PRÁCTICA N° 04 DETERMINACIÓN DEL CORPÚSCULO “X” ó CROMATINA SEXUAL ó CORPÚSCULO DE BARR I.
GENERALIDADES La masa cromatínica que es observable en los núcleos interfásicos de células de los mamíferos hembras (con excepción de la zarigüeya) constituye la llamada CROMATINA SEXUAL, CUERPO DE BARR, O CORPÚSCULO “X”; que es microscópicamente distinguible por su fuerte tinción en Carbol-fucsina, y constituye uno de los ejemplos clásicos de heterocromatica facultativa. La regla para determinar el número total de Corpúsculos de Barr (NCB) en un solo núcleo se determina como el número total de cromosomas X (NCX) menos uno. NCB = NCX - 1 La cromatina sexual puede encontrarse en diferentes tipos celulares, tomando formas características: En los neutrófilos segmentados se encuentra a manera de palillo de tambor, en las células nerviosas se encuentra ubicada al centro del núcleo; mientras que en las células epiteliales se encuentra adherida a la membrana interna del núcleo. El tamaño normal del Corpúsculo de Barr varía de 0.7 a 1.2 micras (µ). La forma puede ser triangular, semi-esférica, alargada o circular.
FENOTIPO
MASA CROMATINICA
Nº DE CORPUSCULOS POR NUCLEO
COMPLEMENT O CROMOSOMICO
Varón normal
0
46, XY
Síndrome de Turner
0
45, X
Varón doble Y
0
47, XYY
Hembra normal
1
46, XX
Síndrome Klinefelter
1
47, XXY
Síndrome Triple X
2
47, XXX
Síndrome Tetra X
3
48, XXXX
Síndrome Penta X
4
49, XXXXX
Si el corpúsculo de Barr es pequeño (menor de 0.7µ); o es grande (mayor de 1.2µ), dará lugar a anomalías estructurales del cromosoma “X” como se observa en el siguiente cuadro:
FENOTIPO
MASA CROMATINICA
TAMAÑO DEL CORPÚSCULO
Deleción. Isocromosoma del brazo corto (p)
PEQUEÑO
46, X, del (X)(p) 46, X, del(X)(q) 46, X, i(X)(p)
Cromosoma en anillo
46, X, r(X)
-Isocromosoma del brazo largo (q) -Duplicación
COMPLEMENTO CROMOSÓMICO
46, X, i(X)(q) GRANDE
46, X, dup(X)(q)
La evaluación de la cromatina sexual, es comúnmente realizada en células epiteliales de la mucosa oral mediante coloración Carbol-fucsina. El método consiste en raspado de la mucosa oral y fijación de la muestra en alcohol-éter al 50%, se hidrolizan las láminas con solución de ácido clorhídrico 5 N, y se colorea con Carbol-fucsina, finalmente se realizan los enjuagues en alcohol corriente, alcohol absoluto, se clarifica en Xilol, y se sella la lámina con Bálsamo de Canadá y una laminilla. Para el diagnóstico debe examinarse por lo menos 500 núcleos por lámina y se obtendrá el promedio expresado en porcentaje; para la técnica del Carbol-fucsina, de 0-5% es negativo y más de 5% es positivo. II.
COMPETENCIAS
III.
Comprender el significado genético del Corpúsculo de Barr en relación al sexo. Reconocer la masa cromatínica en los núcleos de las células epiteliales en interfase Diferenciar los núcleos positivos y negativos que le permitan diagnosticar el sexo cromatínico en la muestra estudiada. Conocer el valor del examen de cromatina sexual para el diagnóstico rápido de ciertos síndromes cromosómicos ligados al sexo.
METODOLOGIA La práctica se lleva a cabo revisando laminas preparadas de células epiteliales de mucosa oral coloreadas con Carbol-fucsina; durante la práctica, el docente ayudara con la identificación de los corpúsculos de barr, y la diferenciación entre núcleos positivos y negativos; finalmente el alumno graficara sus observaciones a diferentes aumentos.
IV.
