukaan hingga daar ta%ung' dan )ika kita amati' %akteri ini terlihat %erarna ke%iru"%iruan! (akteri ini )uga %eri*at aero% ,ada media agar ini ter%agi men)adi agar miring dan agar tegak dan maing" maing memiliki *ungi tertentu! gar miring dapat digunakan untuk analii kuantitati* #aitu menghitung koloni' edangkan agar tegak untuk menentukan %akteri apakah aero% atau anaero%! +eknik ini le%ih menguntungkan )ika ditin)au dari udut ekonomi dan aktu' tetapi memerlukan ketrampilan"ketrampilan #ang diperoleh dengan latihan! Cara penggarian dilakukan pada medium pem%iakan padat %entuk lempeng! (ila dilakukan dengan %aik teknik inilah #ang paling prakti! &alam penger)aann#a terkadang %er%eda
pada maing"maing
la%oratorium tapi
tu)uann#a ama #aitu untuk mem%uat gorean e%an#ak mungkin pada lempeng medium pem%iakan!da %e%erapa metode penggorean #ang %er%eda' namun ke emua metode %ertu)uan untuk meletakkan e%agian %ear organime pada %e%erapa gorean pertama! pa%ila e%aran dilakukan dengan menggerakkan kaat gelang kian kemari dari atu %agian ke %agian lain! Caan petri' %akteri #ang tertinggal pada kaat gelang emakin %erkurang! =ika dilakukan e$ara empurna' gorean akhir akan meninggalkan %akteri indi6idual $ukup terpiah atu ama lain' ehingga etelah mengalami pertum%uhan' koloni #ang %eraal dari %akteri indi6idual akan %enar" %enar terpiah atu ama lain! ,enggorean #ang empurna akan menghailkan koloni #ang terpiah! Inokulum digorekan di permukan media agar nutrien dalam $aaan petridish dengan )arum pindah tempatn#a! Inokulai adalah pemindahan uatu %iakkan dari uatu tempat %erupa ta%ung reaki ke uatu tempat lainn#a!
1.
I*.
ALAT DAN BA+AN &.1. Ala)
1! +a%ung reaki 2! Caan petri 3! =arum oae .! (urner &.. Ba,an
1! Medium #ang telah )adi 2! Kultur murni 3! lkohol *.
PROSEDUR PERCOBAAN
1! Siapkan ta%ung #ang %erii )amur dan ta%ung medium! 2! ,anakan )arum oae ampai %erpi)ar dan diamkan e%entar! 3! (uka um%at ta%ung )amur' kemudian leatkan dekat n#ala %unen! .! m%illah )amur dengan menggunakan )arum oae! >! (uka um%at ta%ung medium dan mulut ta%ung dileatkan pada n#ala api %unen! ! Maukkan u)ung )arum oae tadi #ang telah mem%aa )amur dengan menggeek"geekkann#a pada permukaan medium dari kiri ke kanan dengan arah dari %aah ke ata medium! 7! +a%ung medium kemudian dium%at lagi! 8! Simpan ta%ung #ang telah ditanami tadi! ! matilah %entuk )amur #ang ter)adi!
1. 10
*III. KESIMPULAN DAN SARAN -.1. K!si#ulan
1! @adah media #ang digunakan dalam inokulai adalah lempengan miring dan lempengan tegak 2! Mikro%a dapat diiolai dengan menutup rapat"rapat adah #ang terdapat mikro%an#a dan dengan meletakkann#a di almari laminating! 3! &alam per$o%aan inokulai ini' metode #ang digunakan adalah metode gore! .! (akteri Aspergillus niger tum%uh dan edikit %erkem%ang %iak tanpa adan#a )amur etelah empat hari di $aan petri! >! ?empengan miring tidak %erhail mengem%ang%iakan Aspergillus niger ! -..
1!
Sa(an
Kedepann#a agar dapat dilakukan 6ariai pengem%ang%iakan %akteri lain elain Aspergillus niger !
2!
Kedepann#a diharapkan terdapat perhitungan e$ara kuantita )umlah %akteri #ang tum%uh etelah inokulai!
3!
Kedepann#a diharapkan %akteri #ang di hailkan dari inokulai ini dapat diman*aatkan untuk per$o%aan"per$o%aan lainn#a!
1.
DAFTAR PUSTAKA
nke' +! 17! Fungal Biotechnology! ?ondon: Chapman all! &id)oeputro' &! 18! DasarDasar !nokulasi! Malang: &)am%atan! Keuma' @idi! 2013! Laporan Praktikum Mikroniologi! nline4 http://anneahira! $om! &iake pada tanggal 2. Fe%ruari 2014! ?aang' ril! 2013! Laporan !nokulasi dan !solasi ! nline4 http://laangarl711! %logpot!$om! &iake pada tanggal 2. Fe%ruari 2014! ,aari%u' &e6ita! 2013! Laporan tetap Praktikum Mikro"iologi #mum! nline4 http://de6itapaari%u!%logpot!$om! &iake pada tanggal 2. Fe%ruari 2014!
1.
