Guia Practicas Embriologia 2014

UPSMP – MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA

UNIVERSIDAD DE SAN MARTÍN DE PORRES FACULTAD DE

MEDICINA HUMANA DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIA CIENCI AS BÁSICAS BÁ SICAS

ASIGNATURA:

EMBRIOLOGÍA HUMANA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA

GUÍA DE PRÁCTICAS

Responsable Curso: Dr. César A. Ibaceta Tello Coordinadora: Dr. Esteban Jacinto Isique

SEGUNDO AÑO I - SEMESTRE

2014

Chiclayo - PERÚ 2014-1 GUIA DE PRACTICAS

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PROLOGO

La Facultad de Medicina Humana de la Universidad de San Martín de Porres, presenta a ustedes, estimados Alumnos y Profesores, la Guía de Prácticas del Curso Embriología Humana y Genética Básica. Las Ciencias Básicas están ocupando el lugar trascendente que le corresponde dentro de la formación de nuevos Médicos. Los avances científicos y tecnológicos de las últimas

décadas han permitido ampliar los conocimientos en embriología y genética. La presente guía ha ido mejorando en forma progresiva paralelo a estos avances.

La ontogenia y la filogenia se enriquecen cuando aparecen nuevos estudios experimentales que aportan nuevos conocimientos y conceptos, los cuales debemos incorporar en cada Semestre. En esta especialidad se cifra la esperanza de la terapia génica, la que podría terminar con un sinfín de enfermedades con representación cromosómica. El futuro es muy prometedor. Creemos a no dudarlo, que esta nuestra versión 2014 de la Guía de Practicas del Curso de Embriología Humana y Genética Básica irá mejorando semestre a semestre porque hay una razón para ello, los conocimientos van apareciendo día a día y debemos debem os estar permanentemente actualizados.

DR. LUIS KOBAYASHITSUTSUMI Profesor Responsable de la Asignatura Embriología Humana y Genética Básica USMP

2014-1 GUIA DE PRACTICAS PRACTICAS

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INTRODUCCION

Una de las Ciencias Básicas que más notablemente ha avanzado es la Embriología y la Genética. De otro lado, la información bibliográfica es de tal proporción, que faltarían horas para mantenerse actualizado permanentemente. A la fecha hay más de 200 textos de Embriología y de Genética, cada uno de ellos más completo com pleto y complejo. La Cátedra del Curso de Embriología Humana y Genética Básica, comprendiendo que es importante aprovechar bien el tiempo, ha elaborado esta Guía para complementar las Clases teóricas. Les presentamos en forma resumida, las Prácticas de Embriología y Genética, que tienen las características de ser semielaboradas, de uso personal y con un cuestionario al final de cada Práctica, con la finalidad de poder asegurar los conceptos básicos vertidos durante la práctica y la teoría. Se adjunta una pequeña bibliografía, no obstante, en nuestra biblioteca tiene otros textos. No debemos dejar de nombrar a los artífices de esta Guía de Prácticas, quienes con entusiasmo se han motivado a publicar esta ayuda al interesante proceso de Enseñanza aprendizaje. Son Docentes ávidos de transmitirles parte de su conocimiento y experiencia. Todos son especialistas en distintas ramas de la Medicina, Pediatría, Cirugía, Gíneco- obstetricia obstetricia y Biólogos Genetistas. Ellos han fusionado sus conocimientos y habilidades y el producto es esta Guía de Prácticas renovada y actualizada. Lima, 03 de Marzo 2014 Los Autores AUTORES:

Dr. Luís Kobayashi Tsutsumi Dra. María Luisa Guevara Gil (Coordinadora) Dr. Fernando Linares Heredia Dr. Daniel Arbaiza Aldazabal Dra. Cecilia Mena Navarro Dra. Ela Alvarado Infanzón Dra. Roxana Rosadio Alzamora Dr. Elías Araujo Miranda Dr. Boris Altamirano Salcedo Dr. Omar Vivar Caballero Dr. Carlos Lozada Saco Mg. Ramsès Salas Ascencios Blga. Ismenia Gamboa Oré Blgo. Sergio Talavera Vargas Machuca Blga. Liza Linares Rosales

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COMPETENCIAS GAMETOGENESIS: OVOGENESIS

1. Refuerza los conocimientos teóricos en el origen, evolución y morfología morf ología de las estructuras secuenciales en el desarrollo de la gametogénesis. 2. Integra los los eventos morfológicos morf ológicos del ciclo ovárico con su regulación hormonal. horm onal. 3. Reconoce microscópicamente microsc ópicamente los distintos tipos de folículos del ovario adulto, relacionándolos con la capacidad de secreción de hormonas. 4. Diferencia las características propias del ovario infantil y adulto 5. Reconoce y explica las características del cuerpo lúteo y del cuerpo albicans TERI ALES M ATERIALES 1. Guía de práctica 2. Microscopio óptico 3. Láminas de preparados preparado s histológicos de ovario (HE): infantil, adulto 4. Láminas de preparados preparado s histológicos de ovario: cuerpo lúteo y cuerpo albicans (HE). PROCEDIMIENTO Mediante la observación microscópica con diferentes lentes y objetivos (x5, x10 y x40), reconocer la secuencia evolutiva celular gametogenética.


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OVARIO  Epitelio ovárico: Células cúbicas simples.  Corteza ovárica: Folículos en diferentes estadios de maduración.  Médula ovárica: Zona Central. célu las epiteliales planas.  Folículo primordial: Ovocito primario (46 cromosomas), 1 capa de células  Folículo primario: 1 capa de células epiteliales cúbicas.  Folículo en crecimiento: Más de 1 capa de células cúbicas (células foliculares o de la granulosa). Zona pelúcida, lagunas foliculares, teca interna estrógeno), teca exter na.  Folículo de De Graff: Folículo maduro preovulatorio (23 cromosomas). Antro folicular (licor folicular), cúmulos oophorus. Tecas.  Cuerpo amarillo: progesterona.  Cuerpo albicans: cuerpo amarillo degenerado.  Folículos atrésicos: Folículos en crecimiento degenerados. PREGUNTAS 1. Realice un un esquema nominativo nominativo del folículo primordial, primario y en crecimiento. 2. Realice un esquema nominativo del folículo de De Graff. 3. ¿Dónde se producen los estrógenos y la progesterona? 4. ¿De qué hormonas depende el ciclo ovárico? 5. ¿Cuándo se completa com pleta la primera división meiótica y cuándo la segunda división meiótica?


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N° 02 TOGENESI S GAMETOGENESIS: ESPERM ATOGENESIS COMPETENCIAS 1. Refuerza los conocimientos teóricos en el origen, evolución y morfología de las estructuras secuenciales en el desarrollo de la gametogénesis. 2. Integra los eventos morfológicos morf ológicos de la espermatogénesis al interior del tubuli seminífero 3. Reconoce microscópicamente las diferentes células de la serie espermática y del espacio intersticial y su capacidad de secreción de horm onas. 4. Identifica y esquematiza esquem atiza las diferentes diferentes estructuras en el desarrollo de la la espermatogénesis. 5. Reconoce y explica la morfología y la función de las células de Leydig y de Sertoli TERI ALES M ATERIALES 1. Guía de práctica 2. Microscopio óptico 3. Láminas de preparados preparados histológicos histológicos de testículo (HE): infantil, adulto TESTICULO  Albugínea  Zona cortical sem iníferos y espacios intersticiales  Zona medular: Tubos seminíferos  Tubos seminíferos: Secuencia evolutiva de la esperm atogénesis.  Membrana propia del tubo seminífero (pared del tubo seminífero) Espermatogonio: 46 cromosomas. Adosados cromosomas. Adosados a la pared. o Espermatocito I: 46 cromosomas. Más voluminosas. Núcleo fibrilar o granular. o División celular. o Espermatocito II (2): 23 cromosomas. Fugases. o Espermatide (4). 23 cromosomas. Redondeadas o alargadas. Esperm Esperm iogénesis. o Espermatozoides (4): 23 cromosomas. Luz del tubo seminífero. o Células de Sertoli: Células sustentaculares. Citoplasma triangular con basas hacia la o pared.  Espacio intersticial: Células de Leydig: Testosterona. o Fibroblastos. o Vasos sanguíneos (capilares, vénulas). o


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PREGUNTAS 1. Realice un esquema nominativo del ciclo ciclo evolutivo de la espermiogénesis. esperm iogénesis. 2. ¿Qué es la espermiogénesis? 3. ¿Cuál es la importancia de las células de Leydig? 4. Colocar el número de cromosom as: Espermatogonio ( )  Espermatocito I ( )  Espermatocito II ( )  Espermatide ( )   Espermatozoide ( ) 5. ¿Cuántos espermatozoides derivan de un espermatocito primario?. BIBLIOGRAFIA 1. LANGMAN, Jan. Embriología Médica. Ed. Interamericana, 11° edición. 2. MOORE, Persaud. Embriología Clínica. Mc Graw-Hill. Interamericana. 8ta. Edición 3. DI FIORI. Atlas de Histología.