RECURSOS, MATERIALES Y EQUIPO:
Guía de Prácticas Láminas preparadas proporcionadas por el profesor Microscopio con 100 aumentos. Aceite de inmersión. Lápiz, lapiceros y colores
V.
PROCEDIMIENTO LECTURA DE LÁMINAS Y DIAGNÓSTICO: 5.1 OBSERVAR A 10X: Ubicar la muestra en la lámina y observar estructuras puntiformes de color fucsia o lila. 5.2 OBSERVAR A 40X: Diferenciar los núcleos buenos de los inadecuados e identificar el corpúsculo “X” si es posible. 5.3 OBSERVAR A 100X Diferenciar los núcleos que presentan corpúsculo de Barr (positivos) y los núcleos sin corpúsculo (negativos). Observar la morfología y el tamaño de los corpúsculos. Esquematizar sus observaciones en el microscopio
VI. ESQUEMAS Esquematice el Corpúsculo de Barr a 10X
40X
Esquematice el Corpúsculo de Barr a 100X
100X
Realizar el Diagnóstico: contar como mínimo 100 corpúsculo de Barr, y hallar el porcentaje.
núcleos de células con y sin
VII. CUESTIONARIO: 1. ¿Qué es Heterocromatina facultativa?, ¿Cuál es su diferencia con la Heterocromatina constitutiva?
2. ¿En qué consiste la hipótesis de Mary Lyon?
3. ¿Cuáles son los factores que alteran el tamaño normal del corpúsculo de Barr?
4. ¿En qué casos el examen de cromatina sexual no diagnosticaría una alteración cromosómica?
VIII. BIBLIOGRAFÍA: CUMMINGS. “HERENCIA HUMANA”. EGOZCUE. “GENETICA MEDICA”. JORDE-CAREY-WHITE. “GENETICA MEDICA”. SOLARI. “GENETICA HUMANA: FUNDAMENTOS Y APLICACIONES EN MEDICINA”. LISKER-ARMENDARIS. ” INTRODUCCION A LA GENETICA”.
PRÁCTICA N° 01 ARBOL GENEALÓGICO FAMILIAR I.
GENERALIDADES:
La historia clínica en Genética Médica, constituye el primer paso para el estudio de Investigación que se ha de realizar acerca de una posible enfermedad de etiología genética. En Medicina General una historia familiar cuidada puede ayudar al esclarecimiento de situaciones de difícil resolución, pues ella indica el terreno dónde se instala una enfermedad, es decir factores hereditarios que modifican sus manifestaciones, noxas ambientales cuyo conocimiento permite la cura y también la profilaxis en otros casos en actitud preventiva. El interrogatorio al paciente y/o familiares de su historia familiar o ARBOL GENEALOGICO FAMILIAR es fundamental, debiendo ser precisa, oportuna y adecuada, así por ejemplo preguntas importantes como la existencia de abortos espontáneos o provocados, nacidos muertos, retrasados mentales en niños fallecidos precozmente. El Arbol Genealógico, Heredograma o Pedigree es la representación esquemática de la historia de una familia, en la que se indican las personas afectadas y el parentesco que guardan con el propósitus, probando o caso índice. El Arbol Genealógico debe ser claro, informativo y conciso, conteniendo en ellos datos esenciales como: sexo, fecha de nacimiento y muerte, presencia o ausencia de los rasgos o de sus equivalentes, matrimonios consanguíneos, ilegitimidad, abortos (espontáneos o provocados), gemelos (monocigóticos, dicigóticos), afectados, examinados o no examinados. La elaboración del árbol genealógico es un método abreviado, que permite y o ayuda a orientar el interrogatorio, decide cuales son los elementos más importantes para ser estudiados con más detalle, y hace una previsión de los problemas de la interpretación. II.
COMPETENCIAS:
III.
