WANTAI HbsAg ELISA
PENGGUNAAN YANG YANG DIMAKSUDKAN
WANTAI HBsAg ELISA adalah enzim yang terkait dengan immunologiassay untuk deteksi kualitatif HBsAg dalam serum manusia atau plasma. Ini dimaksudkan untuk skrining donor darah dan untuk mendiagnosis pasien yang terkait dengan infeksi irus hepatitis B. RINGKASAN
HB! adalah irung irung "NA #erunta #eruntaii ganda ganda yang yang ter#ung ter#ungkus kus dan terga#u terga#ung ng dalam dalam keluar keluarga ga hepadna hepadnair irida idaee dan diakui diakui se#agai se#agai penye#a penye#a# # utama utama penula penularan ran darah darah hepatitis #ersama dengan irus hepatitis $ %H$!&. Infeksi dengan HB! menginduksi spektrum manifestasi klinis mulai dari penyakit ringan' tidak (elas hingga hepatitis fulminan' penyakit hati kronis #erat' yang pada #e#erapa kasus dapat menye#a#kan sirosis dan karsinoma hati. )lasifikasi infeksi hepatitis B mem#utuhkan identifikasi #e#erapa penanda serologi yang diekspresikan selama tiga fase %inku#asi' akut dan sem#uh& dari infeksi. Sekarang #e#erapa tes diagnostik digunakan skrining' diagnosis klinis dan mana(emen diasease. Antigen permukaan hepatitis B atau HBsAg' yang se#elumnya digam#arkan se#agai antigen Australia' adalah protein terpenting dari amplop irus hepatitis B. Antigen permukaan mengandung determinat *a*' umum untuk semua su#tipe irus dan imunologis di#edakan dalam dua su#kelompok yang #er#eda %ay dan ad&. HB! memiliki +, serotipe utama dan empat su#tipe HBsAg telah dikenali %ad-' ady' ay- dan ayr&. H#sAg dapat dideteksi hingga / minggu se#elum tingkat ALT men(adi tidak normal dan 0 hingga 1 minggu se#elum ge(ala #erkem#ang. "eteksi serologis HBsAg adalah metode yang kuat untuk diagnosis dan pen2egahan infeksi HB! dan ELISA telah men(adi sistem analitis yang digunakan se2ara luas untuk skrining donor darah dan diagnostik klinis HB! pada indiidu yang terinfeksi.
PRINSIP UJI
3ntuk mendeteksi HBsAg' WANTAI HBsAg ELISA menggunakan metode ELISA anti#o anti#odi di 4sand4sand-i2h i2h55 di mana' mana' strip strip mi2romi2ro-ell ell polist polistir irena ena telah telah dilapi dilapisi si dengan dengan anti#o anti#odi di monokl monoklonal onal khusus khusus untuk untuk HBsAg. HBsAg. Sampel Sampel serum serum atau atau plasma plasma pasien pasien ditam#ahkan ke mi2ro-ell #ersama dengan anti#odi kedua terkon(ugasi enzim lo#ak peroksidase %H678$on(ugated& dan diarahkan terhadap epitop yang #er#eda dari HBsAg. HBsAg. Selama Selama inku#a inku#asi' si' imunok imunokomp omplek lekss spesi spesifik fik yang yang ter#en ter#entuk tuk dalam dalam kasus kasus kehadiran HBsAg dalam sampel' ditangkap pada fase padat. Setelah men2u2i untuk menghapus menghapus sampel protein serum dan H678terkon( H678terkon(ugasi ugasi yang tidak terkon(ugasi' terkon(ugasi' peru#ahan kromogen yang mengandung tetramethyl8#enzine %T9B& dan urea peroksida ditam#ahkan ke dalam sumur. sumur. "engan adanya anti#odi8anti#odi8antigen8 anti#o anti#odi di %H67& %H67& *sand*sand-i2h i2h** immun immuno2am o2ample: ple:'' $hromo $hromogen genss yang yang tidak tidak #er-ar #er-arna na dihidrolisis oleh H67 terikat yang terkon(ugasi ke produk #er-arna #iru. Warna #iru men(adi kuning setelah menghentikan reaksi dengan asam sulfat. ;umlah intensitas -arna dapat diukur dan se#anding dengan (umlah antigen yang ditangkap dalam sumur sumur'' dan (umlah (umlahnya nya dalam dalam sampel sampel masing masing8ma 8masin sing. g. Sumur Sumur yang mengan mengandung dung sampel negatif untuk HBsAg tetap tidak #er-arna. COMPONENTS