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N° 03 COMPETENCIAS CICLO UTERINO 1. Recuerda los conocimientos teóricos relacionados al ciclo uterino. 2. Relaciona el ciclo ovárico con el ciclo uterino y su regulación hormonal. 3. Conoce las las fases por las que atraviesa el endometrio durante el ciclo uterino de una mujer adulta. 4. Observa las características de la mucosa uterina en distintos periodos del ciclo endometrial y relaciona con su regulación hormonal. TERI ALES M ATERIALES 1. Guía de práctica. 2. Microscopio óptico. 3. Láminas de preparados histológicos histológicos de endometrio en fase proliferativa, secretora, menstrual y decidual (HE). PROCEDIMIENTO Mediante la observación microscópica con diferentes lentes y objetivos (x5, x10 y x40), reconoce las características del endometrio en fase proliferativa y secretora. El endometrio es la mucosa que recubre el interior del útero y consiste en un epitelio simple prismático con o sin cilios, glándulas y un estroma rico en tejido conjuntivo y altamente vascularizado. Su función es la de alojar al blastocito después de la fecundación, permitiendo su implantación. Es el lugar donde se desarrolla la placenta y presenta modificaciones cíclicas en sus glándulas y vasos sanguíneos durante el ciclo menstrual m enstrual en preparac ión para para la implantación del embrión humano. Fase Proliferativa (Estrogénica): bajo la influencia de los estrógenos, que se secretan en cantidades crecientes durante la fase proliferativa, las células del estroma y las células epiteliales proliferan rápidamente. Durante el periodo previo a la ovulación el endometrio se engruesa, en parte debido al creciente número de células del estroma, pero primordialmente al crecimiento progresivo de las glándulas endometriales y de nuevos vasos sanguíneos en el interior del endometrio. Al momento de la ovulación el endom endometrio etrio tiene unos 3 a 5 m ilímetros de espesor. Fase Secretora (Progestacional): posterior a la ovulación, se secretan grandes cantidades de progesterona y estrógenos por parte del cuerpo lúteo. Los estrógenos producen una ligera proliferación adicional del endometrio, mientras que la progesterona provoca una notable tumefacción y el desarrollo secretor del endometrio. Las glándulas se vuelven más tortuosas; y en las células del epitelio glandular se acumula un exceso de sustancias secretoras. Igualmente aumenta el citoplasma de las células del estroma junto al depósito de lípidos y proteínas; y el aporte sanguíneo al endometrio sigue incrementándose de forma proporcional al desarrollo de la actividad secretora, con gran tortuosidad de los vasos sanguíneos.


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Fase proliferativa: proliferativa:  Capas del útero: Endometrio, miometrio y parametrio.  Epitelio endometrial: Células cilíndricas.  Capa funcional: Glándulas en corte tansversal, oblicuo y longitudinal, lumen regular, aspecto tubular, escasa secreción en su interior. Corion (estroma endometrial): Espacios interglandulares.  Capa basal.  Miometrio. Fase secretora:  Glándulas tortuosas, lumen irregular en “diente de serrucho”. Secreción en el lumen.  Corion o estrom a endometrial, con infiltrado polimorf onuclear. PREGUNTAS 1. ¿Cuáles son las fases del ciclo uterino? uterino? 2. ¿De qué horm hormonas onas depende cada una de estas fases? 3. ¿Cuáles son las características del endometrio endom etrio en fase proliferativa? 4. ¿Cuáles son las características del endometrio endom etrio en fase secretora? 5. ¿Qué pasa pasa con el endometrio cuando se produce una gestación? BIBLIOGRAFIA 1. LANGMAN, Jan. Embriología Médica. Ed. Interamericana, 11° edición. 2. MOORE, Persaud. Embriología Clínica. Mc Graw-Hill. Interamericana. 8° Edición. 3. DI FIORI. Atlas de Histología. ENDOMETRIO DECIDUAL

(GESTACIONAL) La decidua corresponde a un endometrio especializado muy mu y modificado modif icado durante el em barazo, es el sitio anatómico de la yuxtaposición del blastocisto, la im plantación y del desarrollo placentario. La formación form ación de decidua o transformación del endometrio endom etrio secretor en decidua depende de la acc ión de estrógenos y progesterona así como com o de factores secretados por el blastocisto en proceso de implantación durante la invasión por el trofoblasto. La decidua del embarazo está constituida por tres partes con base en su loca lización anatómica: a) Decidua Basal: Ubicada directamente por debajo del sitio de im plantación del blastocisto. b) Decidua Capsular: Es Es la porción que cubre al blastocisto en crecimiento e inicialmente inicialm ente lo separa del resto de la cavidad uterina. c) Decidua Parietal: Es la que reviste reviste el resto de la cavidad uterina.

La decidua está compuesta por tres capas: 1. Superficial o Compacta: Presenta Presenta grandes células poligonales y otras pequeñas redondas con escaso citoplasma citoplasm a que son los precursores de nuevos elementos elem entos deciduales. 2014-1 GUIA DE PRACTICAS

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2. Media o Esponjosa: Presenta Presenta glándulas distendidas con acentuada hiperplasia hiperplasia que tienen actividad secretora y que sirven para la nutrición del huevo antes de que se desarr olle la circulación placentaria. 3. Profunda o Basal: Persiste después del parto y da origen al nuevo endometrio.

Detalle de la porción compacta de la decidua formada por células del estroma con abundante citoplasma, de bordes netos.

Detalle de la porción esponjosa de la decidua, con glándulas de lumen amplio, con escaso estroma entre ellas. BIBLIOGRAFIA: OBSTETRICIA DE WILLIAMS 22


EDICION

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UPSMP – MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA PRACTICA N° 04

COMPETENCIAS PLACENTA PLACENTA M ACROSCÓPICA

1. Aplicar los los conocimientos teóricos relacionados con el origen, los componentes materno y fetal, las funciones e importancia de la placenta. 2. Diferencia la cara fetal, donde se inserta el cordón umbilical, de la cara materna, donde se encuentran los cotiledones. 3. Describe la forma, peso y dimensiones de la placenta. 4. Observa, compara compara y describe las características anatómicas anatóm icas de la placenta, tanto en la cara fetal como en la cara materna. 5. Clasifica y describe la inserción del cordón umbilical. 6. Clasifica y describe anomalías anoma lías placentarias. 7. Valora la importancia importancia del examen placentario con aplicación para la salud materna fetal: 8. calcificaciones, cotiledones. TERI ALES M ATERIALES 1. 2. 3. 4. 5.

Guía de práctica. Placentas macroscópicas frescas. Placentas fijadas en formol. form ol. Guantes, tijeras, pinzas (equipo de disección) Balanza y cinta métrica.