Sugerir cómo iniciar la investigación de una patología de etiología genética, ambiental o multifactorial. Aprender a diagramar y representar los caracteres con los símbolos conocidos. Identificar el defecto o virtud hereditarios en un caso específico. Comprender e interpretar la forma de transmisión de los genes en la familia. Orientar al investigador como llegar al diagnóstico
METODOLOGÍA:
La tarea en clase es” CONSTRUIR SU ÁRBOL GENELÓGICO FAMILIAR (Personal)”. El alumno acudirá a la práctica luego de investigar en casa los datos sugeridos anteriormente, que serán advertidos en la primera clase teórica de la Asignatura, además llevará consigo los materiales requeridos. La elaboración del Arbol Genelógico se inicia con el estudio del PROPÓSITUS (persona que acude al médico como paciente o persona que solicita asesoramiento genético).
Para la elaboración del árbol genealógico deben colocarse los datos más urgentes como: 1.- FILIACIÓN: Nombre completo del paciente:.............................................................................................. Dirección actual:............................................................... Lugar de referencia....................... Sexo ...................................................... Raza ..................................................................... Edad actual: ..................................... Peso actual ......................... Peso al nacer................... . Talla al nacimiento:...................................... Talla actual ........................................................ Antecedentes Perinatales: 1.- Antecedentes Prenatales: 2.- Antecedentes Natales 3.- Antecedentes Postnatales Enfermedades de la niñez enfermedades eruptivas como sarampión, coqueluche, viruela paperas, etc., ................................................................................................ Antecedentes de padres y abuelos: (datos como por ejemplo procedencias étnicas o antecedentes de enfermedades genéticas) ................................................................................... El Arbol Genealógico se representa sobre la base de símbolos cuya nomenclatura se encuentra en la página adjunta. IV.
MATERIALES: -
Hoja cuadriculada tamaño A4. Lápiz, borrador y regla. Tabla de símbolos para la elaboración del Arbol Genealógico (página adjunta) Lápices de colores.
V.
PROCEDIMIENTO:
a) b) c) d) e) f) g)
Luego de anotar los datos personales y antecedentes más importantes del propósitus, Se debe realizar el siguiente procedimiento: Se inicia representando al propósitus con un cuadrado o un círculo según sea varón o mujer. Una línea trazada entre el cuadrado y el círculo, representa matrimonio entre el hombre y la mujer (unión legal) Dos líneas trazadas entre el cuadrado y el círculo indica casamiento o unión entre consanguíneos. Una línea discontínua (puntos suspensivos) entre la pareja indica convivencia (unión ilegal). En un cruzamiento el varón suele ser colocado a la izquierda de la mujer, cuando sea gráficamente posible. Las generaciones están conectadas por una línea vertical que se extiende hacia abajo desde la línea de casamiento hasta la próxima generación. Los hijos de un casamiento están conectados por una línea horizontal unidos por líneas verticales cortas.
h) El primer hijo es colocado a la izquierda del segundo, el segundo a la izquierda del tercero, así sucesivamente. i) Todos los individuos que conforman cada generación, de sexo femenino y/o masculino vivos, fallecidos, natimuertos, gestaciones y abortos, etc. se indican en el orden que les corresponde (de mayor a menor), de izquierda a derecha; y se enumeran con números arábigos (1, 2, 3, etc.) de manera que todos los miembros de cada generación puedan ser identificados con claridad. Si la numeración no está indicada se dará como implícita. j) Solamente el hijo (a) del matrimonio que está en relación directa con el propósitos (es decir los padres del propósitus) podrán ser colocados juntos, pero señalando entre paréntesis el lugar que le corresponde dentro de su familia. k) Las generaciones son ordenadas con números romanos (I, II, III, etc.) colocándose la primera generación en la parte superior del heredograma y las últimas en la parte inferior del mismo. l) Los informes complementarios pueden ser mencionados en el texto descriptivo. m) Las anotaciones no serán numerosas para mantener la claridad del esquema. Con el propósito que otras personas puedan comprender el contenido de lo que hemos realizado. EJEMPLO: Andrés (es ciego) y Clara forman una pareja de convivientes, ellos tiene 5 hijos: el primer hijo falleció de bronquitis a los dos años de edad, el segundo es varón normal, Inés es la tercera hija y tuvo un aborto de sexo femenino, el cuarto hijo es epiléptico, Raúl que es el último hijo se casó y su esposa Noemí es la tercera de sus hermanos, quien tiene una hermana menor fallecida con cáncer de mama; ellos Raúl y Noemí) esperan un bebé de sexo desconocido y desean saber su pronóstico.
