PRAKTIKUM VI
I.Judul Pratikum Uji Ninhidrin II. Tujuan : Membuktikan adanya asam amino bebas dalam protein III.
Dasar teori Protein merupakan komponen utama dalam sel hidup yang terbentuk dari asam-
asam amino melalui ikatan peptida dan memegang peranan penting dalam proses kehidupan. Molekul protein mengandung unsure-unsur C, H, O, N dapat pula mengandung dan P emua asam amino atau peptida yang mengandung asam !-amino bebas akan bereaksi dengan ninhidrin membentuk senya"a kompleks ber"arna biru#ungu. Namun, prolin dan hidroksiprolin menghasilkan senya"a ber"arna kuning. (Buku
penuntun Biokimia untuk Mahasiswa Analis)
ambar *. /eaksi uji Ninhidrin pada protein IV.
Bahan dan Alat 1. $arutan albumin %&' gelatin %&' kasein (,)&' dan pepton (.)&. 2. Pereaksi ninhidrin (,*& . +lat pemanas atau penangas air !. Pengatur "aktu ". Pipet ukur atau tetes
V.
Prosedur 1. Menyediakan tabung reaksi yang bersih, lalu masing-masing isilah dengan
larutan albumin, gelatin, kasein, dan pepton sebanyak % ml. 2. Menambahkan ) tetes pereaksi ninhidrin pada setiap tabung. . emudian, dipanaskan di atas penangas air hingga mendidih selama ) menit. VI.
#asil Per$o%aan
&o.
'aUt ji
#asU il ji
Asam Amino
*
+lbumin%&
&inhidrin Merahmuda
Be%as ()*+, 0
dengan endapan putih % 2
elatin %& asein%&
Pepton %&
Albumi
1ening 1ening3agak pekat4 Ungu
Gelatin
Kasei
-
-
0
Pepto
ambar Hasil Pratikum
VII.
Pem%ahasan +sam 5asam amino bereaksi dengan Ninhidrin untuk membentuk produk yang
disebut ungu ruhemann. 6arna ungu pada larutan asam amino inilah yang menandakan bah"a asam amino tersebut bereaksi positi7 terhadap uji Ninhidrin. e8ara teori asam amino atau peptida yang mengandung asam !-amino bebas akan bereaksi dengan Ninhidrin membentuk senya"a kompleks ber"arna ungu. Namun, prolin dan hidroksiprolin menghasilkan senya"a ber"arna kuning. Untuk uji Ninhidrin, reagen ini memberikan "arna spesi7ik ungu untuk asam amino. 9ari beberapa asam amino yang kami ujikan terny ata hanya satu yang memberikan "arna ungu yaitu Pepton.. +sam amino yang kami ujikan adalah pepton, kasein, gelatin dan albumin yang berasal dari sampel berupa put ih telur. /eagen Ninhidrin spesi7ik terhadap asam amino yang mengandung gugus hidroksi. Pada per8obaan uji ninhidrin ini asam amino yang sudah ditetesi ninhidrin dan dipanaskan akan mengalami denaturasi. 9enaturasi disini artinya hilangnya si7at-si7at struktur lebih tinggi terka8aunya ikatan hydrogen dan gaya-gaya sekunder lain yang
mengutuhkan molekul itu artinya hilangnya si7at biologis protein tersebut tetapi masih dapat diuji apakah protein tersebut positi7 terhadap uji ninhidrin. 1egitupun dengan putih telur yang mengandung albumin. Pemanasan putih telur akan mengakibatkan albumin itu membuka lipatan dan mengendap, dihasilkan suatu at padat putih. VIII.
-imulan 1. Untuk uji Ninhidrin, reagen ini memberikan "arna spesi7ik ungu dan endapan
putih untuk asam amino. 2. Pepton dan +lbumin termasuk asam amino bebas. I/.
Pertan0aan *. ;elaskan apa yang dimaksud asam amino bebas< %. Pada per8obaan, manakah yang membe rikan hasil posi ti7 pada uji ninh idrin<
Mengapa< 2. +pakah reaksi ninhidrin dapat digu nakan untuk menentukan asam amino se8ar a kuantitati7< ;elaskan= . >uliskan struktur kimia asam amino prolin dan hidroksiprolin< ;a"aban : 1. Asam amino bebas adalah asam amino dimana gugus aminonya tidak terikat. %. Pada per8obaan pepton, karena pepton term asuk asam amin o bebas, sehi ngga pada uji Ninhidrin yang diperlakukan pada at tersebut menghasilkan "arna ungu. 2. 9apat. emakin banyak ninhidrin pada at uji yang dapat bereaksi, semakin pekat "arnanya. Hal ini juga mendasari bah"a uji Ninhidrin dapat digunakan untuk menentukan asam amino se8ara kuantitati7.
. truktur kimia asam amino prolin dan hidroksiprolin :
ambar struktur prolin
ambar strutur hidroksiprolin
Datar Pustaka
?stein, @asid dan Nursanti, $isda. %((A. Penuntun Praktikum BIOKIMIA Untuk
Mahasiswa Analis. @ogyakarta : +N9B.