PROCEDIMIENTO Observación macroscópica  Previa colocación de guantes, procede a examinar la placenta diferenciando las caras materna y fetal.  Describe la forma de la placenta.  Pesa y mide la placenta.  Describe a inserción del cordón umbilical y características de la cara fetal.  Describe las características de la cara materna: surcos, cotiledones. PREGUNTAS 1. ¿Cuáles son los componentes de la placenta? 2. ¿Cuáles son las funciones de la placenta? 3. ¿Qué cantidad de sangre circula por la placenta a término? 4. ¿Qué es el acretismo acretism o placentario? 5. Diferencia entre placenta increta y percreta. BIBLIOGRAFIA LANGMAN, Jan. Embriología Médica. Ed. Interamericana, 11° edición. MOORE, Persaud. Embriología Clínica. Mc Graw-Hill. Interamericana. 8° Edición. W ILLIAMS. ILLIAMS. Tratado de Obstetricia. Obs tetricia.


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PLACENTA MICROSCOPICA

COMPETENCIAS 1. Aplica los conocimientos teóricos relacionados con el origen, los componentes materno y fetal, la circulación y la membrana placentaria. 2. Describe las características de la la lámina lámina corial. corial. 3. Describe las características de la cara materna o decidua basal. 4. Observa, compara com para y describe las características de los troncos de las vellosidades vellos idades coriales: primero, segundo y de tercer orden. 5. Reconoce los componentes de las vellosidades coriales. 6. Identifica y describe el espacio intervelloso, así como el contenido. 7. Describe los componentes com ponentes de la Membrana Placentaria. 8. Diferencia e identifica las características de una placenta del prim er trimestre de otra a término. TERI ALES M ATERIALES 1. Guía de prácticas 2. Microscopio óptico 3. Láminas de preparados histológicos histológicos de placentas fijadas y coloreadas con HematoxilinaHem atoxilinaEosina, que comprendan desde la cara materna a la cara fetal de la place nta. PROCEDIMIENTO Observación microscópica  Mediante la observación microscópica con diferentes lentes objetivo (x5, x10 y x40) reconoce las características características microscópicas de la placenta. CARA FETA FET AL  Reconocer la membrana amniótica o amnios que recubre la Lám ina o Placa corial, en la que se encuentran los vasos coriales.  Identificar y diferenciar los troncos de las vellosidades coriales. Características, componentes.  Reconocer las vellosidades coriales libres, componentes y membrana placentaria.  Espacio intervelloso y sangre materna. CARA M ATERN ATERN A  Reconocer la decidua basal y las células que las componen.  Diferenciar los componentes y estructuras con respecto a la cara fetal.  Identificar vellosidades de anclaje: Vellosidades que van de la placa co riónica a la decidua basal. TROFOBLASTO EN LA PLACENT PLACENTA A  

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El citotrofoblasto está constituido por células de núcleos relativamente grandes, vesiculosos, y citoplasma citoplasm a claro, de límites netos; presenta actividad mitótica. El sinciciotrofoblasto es la capa periférica que recubre las vellosidades; está formado por células multinucleadas, de núcleos pequeños, densos, citoplasma granular, denso y anfófilo, con algunas vacuolas lipídicas. No presenta mitosis. Las vellosidades de primer orden (tipo I) miden más de 300 micras de diámetro; se forman en los días 12 a 13 post fecundación y están contenidas en el cotiledón placentario que, en número de 12 a 30, son considera das como la unidad funcional de la placenta Las vellosidades o troncos de segundo orden (tipo II) tienen un diámetro de 120 a 300 micras; se ramifican en 2 a 12 vellosidades de tercer orden y se forman después de los 16 días post fecundación. Las vellosidades de tercer orden (tipo III) representan las más pequeñas de las vellosidades, con un diám etro de 80 a 120 m icras. Se forman a partir de la tercera t ercera semana sem ana post fecundación y terminan en más o menos 144 vellosidades terminales. Estas vellosidades terminales conforman la membrana placentaria, lugar donde se realiza el intercambio madre – feto.


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UPSMP – MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA CARACTERÍSTICAS DE LAS VELOCIDADES CORIALES

Entre los días 13 y 21 se organizan las vellosidades A partir de la 20ª semana se producen cambios cam bios coriales. El citotrofoblasto (CT) forma las progresivos en las vellosidades, el CT desaparece y la vellosidades coriales hacia los tejidos maternos barrera llega a estar formada por delgados parches de originando una envoltura continua, la coraza ST siendo. citotrofoblástica. Entre los días 21 y 40 es posible distinguir en el 4º mes: Células de Langha ns escasas y discontinuas corion una región lisa y otra frondosa, que 6to mes: adelgazamiento notable de las vellosidades. constituye el componente fetal de la placenta. 7º mes: estrato de Langhans desaparece. Sincitio y capa de Langhans* gruesos, algunas Núcleo está cubierto por una capa cont inua de células de Langhans emigran hacia el eje conectivo Sincitiotrofoblasto (ST), con pocas células de dando origen a las células de Hofbauer citotrofoblasto debajo de él. Vellosidades gruesas (100micras) constituidas por Vellosidades más finas (30-50 micras), cuyo núcleo tejido conectivo muy laxo, pobre en células y está compuesto por vasos sanguíneos y mesénquima y, carente de fibras. además, contiene histiocitos (células de de Hofbauer) Hof bauer) Pocos vasos con disposición central. Membrana Placentaria: ST, CT, mesodermo mesodermo y Endotelio

Enriquecimiento del lecho capilar, de ubicación periférica en íntimo contacto con el sincitio. Membrana Placentaria: ST y endotelio.

*Capa o estrato de Langhans: constituido a partir del CT primitivo, células cuboideas que al inicio tienen gran actividad reproductiva y se va perdiendo a medida que madura la placenta. PREGUNTAS 1. ¿Qué es la decidua? Tipos. 2. ¿Qué funciones tienen el Sincitio y el Citotrofoblasto?. Explique. 3. ¿Qué hormonas produce la placenta? 4. ¿Qué características tiene la placa corial? 5. ¿Qué importancia tiene la membrana placentaria? 7. ¿Qué son las vellosidad es primarias, primarias, secundarias y terciarias? BIBLIOGRAFIA 1. LANGMAN, Jan. Embriología Médica. Médica. Ed., 11ª edic ión. 2. MOORE, Persaud. Embriología Clínica. Mc Graw-H ill. Interamericana. 8ª Edición. 3. BOTELLA Llusiá,José. Tratado de ginecología: fisiología, obstetricia, perinatología, ginecología y reproducción. 14ª edición. 4. W ILLIAMS. Tratado de Obstetricia. FUENTES ELECTRÓNICAS: http://www.uaz.edu.mx/histo/MorfoEmbrio/Carlson/cap06/cap06.htm http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvr http:/ /sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/ginecolog evistas/ginecologia/vol54_n4/pdf/A ia/vol54_n4/pdf/A08V54N4.pd 08V54N4.pdf f


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PRACTICA N° 05

OBSERVACION DE EMBRIONES: CAVIDAD ABDOMINAL. APARATO RENAL COMPETENCIAS 1. Explica y ubica el origen de los órganos derivados del tubo intestinal, observados en el embrión 2. Conoce las relaciones existentes de las asas intestinales entre sí en el embrión 4. Reconoce y describe las glándulas anexas anexas al aparato digestivo: origen, características y relaciones con otras partes del tubo digestivo. 5. Reconoce y diferencia diferentes estados de desarrollo aparato urinario, así como su importancia. importancia. 6. Diferencia las gónadas y las glándulas glándulas suprarrenales 7. Identifica y relaciona los conductos genitales (mesonefrico y paramesonefrico) del embrión y su diferenciación. TERI ALES M ATERIALES 1. Guía de prácticas. 2. Microscopio óptico 3. Laminas de preparados histológicos de embriones de cerdo coloreados con hematoxilina- eosina, eosina, que comprendan desde la cavidad oral hasta el proctodeum. Se realiza el estudio en cortes longitudinales y transversales. transversa les. PROCEDIMIENTO  Observación microscópica  Mediante la observación microscópica con diferentes lentes y objetivos (x5, x10 y x40) reconoce mediante las características microscópicas del preparado embriológico  Observan el septum transversum y su relación con el hígado  Identificar el estomago y las asas intestinales. Observar sus relaciones y recordar su origen embriológico.  Observar las diferencias entre mesonefros y metanefros, así como la de sus conductos y recordar las estructuras a que dan origen  Observar y describir la medula espinal: Meninges, capa de la medula, epéndimo, ganglios y nervios raquídeos. PREGUNTAS 1. ¿De qué capa embrionaria proviene el hígado? Estructuras formadas form adas a partir de cada una de ellas. 2. ¿Qué importancia tiene el metanefros? ¿Cómo se diferencian los conductos de W olf y de Muller? 3. ¿Dónde se forma la placa basal y placa alar de la médula espinal? Importanci Importancia. a. 4. ¿Cómo se forma el páncreas anular? 5. ¿Qué malformaciones pueden presentarse en el desarrollo desa rrollo del tubo intestinal? BIBLIOGRAFÍA 1. 2. 3. 4.