I
--1
2
3
4
(3°)
II 1
III
+
2
3
4
1
5
6
7
8
9
10
2 Leyenda
I-1 ciego, II-9 aborto espontáneo, I-4 diabética II-10 cáncer de mama, II-1 neumonía, III-1 aborto citomegalovirus II-5 epilepsia III-2 gestación de 3 meses.
VI.
ELABORACIÓN DEL ÁRBOL GENEALÓGICO FAMILIAR: Confeccionado el Arbol Genealógico, se debe hacer un recuadro a manera de leyenda en la parte inferior derecha del Heredograma, donde debe señalarse en forma breve y clara los nombres de las patologías que puedan tener los afectados. El (los) símbolo(s) de los individuos afectados se pintan de color negro. Se identificarán también los rasgos genéticos u otras manifestaciones fenotípicas que Ud. considere característicos en su familia. Como por ejemplo, la forma del cabello, color de ojos, defectos o tendencias que puedan ser propios de la familia, y que se deben diferenciar pintándolos con lápices de colores. En la leyenda también pueden indicarse otros datos que Ud. considere pertinente.
EJERCICIOS: 1. Realiza el árbol genealógico de un hombre ciego, casado con una mujer normal. Ellos tienen un hijo adoptivo, además, una de sus hijas es casada con su primo paterno quién tuvo dos hijos fallecidos en su primer compromiso.
2. Confecciona el árbol genealógico de una familia que tiene tres hijos: dos hijas de sexo femenino y un segundo hijo afectado seguido de un aborto gemelar.
3. Zoila es la tercera hija de cinco hermanos, su segunda hermana falleció de una enfermedad genética y su tía materna tuvo dos hijas gemelas y ahora espera un bebé.
4. Un hombre sano casado con una mujer portadora de un carácter ligado al sexo. Ellos tienen una hija sana, enseguida un aborto de sexo no identificado. La última hija está en gestación y desea saber su caso.
5. Una pareja de convivientes tienen seis hijos: La segunda hija es epiléptica, la tercera hija falleció, la única hermana del padre ha tenido un embarazo gemelar, uno de los gemelos murió de una enfermedad ligada al cromosoma “X”; la última de sus hijas se casó con su primo y tienen dos niñas y desean saber el estado de salud de la mayor.
6. Elabora tu árbol genealógico familiar expresando, por lo menos 2 caracteres en tres generaciones.
VII.
CUESTIONARIO: 1. - ¿Qué es el Heredograma?
2 - ¿Qué son los caracteres genéticos? Mencione 4 ejemplos.
3 - ¿Cuál es la utilidad del Arbol Genealógico?
4 - ¿Qué entiende Ud. por individuo afectado?
5 - ¿Cómo se manifiestan los afectados en la Herencia Autosómica Dominante?
VIII.
