UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR CENTRO DE QUÍMICA LABORATORIO DE BIOQUMICA INFORME No. 11 NOMBRES Y APELLIDOS
DESIRE VERGARA MATÍAS VILLABA JOHANNA ZAPATA
CARRERA
MVZ
FACULTAD
Medicina Veterinaria y Zootecnia
PARALELO FECHA DE REALIZACIÓN
B
29/06/2017
GRUPO
HORARIO
10
9:00 – 11:00
TEMA: Reacciones de Precipitación y Coloración de Proteínas OBJETIVOS:
Determinar de forma cualitativa la cantidad de proteína presente en la solución de albúmina. Establecer ante que reactivos precipita y toma una coloración coloración la albúmina.
MARCO TEÓRICO:
Las proteínas son cadenas de aminoácidos que se pliegan adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a cabo miles de funciones. Las proteínas están codificadas en el material genético de cada organismo, donde se especifica su secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los ribosomas. Las proteínas desempeñan un papel fundamental en los seres vivos y son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre ellas funciones estructurales, enzimáticas y transportadoras. (López, 2014) MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES: 12 tubos de ensayo Gradilla Mechero de Bunsen
REACTIVOS: Albúmina de huevo Sulfato cúprico al 5% (CuSO4) Hidróxido de Sodio (NaOH) Ácido nítrico concentrado (HNO3) Hidróxido de amonio al 5% (NH4OH) Ácido sulfúrico concentrado (H 2SO4) Ácido clorhídrico concentrado (HCl) Ácido acético diluido (CH3COOH) Ferrocianuro de potasio (C6H6FeK4) Nitrato de plata al 1% (AgNO3) Acetato de plomo al 5% (Pb(C2H3O2)2) Cloruro mercúrico al 5% (HgCl2) Cloruro férrico al 5% (FeCl3) Cloruro de bario al 5% (BaCl2)
GRÁFICO:
CÁLCULOS, RESULTADOS Y ECUACIONES QUÍMICAS: Según (Zecharies, 2012): BIURET
XANTOPROTEÍCAS
OBSERVACIONES: 1.
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Después de colocar en el tubo de ensayo 1 ml de la solución de proteínas más sulfato cúprico al 5% e hidróxido de sodio en la reacción de Biuret, se evidenció un color azul a violeta, lo que arroja un resultado positivo a la forma cualitativa de la cantidad de proteína que hay en la solución. En la reacción xantoprotéica se observó una coloración anaranjada debido a la presencia de ácido nítrico concentrado e hidróxido de sodio en la albúmina, lo que indica un resultado positivo referente a la cantidad de proteína presente en la solución. Para la acción de los ácidos se utilizó cuatro tubos de ensayo. En el primer tubo de ensayo se observó un precipitado amarillo y blanco por la presencia de ácido nítrico en la solución, en el segundo tubo se distinguió un precipitado blanco y grueso, debido a la presencia de ácido sulfúrico concentrado en la solución de proteínas. En el tercer tubo se observó un precipitado delgado y blanco, eso se debe a la presencia de ácido clorhídrico concentrado en la solución. Finalmente, en el cuarto tubo se agregó ácido acético diluido en la solución de proteínas, pero no se evidenció ningún cambio. En la reacción de precipitación se hizo uso seis tubos de ensayo. En el primer tubo se formó una precipitación gelatinosa debido a que a la solución de proteínas se le agregó ácido acético y ferrocianuro de potasio. Posteriormente, se enumeraron cinco tubos de ensayo. En el primero se observó un precipitado pulverulento (sólido parecido a un polvo fino) gracias a la presencia de nitrato de plata, en el segundo se observó un precipitado caseoso con apariencia de leche cortada debido a la presencia de acetato de plomo en la solución. Debido a la presencia de cloruro mercúrico en el tercer tubo se distinguió un precipitado pulverulento. En el cuarto tubo se evidenció un precipitado gelatinoso como consecuencia de la presencia de cloruro férrico en la solución. Por último, al quinto tubo se le añadió cloruro de bario a la solución de proteínas y no se pudo presenciar cambio alguno.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
1. La reacción de Biuret es positiva ya que la molécula contiene dos uniones peptídicas o más, cercanas entre sí (es decir, tripéptidos en adelante). Se realiza tratando la solución a ensayar con CuSO4 en medio alcalino de NaOH. Se observa el color violeta indicador de la presencia de proteínas en la muestra con la albumina de huevo. El color desarrollado se debe a la formación de un complejo de coordinación con el Cu++. (Juan Carlos Autino, 2013) 2. Para la identificación de reacción xantoproteica se utilizó clara de huevo y ácido nítrico concentrado. La reacción es positiva para los prótidos (molécula compuesta por un conjunto de aminoácidos) que contienen aminoácidos con anillos aromáticos. En la reacción estos anillos se nitran, por lo que aparece el color amarillo intenso de sus derivados nitrados. (Juan Carlos Autino, 2013) 3. Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos
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portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. (Robertis-Hib, 1998) Al realizar la reacción de la muestra de proteínas en medio ácido sulfúrico concentrado aparece color violeta en la interfase solución H 2SO4, provocando un precipitado pulverulento debido a la formación de un colorante similar al índigo este indica la presencia de triptófano como parte de la cadena proteica. (Juan Carlos Autino, 2013) La proteína se desnaturaliza, se presenta un cambio irreversible en su color y se logra observar un precipitado caseoso, el ácido clorhídrico actúa catabolizando sus estructuras. (Buenahora, 2013) A la clara de huevo, el ácido presente en el vinagre (ácido acético) producen la desnaturalización de la proteína llamada caseína, pero no se observó ningún tipo de precipitación. (Patillo, 2008) En la reacción de precipitación la solución de nitrato de plata se utiliza como titulante en las titulaciones por precipitación en donde el ion plata se utiliza para titular iones cloruro, férrico y de bario, como fue en este caso el ion plata título los iones cloruro de manera que el punto final de la reacción se observó al agregar el cromato de potasio en una concentración pequeña (Piña, 2012). Si se ensaya la albúmina del huevo frente a calor, alcohol etílico, sales neutras o a la presencia de un ácido, se observa el efecto de diferentes agentes desnaturalizantes sobre la proteína testigo (albúmina de huevo), cuando esto ocurre, las proteínas pierden las estructuras secundaria y terciaria (y cuaternaria si la tuviere) y dan los diferentes tipos de precipitados como son el gelatinoso(Ácido acético y ferrocianuro de potasio,( Cloruro férrico), pulverulento (Nitrato de plata, Cloruro mercúrico), caseoso(Acetato de plomo ) o en el caso del cloruro de bario no se precipita. (Juan Carlos Autino, 2013)
CONCLUSIONES:
Se obtuvo un resultado positivo en la reacción Biuret, debido a la evidencia de una coloración azul violeta, que demuestra la presencia de péptidos cortos, proteínas y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos . La reacción xantoproteica, arrojó resultado positivo por la evidencia de una coloración anaranjada, que demuestra la presencia de proteínas solubles y compuesto aromático empleando el ácido nítrico concentrado. En la prueba de acción de los ácidos, se evidenció un precipitado caseoso ante la presencia de ácido nítrico y ácido clorhídrico. Con el ácido sulfúrico resultó un precipitado pulverulento, y frente a el ácido acético no se evidencio cambio. Esto es el efecto de desnaturalización en el cual las proteínas son o no oligoméricas. Un precipitado gelatinoso en la prueba de precipitados se logró debido a la presencia de ácido acético, ferrocianuro de potasio y cloruro férrico. Ante el nitrato de plata y cloruro mercúrico resultó un precipitado pulverulento, en la acción del acetato de plomo resultó un precipitado caseoso, y ante el cloruro de bario no evidenció precipitación.
BIBLIOGRAFÍA APA 6TA EDICIÓN:
Buenahora, N. (13 de Septiembre de 2013). prezi.com. Obtenido de prezi.com: https://prezi.com/ulqwouqvsehq/laboratorio-de-proteinas/ Juan Carlos Autino, G. R. (2013). Introducción a la Química Orgánica. Buenos Aires: Universidad de La Plata . López, R. (2014). Las proteínas de los alimentos. Madrid: Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC).
Patillo, L. (2008). soloejemplos.com. Obtenido de soloejemplos.com: http://www.soloejemplos.com/dos-experimentos-de-desnaturalizacion-de-lasproteinas/
Piña, K. J. (26 de Febrero de 2012). blogspot.com. Obtenido de blogspot.com: http://karenjessica92.blogspot.com/2012/02/practica-n-2-volumetria-por.html Robertis-Hib. (1998). FUNDAMENTOS DE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR. Buenos Aires: El ateneo. Zecharies, A. (2 de Junio de 2012). blogspot.com. Obtenido de blogspot.com: http://quimicadesexto2012.blogspot.com/2012/06/informe-de-la-experiencia.html
