FACULTAD FACULTAD DE CIENCIAS CIENCIAS QU MICAS PROCESO PLAN CURRICULAR CONTENIDO DEL INFORME DE LABORATORIO Código: FCQ-P05-F06; Versión: 01; Fecha: 16 de enero de 2017
CONTENIDO DEL INFORME DE LABORATORIO Asignatura:
Toxicología II
Número de práctica:
01
Fecha de realización:
10/04/17
Fecha de entrega:
Integrantes / Grupo N°:
Angueta Mishel Bautista Katherine Guevara Alejandra Rivilla Cristian Vallejos Eduardo
4
NOTA:
17/04/17
1.
Título: Determinación de cannabinoles en orina
2.
Objetivo: Extraer e identificar los principios activos de la marihuana (cannabinoles) de una muestra de orina de consumidores de marihuana.
3.
Fundamento Teórico y Método de la práctica: Fundamento: Cannabinol (CBN) es un cannabinoide psicotrópico que se encuentra en Cannabis sativa y Cannabis indica/afghanica.También es un metabolito de tetrahidrocannabinol (THC). El tetrahidrocannabinol (THC), también conocido como delta-9-tetrahidrocannabinol (Δ9-THC), es el principal constituyente psicoactivo del cannabis. Lo cannabis. Lo aislaron por primera vez en en 1964 Yechiel Gaoni y Raphael Mechoulam, del Mechoulam, del Instituto Instituto Weizmann de Ciencias, en Ciencias, en Rejovot, Rejovot, Israel. Israel. En estado puro, es un sólido vítreo a bajas temperaturas, y se torna viscoso y pegajoso al calentarlo. El THC es poco soluble en agua, pero se disuelve fácilmente en la mayoría de disolventes orgánicos, específicamente lípidos y alcoholes. (UNODC) alcoholes. (UNODC) Para iniciar el análisis de cualquier presunta droga que es incautada, existen esquemas analíticos a seguir. Estos esquemas generalmente se inician con una prueba de screening, que corresponde a un análisis rápido y presuntivo, posteriormente se realizan análisis cualitativos/cuantitativos y finalmente los confirmatorios. La comisión científica SWGDrug (Scientific Working Group for the Analysis of Seized Drugs), realiza una categorización de técnicas analíticas y la la forma en que se recomienda complementarlas para cumplir con los estándares forenses de análisis de drogas incautadas. La comisión del Scientific working group for the analysis of seized drugs (SWGDRG) describe los tipos de métodos empleados en el análisis de drogas, y además señala las alternativas que se pueden emplear cuando no se dispone de todas las metodologías existentes. Cuando una técnica validada como Categoría tipo A está incorporada en un
análisis analítico entonces a lo menos otra técnica (de cualquier Categoría A, B o C) debe usarse. Esta combinación debe permitir identificar la presencia de la sustancia sin la aparición de falsos positivos. La cromatografía en capa fina es una técnica rápida, sencilla y de bajo costo que permite comparar el Rf de varias muestras con un estándar de forma simultánea. (Figueroa, 2015)
Método: Cromatográfico en capa fina. 4.
Procedimiento: 4.1. Equipos, materiales y reactivos: Reactivos Éter de petróleo /hexano Sulfato de sodio anh. KOH 10 N HCl conc. Papel indicador de pH Placa cromatográfica: Sílica gel 60 F254 Ac. Sulfúrico conc. Fast Blue 10% en sulfato de sodio anhidro Vapores de NH3 Eluente : Hexano - Dioxano (9:1) Revelador Fast Blue 1% en agua (preparado en fresco)
4.2.
Materiales y equipos Cámara cromatográfica Equipo de extracción L/L (Embudo de separación.) Lámpara de luz UV 254 y 396 nm Centrífuga Baño María Placas de porcelana excavadas Nebulizador Pipetas de 1, 5, 10 ml Capilares Tubos de vidrio 10 ml Vaso de precipitados Embudo de filtración Pipetas de 1, 5, 10 ml
Procedimiento: Primero se realizó una hidrólisis alcalina, donde en un erlenmeyer de 250 ml se colocó 20mL de muestra de orina, después 2mL de KOH 10N, luego se llevó a B.M. a 55 ° C por 30 min., para acidificación se puso HCL conc. Luego se realizó la extracción, donde a la muestra luego se lo trasvaso a un embudo de separación y luego se añadió a 20 ml de éter de petróleo, agitándolo por 1 min. Para la purificación se filtró el extracto por sulfato de sodio anh. El extracto obtenido se lo separo en dos partes: la primera porción en un pocillo de la placa excavada y la otra mitad concentrar y reservar para la cromatografía.