LANGMAN, Jan. Embriología Médica. Ed. Interamericana, 11 ° edición. ORE, Persaud. Embriología Clínica. Mc Graw-Hill. Interamericana. 8° Edición. W ILLIAMS. ILLIAMS. Tratado de Obstetricia. 2000. S.W . S.W .GRAY GRAY & J.E. SKANDALAKIUS. Em briogenesis, diagnostico y tratamiento.


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MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA ESQUEMA IJI!:L EM!SAAROLI..O EMBAIOI!.ÓOI!CO DI:L APARATO URINAAIO

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PRACTICA 06

OBSERVACION DE EMBRIONES: TORAX Y MEDULA ESPINAL INTRODUCCION: Se denomina embrión al producto de la concepción entre la cuarta y octava semana de desarrollo y es aquí donde se aprecia cambios en la formación definitiva del futuro ser. Observaremos la cavidad torácica, la cabeza y el sistem a nervioso comprendido dentro de ella. COMPETENCIAS: COMPETENCIAS : 1. El alumno observará en el embrión los órganos que se encuentran en el tórax, identificando la médula espinal. 2. Aplica sus conocimientos para determinar determ inar el origen blastodérmico de las estructuras observadas 3. Elabora una lista de los cambios más importantes de los órganos y su destino final 4. Confecciona un esquema esquem a en su cuaderno de prácticas de un un corte longitudinal y trasversal del embrión. 5. Compara los órganos del embrión, em brión, feto y adulto. M ATERIAL TERI AL Y METODOS M ETODOS

Se observará al microscopio cortes histológicos de embriones en la parte que corresponde al tórax, cabeza y sistema nervioso central. PROCEDIMIENTOS  Al inicio se realiza una introducción sobre el desarrollo de la práctica.  Se dibuja en el pizarrón un esquema de lo que se va a observar como también se observa los cortes histológicos en el televisor que son refleja dos directamente del microscopio.  Seguidamente los alumnos observan los cortes histológicos en sus mesas de trabajo reconociendo las estructuras más importantes, determinando su origen, su función, a que órgano dará lugar y cuando termina term ina su maduración. TORAX: Se observa: Corte longitudinal: d elgadas, ventrículos paredes gruesas musculosas y los  Corazón: Aurículas de paredes delgadas, músculos pectineos, pericardio  Pulmón: Bronquios, pleura. form a el diafragma.  Septum trasverso que forma Corte trasversal:  De atrás hacia adelante médula espinal y cuerpo vertebral, luego orificio de la tráquea con su cartílago hialino, esófago, grandes vasos aorta, pulmonar, carótidas. Más adelante el corazón con sus cavidades ya mencionadas.  En las paredes laterales se aprecia el cartílago hialino de las costillas y el esternón.  Observa la estructura de la médula espinal, identificando la notocorda, las raíces anteriores, posteriores, la sustancia gris y la sustanc ia blanca. epéndim o. Reconoce la meninge.  Reconoce el canal del epéndimo. CUESTIONARIO 1. ¿De qué hoja blastodérmica deriva la mucosa de los bronquios? 2. ¿Cuándo terminan de madurar los pulmones? 3. Describa cómo cóm o es la circulación sanguínea fetal. ¿Es igual que la del adulto? 4. ¿Cuántas capas tiene la meninge? 5. ¿De dónde se origina el cristalino? BIBLIOGRAFÍA 1. LANGMAN JAN “Embriología Médica”. 11° Edición. Editorial Interamericana 2. MOORE PERSAUD “Embriología Clínic a”. Sexta Edición. McGraw Hill Interamericana


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UPSMP – MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA PRACTICA N° 07

OBSERVACION DE EMBRIONES: SISTEMA NERVIOSO CENTRAL Y MASCARILLA FETAL INTRODUCCION: Observaremos la cabeza y el sistema sistem a nervioso nervioso comprendido dentro de ella. COMPETENCIAS: COMPETENCIAS : 1. El alumno observará en en el embrión los órganos que se encuentran en la cabeza. 2. Elabora una lista de los cambios más importantes de los órganos y su destino final 3. Confecciona el esquema de un corte longitudinal y trasversal del embrión. 4. Compara los órganos del embrión, em brión, feto y adulto. M ATERIAL TERI AL Y METODOS M ETODOS

Se observará al microscopio cortes histológicos de embriones en la parte que corresponde a la cabeza, sistema nervioso central. PROCEDIMIENTOS  Al inicio se realiza una introducción sobre el desarrollo de la práctica.  Se dibuja en el pizarrón un esquema de lo que se va a observar como también se observa los cortes histológicos en el televisor que son refleja dos directamente del m icroscopio. icroscopio.  Seguidamente los alumnos observan los cortes histológicos en sus mesas de trabajo reconociendo las estructuras más importantes, determinando su origen, su función, a que órgano dará lugar y cuando termina su maduración. CABEZA Y SISTEM A NERVIOSO 

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Estomodeo: es la boca primitiva que se aprecia un poco más arriba del tórax identificando la lengua y al final de ella el repliegue de la epiglotis y por detrás el inicio del esófago. En la parte central de la cabeza se identifica los canales semicirculares que corresponden al oído interno. Cabeza: en la parte más superior se aprecia las cavidades que corresponden a los ventrículos cerebrales en cuyo interior se aprecian formaciones arbóreas que corresponde a los plexos coroideos. El sistema nervioso primitivo se encuentra de adelante hacia atrás el prosencéfalo, mesencéfalo y rombencéfalo con el IV ventrículo. Ojo: tiene la forma de un cáliz donde se aprecia la retina con su parte nerviosa y pigmentaria. En el centro una esfera fuertem ente coloreada que es el cristalino

CUESTIONARIO 1. ¿Qué función tienen los plexos plexos coroideos coroideos y donde se ubican? 2. ¿Cómo se origina la anencefalia? 3. Qué estructuras origina el prosencéfalo, mesencéfalo, rombencéfalo. 4. ¿De donde se origina el cristalino? BIBLIOGRAFÍA 1. LANGMAN JAN “Embriología Médic a”. 11° Edición. Editorial Interamericana Interam ericana 2. MOORE PERSAUD “Embriología Clínica”. 8° Edición. McGraw Hill Interam erica


Observaremos fetos de distintas edades gestacionales, tanto normales como con algunas malformaciones congénitas. COMPETENCIAS: COMPETENCIAS :

1. El alumno observará los fetos, los medirá y pesará para calcular su edad gestacional 2. Distinguirá sus distintas partes y las diferenciará diferenciará con fetos de otras otras edades gestacionales 3. Elabora una lista de las características externas de cada edad gestacional M ATERIAL TERI AL Y

METODOS MET ODOS Se observará fetos de distintas edades gestacionales.