BIBLIOGRAFIA:
1. Jorde, Carey , Bamshad “Genética Médica “ 4° edición. Editorial Mosby. 2,012. 2. Lewin, “Genes”,Editorial Panamericana, 2,012 3. Lisker y Armendares“Introducción a la Genética”. Editorial Interamerticana. 4. Pierce,Benjamin Genética un enfoque conceptual. Editorial Panamericana, 2,012
UNFV – MEDICINA HUMANA GENÉTICA HUMANA
PRÁCTICA Nº 02 CROMOSOMAS HUMANOS: CARIOTIPO MACROSCOPÍA I. INTRODUCCIÓN El cromosoma es la cromatina condensada, constituida por histonas y ADN. Son portadores de la información genética (genes) y se transmiten de generación en generación, mediante división celular. En 1889 Wilhelm Von Waldeyer, utilizaron el término de cromosoma que significa cuerpo coloreado (griego), estos cromosomas tienen afinidad con colorantes básicos como el Giemsa que es un derivado de la Tiazina y son moléculas con carga positiva, que interactúan con los grupos fosfatos del ADN por fuerzas iónicas. En 1960, en Denver Colorado se celebro la primera reunión de científicos, en la que clasifican a los cromosomas atendiendo al tamaño y posición del centrómero en los pares que van del 1 al 22. En 1963, se establecieron en 7 grupos A, B, C, D, E, F,y G; ubicando a los cromosomas sexuales: X en el grupo C y el cromosoma Y en el grupo G. En 1971, en el congreso de Paris, se presento cuatro tipos de bandas: Q, G, C y R, los cuales permitieron distinguir de manera individual cada uno de los cromosomas y determinar anomalías numéricas y estructurales; y contribuir en la caracterizar los diferentes síndromes. CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS CROMOSOMAS CROMOSOMAS AUTOSÓMICOS: Grupo “A”: Pares 1, 2 y 3. Los pares 1 y 3 son grandes, metacéntricos. El par 2 es ligeramente, submetacéntrico. Grupo “B”:
Pares 4 y 5 Cromosomas grandes, submetacéntricos propiamente dicho.
Grupo “C”:
Pares 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12 Los pares 6, 7, 8 y 11 son medianos, ligeramente submetacéntricos. Los pares 9, 10 y 12 son medianos, submetacéntricos. Los cromosomas sexuales “X” se encuentran en este grupo.
Grupo “D”:
Pares 13, 14 y 15 Cromosomas grandes, acrocéntricos y presentan satélites.
Grupo “E”:
Pares 16, 17 y 18 El par 16 es mediano, metacéntrico. Los pares 17 y 18 es pequeño, submetacéntrico.
Grupo “F”:
Pares 19 y 20 Cromosomas pequeños, metacéntricos.
Grupo “G”:
Pares 21 y 22 Cromosomas pequeños, acrocéntricos Presentan satélites. El cromosoma sexual “Y” se encuentra en este grupo.
CROMOSOMAS SEXUALES: CROMOSOMA SEXUAL “ X” : Es mediano, ligeramente submetacéntrico. Con respecto a su tamaño, es más grande que el cromosoma Nº 8, y más pequeño que el cromosoma N° 7. Sus brazos “p” y “q” son rectos y paralelos entre sí.
2016 GUIA DE PRÁCTICAS
12
CROMOSOMA SEXUAL “ Y ” : El cromosoma es pequeño, acrocéntrico Es más grande que los cromosomas de su grupo (Grupo “G”) Sus brazos “p” son compactos y gruesos, se visualizan fácilmente. Sus brazos “q” son rectos y paralelos entre sí. No presentan satélites.
II. COMPETENCIAS
Reconocer e identificar en las microfotografías las características morfológicas de los cromosomas, coloreados mediante método convencional y bandeo GTG Elaborar el cariograma de cada una de las metafases de las microfografias. Diagnosticar el cariotipo de cada una de las metafases Relacionar los sindromes cromosómicos con el fenotipo.
III. METODOLOGIA La universidad proporcionará a cada alumno 3 microfotografías de cromosomas (1 convencional y 2 con bandeo GTG), con la finalidad de reconocer e identificar las características morfológicas de los cromosomas, armar el cariograma y diagnosticar el cariotipo de cada microfotografía
IV. RECURSOS MATERIALES EQUIPOS:
Guía de Prácticas Microfotografías de cromosomas. Mica, tamaño A-4 (transparente). Lápiz de cera “Markin” (para pintar vidrio) y/o plumón indeleble color rojo ó azúl. Tijera. Cinta scotch.