Cuantitativo Para estas pruebas se utilizó cromatografía de capa fina: Al extracto reservado para CCF concentrado hasta 0.5 ml, se lo sembró en una placa cromatográfica conjuntamente con estándares de cannabinoles. Realizándolo luego el corrimiento con un frente de 10 cm, secando la placa, para finalmente revelado con
reactivo el Fast Blue 1% en agua y exponiéndolo a vapores de NH3, en presencia de cannabinoles apareciendo manchas de color rosado - rojo carmín – púrpura.
Cualitativo En el pocillo de la placa excavada se colocó un pequeño trozo de papel filtro, evaporándolo luego a sequedad el extracto, luego añadir unos mgs. de reactivo Fast Blue al 10% en sulfato de sodio sobre el papel y luego unas gotas de agua.
5.
Resultados
Cálculos:
=
=
=
ℎ
∗ 100
ℎ 4,8 = ∗ 100 8 = 60
ℎ 1,6 = ∗ 100 8 = 20
∗ 100
∗ 100
Tabla N° 1. Pruebas de identificación preliminar. Fast Blue Grupo 1 Positivo Coloración Positivo Grupo 2 rojo carmín Grupo 3 Positivo Positivo Grupo 4 Elaborado por: Angueta y otros. Tabla N° 2. Estándares usados en la práctica ESTÁNDARES Grupo 1-S1 Canabinol, Delta-9-THC Grupo 2-S2 Cannabinol Canabidiol Grupo 3-S3 Grupo 4-S4 Delta-8-THC Elaborado por: Angueta y otros.
Tabla N° 3. Resultados de sustancias presentes en las muestras MUESTRAS Canabinol, Delta-9-THC Grupo 1-M1 Grupo 2-M2 Delta 8- THC, Delta 9- THC, Cannabidiol Delta-9-THC, Cannabinol, Cannabidiol Grupo 3-M3 Grupo 4-M4 Delta-9-THC Elaborado por: Angueta y otros. Tabla N°3. Datos y resultados. X recorrido (cm) X eluente (cm) Rf
Grupo 1 M1 S1 1,6 3,8 2,5
S5 4,5
7
Grupo 2 M2 4 2,5
S2 3,4
Grupo 3 M3 S3 2,3 4,8 4,5
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
20
47,5
31,25
56,25
87,5
50
31,25
42,5
28,75
60
56,25
20
60
Elaborado por: Angueta y otros. 6.
Discusión de resultados De acuerdo a los Rfs obtenidos, podemos observar que, que los grupos 1,2,3 se consiguió los rastros de cada sustancias de acuerdo con sus estándares, Pudiendo observar que en cada muestra de cada grupo encontramos rastros del Delta-9-THC y en relación con su estándar. Mientras que para los resultados de nuestro grupo el recorrido de nuestra muestra fue bien corto de 1,6 cm esto pudo deberse a fallos del proceso a la hora de realizar la práctica, por lo cual se tomó en cuenta al estándar más cercano para deducir de que se estaba hablando que tenía nuestra muestra.
7.
Conclusiones Se logró extraer e identificar los principios activos de la marihuana de una muestra de orina con marihuana, mediante la aplicación de un método cualitativo conocido como Fast Blue que en presencia de cannabinoles presenta una coloración rojo carmín y del método cuantitativo de cromatografía de capa fina con el que se determinaron las distancias de las manchas y se detectó delta-9-THC.
8.
Grupo 4 M4 S4 1,6 4,8
Bibliografía Consultada
Figueroa, M. (2015). Guía técnica toxicología y análisis de cannabis y sus el 9 de Julio de 2017, de derivados . Recuperado http://www.ispch.cl/sites/default/files/GuiaCannabisParte0228122015.pdf UNODC. (s.f.). UNODC. Recuperado el 9 de Julio de 2017, de 2010: https://www.unodc.org/documents/scientific/Cannabis_manual-Sp.pdf