PROCEDIMIENTOS  Al inicio se realiza una introducción sobre el desarrollo de la práctica.  Se dibuja en el pizarrón un esquem a de lo que se va a observar.  Seguidamente los alumnos observarán los distintos fetos colocados en cada una de sus mesas de prácticas. CÁLCULO DE LA ED AD GESTACIONAL Y DE LA FPP  Los Docentes explicarán el uso adecuado de las distintas reglas y métodos para calcular tanto la Ed ad Gestacional como la Fecha Probable de Parto.  Se realizarán ejercicios sobre estos métodos. CUESTIONARIO 1. Escriba la fórmula de la Regla de Mc Donald y explique cuando se usa. 2. Escriba la Fórmula de Naguele y explique explique cuando se usa. 3. Menciones métodos para determinar determ inar la edad gestacional preparto 4. Mencione los parámetros utilizados en la ecografía para determinar determ inar la edad gestacional 5. Parámetros de la Altura Altura Uterina para determinar la edad gestacional BIBLIOGRAFÍA 1. LANGMAN JAN “ Embriología Médica”. 11° Edición. Editorial Interamericana 2. MOORE PERSAUD “Embriología Clínic a”. 8° Edición. McGraw Hill Interamericana Interam ericana


36

UPSMP – MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA PRÁCTICA Nº 01

EL ÁRBOL GENEALÓGICO FAMILIAR, HEREDOGRAM A O PEDIGRI El árbol genealógico, heredogram a o pedigrí es un diagrama que representa la línea de antecesores y que inclu ye una compilación cuidadosa de los registros fenotípicos de una familia en varias generaciones. COMPETENCIAS 1. Introduce a cómo se investiga la herencia de los caracteres genéticos, enfermedades enferm edades genéticas (¿cómo se heredan?, ¿Son dominantes?, ¿Son recesivos?, ¿Son mendelianos?, etc.) 2. Usa la simbología sim bología característica en la elaboración del árbol genealógico. 3. Construye un árbol genealógico real utilizando como com o material de investigación a su grupo familiar. fam iliar. M ATERIALES TERI ALES

1. Hoja cuadriculada tamaño tam año A4. 2. Lápiz y borrador. 3. Simbología para la elaboración del árbol genealógico genealó gico familiar fam iliar (hoja adjunta). PROCEDIMIENTO El estudio se inicia con la persona pers ona o propósitus (la persona que acude al m édico como paciente y que llama la atención) revisando revisand o sus antecedentes familiares. La tarea en clase es construir su árbol genealógico. Los pasos a seguir son los siguientes: 1.

Escribe los datos personales del propósitos: a. Nombre, sexo, edad, dirección, teléfono. b. Antecedentes perinatales y postnatales. c. Antecedentes familiares y otros datos importantes.

2. La elaboración del árbol genealógico se inicia con el propósitus. propósitus. a. Los hombres hom bres son representados por símbolos sím bolos cuadrados y las mujeres mujeres con símbolos circulares. b. Una línea trazada entre el cuadrado y el círculo representa un casamiento casam iento entre el hombre hom bre y la mujer. c. Dos líneas trazadas entre el cuadrado y el círculo indica un casamiento consanguíneo. (ver otras situaciones en la tabla tab la de símbolos sím bolos Apéndice Apéndice I). d. Cuando es posible el cuadrado deberá ser colocado a la izquierda y el círculo a la derecha de la línea de casamiento. e. Las generaciones están conectadas por una línea vertical que se extiende hacia abajo desde la línea de casamiento casam iento hasta la próxima generación. f. Los hijos hijos de un casamiento están conectados por una línea horizontal unidos por líneas verticales cortas. El primer hijo es colocado a la izquierda del segundo, el segundo a la izquierda del tercero y así sucesivamente. Utilice la simbología correspondiente para casos de abortos, gestación, etc., ubicándoseles en el orden en que corresponden. g. Solo el hijo(a) del matrimonio que está en relación directa con el propósitus (es decir los padres del propósitus) podrán ser colocados juntos pero señalando entre paréntesis el lugar que ocupan dentro de su familia. h. Los individuos normales se representan por símbolos abiertos, cuadrados o círculos dependiendo del género, y los afectados por sím bolos cerrados. i. Cada generación es enumerada enum erada a la izquierda de las líneas filiales con números romanos. j. Todos los individuos individuos de cada generación (los filiales) son enumerados desde la izquierda con números arábigos. 3. Terminado de elaborar su árbol genealógico se dispondrá a identificar los rasgos genéticos que usted considere característico de su familia (mínimo dos rasgos).

4. Del mismo modo identificara los individuos afectados afectados (enfermos) con símbolos cerrados. 5. En la leyenda deberá indicarse el rasgo genético genético y la afectación afectación de los individuos a cuales se ha referido. En la leyenda también pueden indicarse otros datos que usted considere pertinentes. 2014-1 GUIA DE PRACTICAS


Ejemplo: Con un sólo carácter genético: Form a de pelo En este ejemplo se señala a un individuo varón con pelo ondulado (el propósitus) primogénito de un matrimonio cuyo padre fue el segundo de 4 hermanos, siendo el primero afecto de un mal sanguíneo y que tiene pelo lacio. La madre fue la primera de 4 hermanos, también con pelo lacio. En la actualidad los padres del propósitus esperan un siguiente hijo. Se pueden ver otros detalles de esta familia. Por ejemplo, el individuo II9, que tiene pelo lacio ha tenido dos relaciones, uno con un consanguíneo de pelo lacio con quien tuvo un aborto afectado y otra relación convivencial con quien tuvo un hijo norm al de pelo lacio. Etcétera Etcétera

I 1

2

3

4 (2)

II 1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

III

1

2

3

4

5

LEYENDA II-1 = Afectado por leucemia III-3= Gestación actual III-4= Aborto Carácter en estudio: PREGUNTAS 1. ¿Qué entiende por individuos afectados e individuos portadores? 2. ¿Qué son caracteres genéticos? 3. ¿Qué son alelos? 4. Explicar y graficar con árboles genealógicos ejemplos ejem plos de herencia autosómica dominante, dominante, Herencia autosómica recesiva, Herencia dominante ligada al cromosoma X, Herencia recesiva ligada al crom osoma X, y Herencia ligada al crom osoma Y. Y. 5. En el ejem ejemplo plo de arriba, explique por qué el propósitus tiene el pelo ondulado Si sus padres tienen el pelo lacio. ¿Cuál es la probabilidad de que el herm ano o hermana que va a nacer tenga también el pelo ondulado? BIBLIOGRAFIA Strachan, T. & A.P. Rea d. Genetica Molecular Humana. Hum ana. Ediciones Ediciones Omega. 1999. Stansfield, W . Teoria y problem p roblemas as de Genetica. McGraw-Hill. 1995. http://www.uic.edu/classes/bms/bms655/lessons3.html#Sample


5

APENDICE

SÍMBOLOS MÁS USADOS EN LA ELABORACION DEL ÁRBOL GENEALÓGICO ECAA 1. Propósitus o probando 15. Mujer portadora de un carácter ligado al “X” 2. Individuo Individuo de sexo masculino 16. Individuo fallecido de 3. Individuo Individuo de sexo femenino sexo masculino ó

4. Individuo Individuo de sexo indefinido o desconocido

17. Individuo fallecido de sexo femenino

5. Aborto espontáneo de sexo masculino

18. Representación de varios caracteres en un mismo individuo, de sexo masculino

6. Aborto espontáneo de sexo femenino

19. Representación de varios caracteres en un mismo individuo, de sexo femenino

7. Aborto espontáneo de sexo indefinido 8. Aborto inducido

x

21. Gestación actual (sexo masculino)

9. Aborto gemelar dicigótico

22. Gestación actual (sexo femenino)

10. Aborto gemelar monocigótico de sexo masculino

23. Hijo adoptivo (interna o familiar)

11. Aborto gemelar monocigótico de sexo femenino

24. Hija adoptiva (interna o familiar)

12. Aborto gemelar de cigocidad desconocida. 13. Natimuerto de sexo masculino 14. Natimuerto de sexo femenino

20. Gestación actual (sexo no conocido)

?