V. PROCEDIMIENTO: Diagnóstico del cariotipo: en la microfotografía que dice cariotipo convencional Contar el número total de cromosomas. Colocar la microfotografía dentro de una mica Calcar o copiar con lápiz “MARKIN” ó plumón indeleble cada uno de los cromosomas reconociendo: tamaño, posición del centrómero. Reconocer e identificar: brazos “p” o brazo corto, brazo “q” o brazo largo, centrómero o constricción primaria, satélite, tallo o talo. Retirar la microfotografía de la mica. Colocar una hoja de papel bond en la parte posterior de la mica (con el dibujo de los cromosomas) y con un lapicero proceder a identificar y escribir en el papel bond cada uno de los cromosomas de acuerdo al grupo (A,B,C,D,E;F y G) que le corresponde. Con la ayuda del profesor, se procederá a realizar la identificación de cada uno de los cromosomas, empezando con los cromosomas del grupo A, luego grupo B, D,E,F, G y los cromosomas sexuales La identificación de los cromosomas del grupo C queda como tarea. Cortar cada uno de los cromosomas identificados, pegarlos en orden decreciente según la clasificación de DENVER en el formato del cariograma 1. Diagnosticar el cariotipo (colocar la fórmula cromosómica) y colocar el diagnóstico citogenético. En las microfotografías con bandeo GTG: Contar el número total de cromosomas, realizar la identificación de cada uno de estos con ayuda del profesor y del patrón de bandas GTG. Cortar cada uno de los cromosomas y pegarlos en la hoja del cariograma 2. Indicar el cariotipo y el diagnóstico citogenético respectivo. Recortar los cromosomas de la microfotografía 3 y armar el cariograma correspondiente.
2016 GUIA DE PRÁCTICAS
13
VI. ELABORACIÓN DE LOS CARIOGRAMAS 6.1 Armar el Cariograma 1: Método Convencional y completar el complemento cromosómico del cariotipo y Diagnóstico Citogenético.
6.2 Armar el Cariograma 2: con la ayuda del ideograma del Patrón de bandas GTG; completar el cariotipo y Diagnóstico Citogenético.
6.3 Armar el Cariograma 3: con la ayuda del ideograma del Patrón de bandas GTG; completar el cariotipo y Diagnóstico Citogenético.
VII. CUESTIONARIO 7.1 Define brevemente Cariotipo a) Cariotipo b) Cariograma c) Ideograma d) Quinetochoro o Kinetochoro e) Tallo o Talo f)
Satélite
7.2 Importancia y uso del sistema de bandeo a) GTG: b) CBG: c) RHG: d) NOR:
7.3 Mencione 10 alteraciones fenotípicas de: a) Síndrome de Klinefelter
b) Síndrome de Turner
2016 GUIA DE PRÁCTICAS
14
c) Síndrome de Down
d) Síndrome de Patau
e) Síndrome de Edwards
7.4 Mencione cual es origen de: a) Alteraciones numéricas: b) Alteraciones estructurales: c) Mosaicismo: . VIII. BIBLIOGRAFIA
2016 GUIA DE PRÁCTICAS
Lisker Ruben “INTRODUCCION A LA GENETICA HUMANA”. Editorial El Manual Moderno S:A: tercera edición. 2013 EMERY. “ELEMENTOS DE GENETICA MEDICA”. Editorial: Elsevier España. 13ava edición. 2009. Solari. “GENETICA HUMANA. Elementos y aplicaciones en Medicina”. 4° edición. 2011. Thompson & Thompson. “GENETICA EN MEDICINA”. Editorial Mass. 7ma. edición. 2008
15
IDEOGRAMA DEL PATRON DE BANDAS “GTG”
2016-1 GUIA DE PRÁCTICAS
16
CA
RIOGRAMA 1: METODO CONVENCIONAL Muestra: SANGRE PERIFÉRICA (Cultivo de Linfocitos) Técnica de coloración: METODO CONVENCIONAL( Coloración: Giemsa) CARIOTIPO:................................................................................................... Dx. CITOGENÉTICO:.......................................................................................
-----------------------------------------------------1
2
-----------------------------------
3
4
5
A
B
---------------------------------------------------------------------------------------------------------6
7
8
9
10
11
12
C
--------------------------------------------13
14
15
-------------------------------------------16
17
D
18
E
--------------------------19
20
-----------------------------21
F
22
G
SEXUALES----------------------------------------
CARIOGRAMA 2: BANDEO GTG Muestra: SANGRE PERIFÉRICA (Cultivo de Linfocitos) Técnica de coloración: BANDAS GTG (Banda G usando Tripsina y Giemsa) CARIOTIPO:...................................................................................................... Dx. CITOGENETICO:......................................................................................
