INOKULASI VIRUS INFLUENZA PADA TELUR BEREMBRIO Hari / Tanggal
: Kamis, Kamis, 29 Desember 2011
Waktu
: Pk. 14.00 WITA
Tempat
: Lab. Virologi FKH UNUD
Dosen Pembimbing
:
I.
Tujuan
:
Untuk memperoleh antigen influenza
II.
Metode
:
Metode yang digunakan pada pratikum adalah metode telur t elur berembrio berembrio
III.
Prinsip
:
Virus influenza dibiakkan dalam telur berembrio yang telah berumur 10 ± 12 hari, sehingga virus tersebut akan bereplikasi dalam te lur
IV.
Dasar Teori
:
Virus influenza
Virus influenza termasuk family Orthomyxoviridae, genom virus adalah RNA, sense negative, terdapat 5 genera yaitu : Influenzavirus A, Influenzavirus B, Influenzavirus C, Isavirus dan Thogotovirus.
1
Family : Orthomyxoviridae Genus
Species
Serotipe atau Subtipe
Hospes
Influenzavirus A
Influenza A virus
H1N1, H1N2, H2N2,
manusia, babi,
H3N1, H3N2, H3N8,
burung, kuda
H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H9N2, H10N7 Influenzavirus B
Influenza B virus
Manusia, anjing laut
Influenzavirus C
Influenza C virus
manusia, babi
Isavirus
Infeksi virus salmon
Salmon atlantic
anemia Thogotovirus
Thogoto virus Dhori virus
nyamuk, mamalia ( Batken virus, Dori
kecuali manusia)
virus
Tiga genera dari virus influenza, yang menginfeksi vertebrata adalah sebagai berikut : y
Influenzavirus A : penyebab semua pandemic flu manusia, mamalia, dan burung
y
Influenzavirus B : menginfeksi manusia dan anjing laut
y
Influenzavirus C : menginfeksi manusia dan babi
Virus influenza tipe A
Virus influenza tipe A dapat menginfeksi manusia, burung, babi, kuda, anjing laut, ikan paus, dan beberapa burung lainnya, tetapi burung liar adalah hospes alami untuk virus influenza. Virus influenza tipe A d ibagi dalam beberapa subtype berdasarkan 2 jenis protein yang terdapat pada permukaan virus. Protein tersebut ada lah hemaglutinin ( HA atau HI) dan neuraminidase. Terdapat 16 subtypes HA atau H (H1-H16) dan 9 subtype NA atau N (N1-N9), hal ini memungkinkan terjadinya beberapa kombinasi protein diantara HA dan NA. Subtipe ± subtype tersebut ditetapkan ketika dilakukan 2
analisis filogenetik terhadap nukleotida dan penetapan urutan gen-gen HA dan NA melalui cara deduksi asam amino. Terdapat 16 jenis subtype HA, dan berbagai kombinasi dari kedua jenis protein ini dapat ditemukan. Hanya beberapa virus flu tipe A yang umumnya saat ini menyerang manusia, yaitu H1N1, HIN2, H3N2. Sedangkan beberapa sub-tipe umumnya terdapat pada hewan, misalnya H7N7 dan H3N8 yang menyebabkan penyakit flu pada kuda. Subtype virus influenza tipe A dinamakan berdasar jenis protein HA dan NA, misalnya H1N2 ada lah virus influenza tipe A yang mempunyai jenis protein HA1 dan protein NA2. Sehingga virus Avian Influenza H5N1 adalah virus influenza tipe A yang mempunyai protein HA5 dan NA1. Virus influenza tipe B
Virus influenza tipe B umumnya ditemukan di manusia. Namun tidak seperti virus Tipe A, virus influenza tipe B t idak diklasifikasikan berdasar sub-tipe. Walaupun virus tipe B ini dapat menyebabkan epidemic, tetapi tidak dapat menyebabkan pandemi. Virus influenza tipe B menginfeksi manusia dan a njing laut. Virus influenza B bermutasi lebih lambat dari virus influenza A, sehingga k eragaman genetiknya sangat sedikit. Virus influenza tipe C
Virus influenza tipe C menginfeksi manusia dan b abi. Virus influenza tipe C menyebabkan sakit ringan pada manusia dan tidak menyebabkan epidemic atau pandemi. Virus influenza tipe C tidak digolongkan ke dalam subtype. Inokulasi telur berembrio
Sebelum teknik kultur sel berkembang, banyak virus digandakan dengan telur ayam berembrio. Sampai sekarang teknik ini masih digunakan untuk menumbuhkan virus influenza dengan hasil yang baik. Teknik ini sudah digunakan secara luas pada laboratorium penelitian dan produk vaksin. Telur ayam berembrio adalah salah satu metode yang paling ekonomis dan mudah untuk kultivasi berbagai macam virus. Telur ayam yang subur atau berembrio yang telah dinokulasikan selama 5 sampai 12 hari dapat diinokulasikan melalui kulitnya secara aseptic. Lubang dapat ditutup dengan lilin paraffin dan telurnya diinkubasikan pada 36°C selama jangka waktu yang dibutuhkan untuk
3
pertumbuhan virus. Telur berembrio yang dapat digunakan adalah telur ayam negeri, telur ayam kampong, telur bebek dengan syarat telur-telur tersebut berembrio. Untuk mencegah masuknya bakteri, maka lapisan lilin diluar didnding telur hanya boleh dilap, tidak boleh dicuci dengan sabun. Telur berembrio telah digunakan secara luas terutama untuk pembiakkan virus influenza. Dibandingkan dengan hewan percobaan, telur berembrio mempunyai beberapa kelebihan : a. Steril b. Belum ada perkembangan fungsi imunologis c. Murah, mudah didapat Struktur
telur embrio
Langsung dibawah cangkang t elur terdapat membrane kulit telur yang fibrinous. Membrane membatasi seluruh permukaan dalam telur dan membentuk rongga udara pada sisi tumpul telur. Membrane kulit telur bersama dengan cangkang telur membantu mempertahankan integritas mikrobiologi dari telur, sementara terjadinya difusi gas ke dalam dan keluar telur. Distribusi gas di dalam telur dibantu dengan pembentukan CAM yang sangat bervaskuler yang berfungsi sebagai organ respirasi embrio. Pembentukan membrane ini terjadi berdekatan dengan membrane telur sepanjang telur. Selama pembentukan, membrane membentuk ruangan yang relative besar disebut kantong alantois yang mengandung 5-10 ml cairan allantoic. Embrio secara langsung dikelilingi oleh membrane amnion yang membentuk kantong amnion yang berisi 1-2 ml cairan amnion. Embrio melekat pada kantong kuning telur yang berlokasi kira0kira ditengah telur dan menyuplai kebutuhan nutrisi untuk perkembangan embrio.
4