N N

25. Hijo adoptivo (externo o no familiar) 26. Hija adoptiva (externa o no familiar) 27. Número de hermanos sin identificar sexo

ó


28. Número de hermanos de caracteres normales, de sexo masculino 29. Número de hermanos de caracteres normales, de sexo femenino

N

40. Cruzamiento legítimo o casados 41. Cruzamiento ilegítimo o convivientes

N

30. Individuos afectados, masculino

42. Separación

31. Individuos afectados, Femenino

43. Divorcio

32. Individuo afectado fallecido de sexo masculino

44. Unión entre consanguíneos

33. Individuo afectado fallecido de sexo femenino

45. Matrimonio sin descendencia

34. Individuo Individuo heterocigoto de sexo masculino

ó

46. Azoospermia (Infertilidad)

35. Individuo heterocigoto de sexo femenino

ó

47. Persona de sexo masculino de quien se ignora si tiene o no el rasgo

36. Gemelos dicigóticos o fraternos

48. Persona de sexo femenino de quien se ignora si tiene o no el rasgo

37. Gemelos monocigóticos o idénticos, de sexo masculino


?

49. Progenitor único y su descendencia (pareja normal sin importancia para el análisis)

38. Gemelos monocigóticos o idénticos, de sexo femenino 39. Gemelo de cigocidad desconocida.

?

?

I 50. Descendencia por 1 2 orden de nacimiento. Números romanos II Indican generaciones, 1 2 3 números arábigos indican orden de nacimiento dentro de cada generación

7

PRÁCTICA PRÁCTICA Nº 02 CROMOSOMAS HUMANOS: CARIOTIPO MACROSCOPÍA COMPENTENCIAS: 1. Observará cómo cóm o se presentan los cromosomas cromosom as coloreados mediante método convencional y bandeo GTG en cada una de las fotografías y/o fotocopias y contará el número total de cromosomas. 2. Identificará la la morfología morf ología de cada uno de los cromosom cromosomas as según el tamaño y la posición del centrómero (metacéntrico [centrómero en el centro del cromosoma], cromosom a], submetacéntrico [centrómero no ubicado en el centro, por lo que se observa un brazo ligeramente más corto] y acrocéntrico [centrómero cerca de un telómero]). 3. Clasificará y analizará analizará cada uno de los cromosomas por grupos según Convención de Denver. 4. Confeccionará el cariograma de cada fotografía. 5. Aplicará los conocimientos teóricos y Evaluará el tipo de alteración cromosóm ica que se presente en cada fotografía. 6. Juzga y relaciona el cariotipo con las alteraciones fenotípicas del síndrome. M ATERIALES: TERI ALES:       

Guía de Prácticas Fotografías y/o fotocopias de cariogram as. Vinifan o mica, tamaño A-4 (transparente). Lápiz de cera “Markin” (para pintar vidrio) y/o plumón indeleble Tijera. Cinta scotch o clips Cuatro hojas de papel bond blanco A-4.

PROCEDIMIENTO: Con las fotografías y/o fotocopias confeccionar los cariogramas correspondientes de cada una de ellas. Según las siguientes pautas: 1. Realizar el recuento de los cromosom cromosomas as de cada una de las las metafases señaladas. 2. Colocar una hoja de vinifán sobre una fotografía y calcar o copiar con lápiz “MARKIN” cada uno de los cromosomas reconociendo sus elementos. 3. Transportar la copia sobre una hoja de papel bond blanco, en la que se anotarán los los nombres de los cromosomas con letras. 4. RECONOCER E IDENTIFICAR los elementos: brazos “p” o brazo corto, brazo “q” o brazo largo, centrómero o constricción primaria, satélite, tallo o talo. 5. RECORTAR los cromosomas de cada una de las fotocopias. 6. FORMAR los pares homólogos y colocarlos en orden decreciente de tamaño. 7. DISTRIBUIR los cromosomas cromosom as en grupos: A, B, C, D, E, F, G, y cromosomas sexuales sexuales “X” o “Y”, según la clasificación clasificac ión de DENVER. 8. Hacer el RECUENTO e IDENTIFICACION de los crom osomas autosómicos y sexuales. 9. ORDENAR LOS PARES DE CROMOSOMAS y colocarlos en una hoja de cartulina o papel bond de 80 gramos. 10. DIAGNOSTICAR el complemento cromosómico cromosóm ico y síndrome síndrom e correspondiente. Repetir la tarea con cada una de las fotograf ías.


8


PREGUNTAS: I.

Define brevemente y grafique lo siguiente Quinetochoro o Kinetochoro o Cromosoma o Satélite o Cariograma o Haploidía o Complemento cromosómico o Cromosoma acrocéntrico o Mitosis o Monosomía o Aneuploidía o

- Cromátide - Cromómera - Tallo o Talo - Cariotipo - Constricción Secundaria - Genoma - Cromosoma Telocéntrico - Tetraploidía - Meiosis - Mosaico

II. Según el modelo de CARIOTIPO NORMAL, arme arm e los cariogramas correspondientes correspondientes a cada una de las fotocopias de las metafases señaladas. Diagnostica el complemento o Fórmula cromosómica en cada caso. Menciona los síndromes correspondientes a cada uno de ellos. III. Realiza el resumen de los caracteres caracteres fenotípicos fenotípicos de los síndromes diagnosticados. diagnosticados. IV. Explique el fundamento fundamento y para qué se usan los métodos de marca como: Bandas C, C, G, R, Q, NOR, ICH BIBLIOGRAFIA:  Armendares Salvador. CITOGENETICA HUMANA.  De Robertis Emer y Alan. GENETICA MÉDICA. Edición en español: españ ol: Marbán Libros, S.L. capitulo 3 pp. 29 Emery 34  Gonzáles Santander  Egozcue J, y colaboradores. GENETICA MÉDICA.  Grouchy J, y colaboradores. ATLAS colaboradores. ATLAS DE ENFERMEDADES CROMOSOMICAS.  Solari A. GENETICA HUMANA. Fundamentos y aplicaciones en Medicina. GENETICA EN MEDICINA.  Thompson & Thom pson. GENETICA Lisker, Armendares, INTRODUCCI INTR ODUCCION ON A A LA GENETICA HUMANA.  Lisker, Armendares,


ANEXO Nº 1

CARACTERÍSTICAS MORFOLOGÍCAS DE LOS CROMOSOMAS: CROMOSOMAS

AUTOSOMICOS:

Grupo “ A A”:

Pares 1, 2 y 3. Los pares 1 y 3 son grandes, metacéntricos. metacéntricos. submetacéntrico. El par 2 es ligeramente, submetacéntrico.

Grupo “B”:

Pares 4 y 5 Cromosomas grandes, submetacéntricos propiamente dicho.

Grupo “C”:

Pares 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12 Los pares 6, 7, 8 y 11 son medianos, ligeramente submetacéntricos. submetacéntricos . Los pares 9, 10 y 12 son medianos, submetacéntricos submetacéntricos.. Los cromosomas sexuales “X” se encuentran en este grupo.

Grupo “D”:

Pares 13, 14 y 15 Cromosomas grandes, acrocéntricos y presentan satélites.

Grupo “E”:

Pares 16, 17 y 18 El par 16 es mediano, metacéntrico. Los pares 17 y 18 es pequeño, submetacéntrico. submetacéntrico .

Grupo “F”:

Pares 19 y 20 metacéntricos. Cromosomas pequeños, metacéntricos.

Grupo “G”:

Pares 21 y 22 Cromosomas pequeños, acrocéntricos Presentan satélites. El cromosoma cromosom a sexual sexual “ Y” se encuentra en este grupo.

CROMOSOMAS SEXUALES:

CROMOSOMA SEXUAL “ X” :  Es mediano, ligeramente submetacéntrico. submetacéntrico .  Con respecto a su tamaño, es más grande que el cromosoma Nº 8, y más pequeño que el crom osoma N° 7. paralelo s entre sí.  Sus brazos “p” y “q” son rectos y paralelos CROMOSOMA SEXUAL “ Y ” :  El cromosoma es pequeño, acrocéntrico  Es más grande que los cromosomas de su grupo (Grupo “G”)  Sus brazos “p” son com pactos y gruesos, se visualizan fácilmente.  Sus brazos “q” son rectos y paralelos paral elos entre sí.  No presentan satélites.