-----------------------------------------------------1
2
-----------------------------------
3
4
5
A
B
---------------------------------------------------------------------------------------------------------6
7
8
9
10
11
12
C
--------------------------------------------13
14
15
-------------------------------------------16
17
D
18
E
--------------------------19
20
-----------------------------21
F
22
G
SEXUALES----------------------------------------
CARIOGRAMA 3: BANDEO GTG Muestra: SANGRE PERIFÉRICA (Cultivo de Linfocitos) Técnica de coloración: BANDAS GTG (Banda G usando Tripsina y Giemsa) CARIOTIPO:................................................................................................... . Dx. CITOGENETICO:.......................................................................................
-----------------------------------------------------1
2
-----------------------------------
3
4
5
A
B
---------------------------------------------------------------------------------------------------------6
7
8
9
10
11
12
C
--------------------------------------------13
14
15
-------------------------------------------16
17
D
18
E
--------------------------19
20
-----------------------------21
F
22
G
SEXUALES---------------------------------------
PRACTICA N° 03 CROMOSOMAS HUMANO: CARIOTIPO MICROSCOPIA I. INTRODUCCION Durante la división celular, es observable, elementos en forma de varillas llamados “cromosomas”, término acuñado por Waldenyer en 1888 debido a la coloración intensa que adquieren cuando se tiñen con colorantes básicos como la fucsina, orceina, hematoxilina, giemsa, etc. Los cromosomas son las estructuras encargadas de llevar el material hereditario durante la división celular en organismos eucariontes, esto es posible gracias a la máxima condensación que el ADN asociado a proteínas alcanza; de este modo los cromosomas logran cumplir las funciones de: conservar, transmitir y expresar información genética. Cada especie animal o vegetal posee un complemento cromosómico propio y característico en cuanto al número y forma de los cromosomas. El ser humano tiene un numero cromosómico diploide 2n= 46 Durante mucho tiempo el estudio citogenético se dedicó a evaluar las características morfológicas y numéricas de los cromosomas a través del Método Convencional; es así como se pudieron distinguir los 3 tipos de morfología cromosómica en humanos: Cromosomas Metacentricos, Submetacentricos, y Acrocentricos; el desarrollo posterior de las técnicas de bandeo cromosómico, mejoro la precisión en cuanto a la identificación e individualización de los cromosomas. El método de bandeo cromosómico más usado en la actualidad es el conocido con el nombre de bandas GTG (bandas G por Tripsina usando Giemsa como colorante); debe su nombre a que la desnaturalización proteica es causada por la enzima Tripsina, que confiere a los cromosomas el patrón de bandas claras y oscuras característico. Las bandas positivas (oscuras) son regiones ricas en Adenina – Timina, mientras las bandas negativas (claras) son ricas en Guanina – Citocina, El estudio microscópico de los cromosomas permite identificar enfermedades citogenéticas; el desarrollo de las técnicas de bandeo citogenético a mejorado en gran medida el diagnóstico de estas enfermedades al permitir visualizar reordenamientos cromosómicos estructurales como: delecciones, translocaciones, inversiones, duplicaciones, etc.; alteraciones antes desconocidos, pero que son de importancia en el campo clínico. II. COMPETENCIAS
Reconocer bajo el microscopio los elementos responsables de la herencia: LOS CROMOSOMAS EN LOS CULTIVOS CELULARES “IN VITRO” DE LINFOCITOS cuando las células están en Interfase y en división (metafase).
Comprobar el número de cromosomas en la especie humana diferenciándolos por grupos (A, B, C, D, E, F, G y SEXUALES) mediante el MÉTODO CONVENCIONAL
Observar los cromosomas mediante el MÉTODO DE BANDEO “GTG”, e i d e n t i f i c a r algunos pares caracteristicos de cada grupo.
