Bakterioloske Boje i Mehanizmi Bojenja, Podela Bojenja

BAKTERIOLOSKE BOJE I MEHANIZMI BOJENJA, PODELA BOJENJA, PRIMENA BOJENJA U BAKTERIOLOGIJI

 Jovana Nesic 13346 Bojana Mitrovic 13474



Nativni preparat



Bojeni preparat

Nativni preparat: omogucava vizualizaciju:

1. Oblika bakterija 2. Velicine bakterija 3. Pokretljivosti bakterija nedostatak-slaba nedostatak-slaba vidljivost, mogucnost infekcije, jednokratna upotreba 

 procedura pripreme: 

 

Na predmetnicu se stavlja uzorak (u slucaju tecne kulture stavlja se kap suspenzije, u slucaju cvrste podloge u kap vode unosi se materijal iz kulture) Pokrovnica mikroskopiranje

   

 Vrste nativnog preparata: 1. Nativni preparat (u užem smislu) 2. Viseca kap 3. Tamno polje

Bojeni preparat omogucava vizualizaciju: 1. Oblika bakterija 2. Velicine bakterija 3. Rasporeda bakterija 4. Pojedinih struktura bakterijske celije (kapsula, spore, granule...) ne i pokretljivost

prednosti-visekratna upotreba, ne postoji mogucnost infekcije, posmatranjestrukture, oblika i morfologije



 procedura pripreme:     

Nanosenje suspezije na predmetnicu i pravljenje razmaza Susenje na vazduhu Fiksiranje (provlacenjem kroz plamen) kako bi ubili MO i fiksirali ih za predmetnicu Bojenje preparata Mikroskopiranje

Podela bojenja u bakteriologiji: 1. 

prosta bojenja složena bojenja: koristi se 2 ili vise boje, uocavanje morfologije i strukture celije  

diferencijalna Specijalna

1. Prosto bojenje - koristi se 1 boja  

Monohromatsko metahromatsko

-uocavanje oblika i rasporeda celija -boje koje se primenjuju: kristal violet, safranin, metilensko plavo •

negativno kontrastiranje

2. Slozeno bojenje koristi se 2 ili vise boje, uocavanje morfologije i strukture celije Diferencijalna bojenja

bojenje po Gram-u bojenje po Ziehl-Neelsen-u

-Bojenje po Gram-u 

 

1884. danski histolog Christian Gram razvio metod bojenja u cilju diferencijacije bakterijskih celija i nukleusa eukariotskih celija diferencijalna slika (identifikacija Gr+ i Gr- bakterija) na osnovu razlike u gradji cel. zida Gr+ bakterije boje se ljubicasto, dok se Gr- bakterije boje crveno

CELIJSKI ZID GRAM POZITIVNIH BAKTERIJA

CELIJSKI ZID GRAM NEGATIVNIH BAKTERIJA

Procedura bojenja po Gramm-u Nakon pravljenja razmaza, susenja na  vazduhu i fiksiranja pristupa se proceduri bojenja preparata 

   



bojenje kristal violetom 1-2 min (neophodno je staviti na preparat filter hartiju) lugol 1-2 min ispiranje etanolom 5-10 sec ispiranje vodom bojenje safraninom/ karbol fuksin 1-2 min ispiranje vodom, susenje filter hartijom, mikroskopiranje

BOJENJE PO ZIEHL-NEELSENU

 

Za razlikovanje acido-alkoholnih rezistentnih bakterija od ostalih vrsta. Za bojenje se koristi karbol fuksin 

Postupak:: Karbol fuksin uz zagrevanje  Voda 2% HCl rastvorena u 96% etanolu  Voda Metilensko plavo  Voda 

mikobakterije su obojene crveno, a sve druge plavo.

Specijalna bojenja 

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Bojenje spora (po Hauser-u) karbol fuksin  Voda  Vodeni rastvor 2% H2SO4  Voda Metilensko plavo  Voda

spore su obojene crveno, a tela bacila plavo

Bojenje kapsule (po Olt-u)



Za bojenje bakterijske kapsule (ruzicasto- safranin)

Bojenje intracitoplazmatskih granula (po Neisser-u)

Za bojenje C. diphtheriae  Tela bacila se boje zuto a metahromatske granule plavo

Primeri prostog i slozenih bojenja

PRAVLJENJE RAZMAZA

Fiksiranje preparata

Procedura prostog bojenja