10

MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA

ANEXO N° 2 IDEOGRAMA DEL PATRON DE BANDAS

"GTG"

. r

·:,t

'

i 1

2

6

7

8

13

14

15

19

i 20


5

4

3

21

¡1

:

¡

9

10

11

12

16

17

18

X

y

22

CARIOGRAMA Muestra: SANGRE PERIFÉRICA (Cultivo de Linfocitos) Técnica de coloración: BANDAS GTG (Banda G usando Tripsina y Giemsa)

CARIOTIPO:............................................ Dx. CITOGENETICO:.....................................................................................

-----------------------------------------------------1

2

-----------------------------------

3

4

5

A

B

---------------------------------------------------------------------------------------------------------6

7

8

9

10

11

12

C

--------------------------------------------13

14

15

-------------------------------------------16

17

D

18

E

--------------------------19

20

-----------------------------21

F

22

G

SEXUALES----------------------------------------


12

UPSMP – MEDICINA HUMANA EMBRIOLOGÍA HUMANA Y GENÉTICA BÁSICA PRACTICA Nº 03

D E T E R M I N AC AC I O N D E L C O RP Ú S C U L O “X ” ó CROMATINA SEXUAL ó CORPUSCULO DE BARR BARR I.

COMPETENCIAS:  Observa en los núcleos de las células epiteliales en Interfase los elementos determinantes del sexo,  identificando la la presencia del cromosom a “X” en forma form a de corpúsculo de Barr.  Diferencia los núcleos positivos y negativos que le permitan diagnosticar el sexo cromatínico en la muestra estudiada.

II.

GENERALIDADES La masa cromatínica que se encuentra en las células de los mamíferos hembras incluyendo a la especie humana, con excepción de la zarigüeya, constituye la CROMATINA SEXUAL, CUERPO DE BARR, O CORPÚSCULO “X” Puede encontrarse en diferentes tipos de células, pero debido a la sencillez del procedimiento y a la rapidez de la técnica empleada se le estudia en células epiteliales de la mucosa oral. –

– –

En las las células epiteliales se encuentra ADHERIDA A LA MEMBRANA INTERNA DEL DEL NÚCLEO COMO DESCANSANDO EN ELLA. Su tamaño normal varía de 0.7 a 1.2 micras (µ). Su forma puede ser triangular semi-esférica, alargada o circular. Su número por núcleo varía de 0-4 corpúsculos. En las células nerviosas se encuentra ubicada al centro del núcleo. En los neutrófilos segmentados se encuentra a manera de palillo de tambor tambor

La regla para determinar el número de cromosomas “X” puede indicarse en la siguiente fórmula

NCS = NCX - 1 “El número de cromatina sexual es igual al número de cromosomas X menos uno”

Esto se puede observar en el siguiente cuadro

FENOTIPO

MASA CROMATINICA

Nº DE CORPUSCULOS POR NUCLEO

COMPLEMENTO CROMOSOMICO

0

46,

0

45, X0

Varón doble Y

0

47, XYY

Hembra normal

1

46, XX

Síndrome Klinefelter

1

47, XXY

Síndrome Triple X

2

47, XXX

Síndrome Tetra X

3

48, XXXX

Varón normal Síndrome de Turner


13

Síndrome Penta X


4

49, XXXXX

14


Si el corpúsculo de Barr es pequeño, es decir menor de 0.7 ; o es grande es decir mayor de 1.2 , dará lugar a anom alías estructurales del cromosoma “X” como se observa en el siguiente cuadro: FENOTIPO

MASA CROMATINICA

TAM TAMA O DE DEL CORPUSCULO

Deleción Formación de anillo Isocromación Duplicación

Pequeño

Grande

COMPLEMENTO CROMOSOMICO 46, X, del (X)(p) 46, X, del(X)(q) 46, X, i(X)(p) 46, X, r(X) 46, X, i(X)(q) 46, X, dup(X)(q)

Para el diagnóstico debe examinarse por lo menos 100 núcleos por lám ina y se obtendrá el prom edio expresado en porcentaje. Para la técnica del Carbol-fucsina, de 0-5% es negativo negat ivo y más de 5% es positivo. III. MATERIALES:  Láminas o porta-objetos,  Laminillas o cubre-objetos  Lápiz Markin o marcador mar cador de láminas, Espátulas de madera o bajalenguas.  Alcohol eter al 50%,  Batería completa de coloración,  Bálsamo del Canadá,  Aceite de inmersión,  Microscopio con lentes de inm ersión. IV. PROCEDIMIENTO 1. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA: MUESTR A:  Limpiar las láminas y marcarlas con lápiz de vidr io.  Realizar el raspado de las células epiteliales de la m ucosa oral (carrillos derecho e izquierdo).  Hacer el extendido de las muestras en las láminas.  Fijarlas en alcohol-éter al 50% durante 5 a 10 m inutos. 2. COLORACIÓN: METODO DE CARBO-FUCSINA  Hidrolizar las láminas con solución de ácido clorhídrico al 5 0% durante 10 minutos. m inutos.  Lavar con agua destilada o agua corriente.  Colorear con carbol-fucsina durante 5 a 10 minutos.  Diferenciar en alcohol absoluto de 95% (aproximadamente 10 minutos).  Cambiar a alcohol absoluto por 1 minuto.  Clarificar con Xilol (2 cambios)  Montar en Bálsamo de Canadá 3. LEC URA Y DIAGNOSTICO: DIAGNOSTICO: 3.1. OBSERVAR A 10X: Ubicar Ubicar la muestra en la la lámina y observar estructuras estructuras puntiformes de color fucsia o lila. lila. 3.2. OBSERVAR A 40X: Diferenciar los núcleos buenos de los inadecuados e identificar el corpúsculo “X” si es posible. 3.3. OBSERVAR A 100X  Diferenciar los núcleos que presentan corpúsculo de Barr (positivos) y los núcleos sin corpúsculo (negativos).  Observar la morfología y el tamaño de los corpúsculos.  Realizar el conteo de por lo menos 100 núcleos buenos, indicando los porcentajes analizados, luego obtener el promedio total.  Diagnosticar el sexo cromatínico, según los criterios establecidos.  Esquematizar sus observaciones en el microscopio 2014-1 GUIA DE PRACTICAS

15


V.

CUESTIONARIO: 1. Defina: Cromatina Eucromatina Heterocromatina Heterocrom atina Cromatina Crom atina positiva Cromatina negativa Clava o palillo de tambor Heteropicnosis Isopicnosis 2. Explique la hipótesis de Mary Lyon: Concepto, fundamento, propuesta resúmen resúm en y conclusiones 3. ¿Cuáles son los factores que alteran la cantidad y el tamaño normal del corpúsculo corpúsc ulo de Barr? 4. ¿En qué día de formación form ación y desarrollo embrionario se puede observar la crom atina sexual?

VI. BIBLIOGRAFÍA:  CUMMINGS, “HERENCIA HUMANA ”.  EGOZCUE, “GENETICA MEDICA”.  JORDE-CAREY-WHITE. JORDE-CAREY-WHITE. “GENETICA MEDICA”  SOLARI, “GENETICA HUMANA: FUNDAMENTOS Y APLICACIONES APLICACI ONES EN MEDICINA”  LISKER-ARMENDARES. INTRODUCCION A INTRODUCCION A LA GENETICA HUMANA.