Relacionar algunos síndromes genéticos conocidos con las alteraciones cromosómicas que los caracterizan.
III. METODOLOGIA Los alumnos revisaran las láminas Convencionales y de Bandeo GTG preparadas a partir de cultivo de linfocitos en sangre periférica, para lo cual harán uso del microscopio a 100X; se realizara el conteo del numero cromosómico, en el caso de láminas convencionales, y la observación de un par cromosómico de cada grupo en las láminas de bandeo GTG, se podrá tomar fotografías y se graficara lo observado.
IV. RECURSOS, MATERIALES Y EQUIPO
Guía de Prácticas Láminas preparadas con el Método Convencional Laminas preparadas con bandeo GTG Microscopio con 100 aumentos. Aceite de inmersión. Lápiz, lapiceros y colores
V. PROCEDIMIENTO Lámina Nº 1 Método Convencional (Coloración Giemsa). OBSERVAR A 10X: o Corpúsculos pequeños de forma esférica, intensamente teñidos de color fucsia o lila (linfocitos en Interfase) o Elementos puntiformes y/o alargados e intensamente coloreados formando grupos (linfocitos en división o metafases). o Esquematizar sus observaciones.
Linfocito en interfase
Linfocito en división
OBSERVAR A 40X: o Realizar el recuento de los cromosomas en cada metafase. o Identificar los cromosomas reconociendo la morfología de cada uno de ellos o Esquematizar sus observaciones.
Grupo G Grupo A
Grupo D
OBSERVAR A 100X: Cromosomas en metafase identificando sus cromátide y la posición de sus centrómeros. Identificar los cromosomas por grupos (A, B, C, D, F, G y sexuales). Esquematizar sus observaciones.
Brazo p Centrómero Brazo q
Lámina Nº 2 Método de Bandeo: Bandas GTG: Láminas preparadas con cultivo de linfocitos en sangre periférica. Seguir el mismo procedimiento realizado en la lámina Nº 1 observando detenidamente a 10X y a 40X.
Cromosoma Metacéntrico Cromosoma Acrocéntrico
Cromosoma Submetacéntrico
OBSERVAR A 100X: Cromosomas de los grupos antes mencionados. Diferenciar las bandas en cada uno de los cromosomas buscando sus pares homólogos. Comparar cada uno de los cromosomas y tratar de identificarlos con la ayuda del patrón de bandas que se presentan en la hoja adjunta. Esquematizar los cromosomas 1, 5, 13, 16, 19, 21 y el cromosoma sexual X.
Cromosoma 21
Cromosoma 13
Cromosoma 1
VI. ESQUEMAS: Método Convencional: dibujar un cromosoma de cada grupo A,B,D,E,F y G. A
E y F
B
DyG
Método Bandeo GTG: Dibujar un par cromosómico de cada grupo A,B,C,D,E,F,G, X e Y.
Par 1
Par: 7
Pares: 13 y 21
Par 4
Pares: 16 y 19
Cromosoma Sexuales: X e Y
VII. CUESTIONARIO 7.1 ¿Qué son los polimorfismos cromosómicos? De 2 ejemplos
7.2 ¿Cómo se clasifican las alteraciones cromosómicas?
7.3 ¿Cuáles son los criterios de clasificación según Denver?
7.4 ¿Qué otras técnicas de bandeo existen, que patrón permiten visualizar?
VIII. BIBLIOGRAFIA
CUMMINGS, MICHAEL. “Herencia Humana”. DE ROBERTIS, E. “Biología Celular y Molecular”. GROUCHY-TURLEAU. “Atlas de Enfermedades Cromosómicas” LISKER-ARMENDARES. “Introducción a la Genética Humana”. MULLER-YOUNG. “Genética Médica” Emery’s SANCHEZ CASCOS Y COL “Genética al día” Editorial Labor. THOMPSON, THOMPSON. “Genética Médica
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
GUIA DE PRÁCTICAS
GENÉTICA HUMANA
Profesor Responsable Docentes
: :
Dra. Ela Alvarado Aguirre. Dra. Ismenia Gamboa Oré.
2,016