15

CROMOSOMAS HUMANO: CARIOTIPO MICROSCOPIA COMPETENCIAS: 1. Reconoce bajo el microscopio los elementos responsables de la herencia: LOS CROMOSOMAS EN LOS CULTIVOS CELULARES “ IN VITRO (CULTIVO DE LINFOCITOS) cuando las células están en Interfase y en división (metafase). 2. Comprueba el número de cromosomas en la especie humana diferenciándolos por grupos (A, B, C, D, E, F, G Y SEXUALES) mediante el MÉTODO CONVENCIONAL que podrían corresponder a anomalías numéricas. 1. Observa los cromosomas cromosom as mediante el MÉTODO DE BANDAS “GTG ” (bandeo G, Tripsina Giemsa) para identificar los cromosom as y poder averiguar averi guar anomalías estructurales. ”

GENERALIDADES La célula en división está formados por elementos en form a form a de varillas llamados “cr omosomas omosomas”, que viene de Chroma = color y Soma = cuerpo. Es decir que se tiñen intensamente con los colorantes básicos como la fucsina, orceina, hematoxilina, etc. Cada especie animal o vegetal posee un complemento cromosómico propio y característico en cuanto al número y forma de los cromosomas. El ser humano tiene 46 cromosomas. PROCEDIMIENTO Lámina Nº 1 Método Convencional (Coloración Giemsa). Láminas preparadas con cultivo de linfocitos en sangre periférica. OBSERVAR A 10X: Corpúsculos pequeños de forma esférica, intensamente teñidos de color fucsia o lila  (linfocitos en Interfase) Elementos puntiformes y/o alargados e intensamente coloreados formando grupos  (linfocitos en división o metafases). Esquematizar sus observaciones. 

Linfocito en interfase

Linfocito en división

OBSERVAR OBSERV AR A 40X: Realizar el recuento de los cromosomas en cada metafase. Identificar los cromosomas reconociendo la morfología de cada uno de ellos Esquematizar sus observaciones.


16


OBSERVAR OBSERV AR A 100X: Cromosomas en metafase identificando sus cromátide y la posición de sus centrómeros. Identificar los cromosomas por grupos (A, B, C, D, F, G y sexuales). Esquematizar sus observaciones.

Brazo p Centrómero Brazo q

Cromátide

Grupo G

Grupo A

Grupo D


17

Lámina Nº 2 Método de Bandeo: Bandas GTG Láminas preparadas con cultivo de linfocitos en sangre periférica. Seguir el mismo procedimiento realizado en la lámina Nº 1 observando obser vando detenidamente a 10X y a 40X.

Cromosoma Metacéntrico Cromosoma Acrocéntrico

Cromosoma Submetacéntrico

OBSERVAR OBSERV AR A 100X: Cromosomas de los grupos antes mencionados. Diferenciar las bandas en cada uno de los cromosomas crom osomas buscando sus pares homólogos. Comparar cada uno de los cromosomas y tratar de identificarlos con la ayuda del patrón de bandas que se presentan en la hoja adjunta. Esquematizar los cromosomas crom osomas 1, 5, 13, 16, 19, 21 y el cromosoma sexual X.

Cromosoma 21

Cromosoma 13

Cromosoma


1

18


PREGUNTAS 1. Defina los siguientes conceptos:    

2.

Sitios frágiles Heteromorfismo cromosómico Heterocromatina constitutiva Micronúcleos

- Polimorfismo de los satélites - Polimorfismo del cromosoma Y - Gaps

Explique cuál es el fundamento y para qué se usan las técnicas y marcadores moleculares de: - PCR - Microarrays

- RFLP - Souther Bloot

- SSR - FISH

- AFLP

BIBLIOGRAFIA  CUMMINGS, MICHAEL. “Herencia Hum ana”.  DE ROBERTIS, E. “Biología Celular y Molecular ”. Atlas de Enfermedades Cromosómicas”  GROUCHY-TURLEAU. “ Atlas  LISKER-ARMENDARES. “Introducción a la Genética Hum ana”.  MULLER-YOUNG. “Genética Médic a” Emery’s  SANCHEZ CASCOS Y COL “Genética al d ía” Editorial Labor.  THOMPSON, THOMPSON. “Genética Médic a”.


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N° 04 M ARCADORES MOLECULARES PARA DETERMINAR VARIANTES INSERCIÓN /DELECIÓN (I/D) EN EL GEN ECA, ASOCIADO ASOCI ADO A ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES

INTRODUCCIÓN El sistema RAS (R ( Renin Angiotensin S ystem) stem ) cumple una función muy importante en la homeostasis cardiovascular. La enzima ACE ( Angiotensin Converting Enzyme) ó ECA, cataliza la reacción del paso de Angiotensina I a Angiotensina II. La AngII es una potente vasoconstrictiora que ejerce su influencia sobre el corazón y vasos sanguíneos a través de sus efectos hemodinámicos y celulares directos. Se ha reportado que la inhibición farmacológica de ECA, conduce a la mejoría en un grupo de pacientes con desórdenes cardiovasculares (ej., hipertensión, enfermedades coronarias e hipertrofia ventricular izquierda). Por ello, el análisis genético del polimorfismo de ECA y otros genes asociados es de suma importancia, ya que conllevaría a dilucidar los alelos implicados en dichas enfermedades. En algunos estudios previos en distintas poblaciones, los individuos con genotipo DD, tienen una propensión 3-4 veces mayor de sufrir algunas enfermedades cardiovasculares. Sin embargo esto no sucede en otras poblaciones, por ello se está caracterizando la distribución de los alelos de ECA en pacientes y controles de la población peruana. OBJETIVO Identificar los genotipos Inserción /Inserción (I/I), Inserción/Deleción (I/D) y Deleción/Deleción (D/D) en muestras de sangre de algunos donantes. TERI ALES M ATERIALES          

.Muestras de sangre (<1ml) .Guantes descartables .Agarosa para preparar geles al 1% .Buffer de carga (azul de bromofenol, xylene cyanol, sucrosa) .Buffer TBE 1X (Tris base, Acido bórico, EDTA) .Solución de bromuro de etidio (EtBr) .Micropipetas de 10 ul .Gradillas para tubos eppendorf de 1.5ml y 0.2m l .Equipo de electroforesis horizontal, fuente de pode, temociclador .Transiluminador UV

PROCEDIMIENTO  La extracción de ADN de sangre periférica comprende el lavado de las muestras con TE 20:5 (Tris- EDTA), lisado con lauryl sarcosine, digestión proteica con Proteinasa K, precipitación del ADN con sales y etanol  Se procede a la amplificación amplif icación por PCR de un sector del Intrón 16 del gen ECA (locus en 17q23). La técnica de PCR se basa en la aplicación de la enzima Taq polimerasa que sintetiza las cadenas complementarias del ADN, la misma que se inicia a partir de los oligodesoxinucleótidos (primers F y R) en el área ESPECIFICA prevista a ser amplificada. El material básico para una reacción de PCR incluye: desoxinucleótidos (dNTPs: A,C,G,T), un buffer, cloruro de magnesio, agua ultrapura, primers, enzima (Taq polimerasa) y el ADN de cada muestra. Los dNTPs hibridan al ADN cuando éste se denatura y las cadenas se separan. Las cadenas madre sirven de molde o matriz para que se sinteticen nuevas cadenas a temperaturas específicas de cada reacción. Se cumplen tres etapas o ciclos:  denaturación del ADN (a 94°C)  hibridación de los primers (a 58°C)  elongación de la cadena de AND por acción de la Taq (72°C) Estos ciclos se repiten por 30 veces o más, logrando así la amplificación de un fragmento determinado de ADN que después se visualiza corriendo la reacción (electroforesis horizontal a 100 voltios) en geles de agarosa al 1%. - Tinción de geles en la solución de brom uro de etidio. - Se visualiza los productos de PCR en el transiluminador.


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Fig. 2 Esquem a del del gen ECA y de la región polimórfica (deleción ó inserción) El polimorfismo consta de dos fragmentos alélicos: uno de 490 bp (pares de bases) denominado Inserción (I) y otro de 190 bp denominado deleción (D) Los posibles genotipos que se pueden hallar en las muestras serían: I/I = hom ocigoto para la Inserción I/D = heterocigoto (inserción/deleción) D/D = homocigoto para la deleción PREGUNTAS 1. Defina polimorfismo genético 2. En la práctica realizada, identifique identifique los genotipos de cada muestra: I/I, I/D ó D/D D/D 3. Según lo explicado, qué paciente(s) analizados en la práctica estarían en mayor riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular? 4. Dé otro ejemplo ejem plo de enfermedad genética a sociada a un polimorfismo


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Guia Practicas Embriologia 2014

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