7LATE
7late
)ode 1 %Sumur +:<=&
9i2ro-ell Strip mi2ro-eel kosong yang dipasang pada
> : +?+ : > 8 -eel
pegangan strip putih. 7iring disegel dalam kantong
per piring
alumin aluminium ium dengan dengan desika desikan. n. Setiap Setiap sumur sumur mengand mengandung ung anti#odi monoklonal yang reaktif terhadap HBsAg %anti8 HBs&. Strip mi2ro-ell dapat dipe2ahkan untuk digunakan se2ara se2ara terpis terpisah. ah. Letakka Letakkan n sumur sumur atau atau strip strip yang tidak tidak terpakai di dalam kantong plastik tertutup yang disegel #ersama dengan pengering dan kem#ali ke 8>
@
Setelah ter#uka' tusuk e selama / minggu pada 8> @ $.
$.
)@NT6@L %8&
NEATI!E NEATI!E $@NT6@L
)ode ode > %+:+ %+:+ml ml per per $airan kekuningan yang diisi dengan ial dengan tutup ial&
ulir hi(au. Sta#ilisasi protein8stra#ilized yang diu(i tidak reak reakti tiff untuk untuk HBsA HBsAg. g. Siap Siap digun digunak akan an sepe sepert rtii yang yang disediakan. Setelah ter#uka sta#il selama / minggu pada
)@NT6@L %C&
8> @ $. 7ENEN"ALIAN 7@SITI
)ode ode D %+:+ %+:+ml ml per per $airan #er-arna merah diisi dalam #otol dengan tutup #otol&
sekrup #er-arna hi(au. HBsAg dien2erkan dalam #uffer protein8sta#il. Siap digunakan seperti yang disediakan.
AB H67
Setelah ter#uka sta#il selama / minggu pada 8> @ $. H678$@N;3ATE
)ode ode = %+:D %+:Dml ml per per $airan #er-arna merah yang diisi dalam #otol dengan #otol&
tutup tutup sekrup sekrup #er-ar #er-arna na hi(au. hi(au. Horser Horseradi adish sh pero:i pero:idas dase8 e8 kon( kon(ug ugas asii
anti anti8H 8HBS BS..
Siap Siap
digu diguna naka kan n
sepe sepert rtii
yang yang
disediakan. Setelah ter#uka sta#il selama / minggu pada WASH B3 ,F
8> @ $. WASH B3E6
)ode )ode + %+:0, %+:0,ml ml per per $airan tak #er-arna diisi dengan 0 #otol #ening dengan #otol&
tutup tutup sekrup sekrup putih. putih. Buffer Buffer soloti solotion on yang mengand mengandung ung surf surfak akta tan. n. )ons )onsen entr trat at haru haruss dien2 dien2er erka kan n + hing hingga ga , dengan air suling ? deionisasi se#elum digunakan. Setelah dilarutkan' sta#il selama + minggu pada suhu kamar' atau
$H6@9 S@L A
selama minggu ketika di2elupkan pada 8> @ $. $H6@9@EN S@L3TI@N A
)ode ode %+:> %+:>ml ml per per $air $airan an tak tak #er-a #er-arn rnaa dala dalam m #otol #otol puti putih h denga dengan n tutu tutup p #otol&
sekrup sekrup #er-ar #er-arna na hi(au. hi(au. 3rea 3rea peroks peroksida idase se solito soliton. n. Siap Siap digunakan seperti yang disediakan. Setelah ter#uka sta#il selama / minggu pada 8> @ $.
$H6@9 S@L B
$H@6@9@EN S@L3TI@N B
)ode ode 0 %+:> %+:>ml ml per per $airan $airan tak #er-ar #er-arna na dalam dalam #otol #otol hitam hitam dengan dengan tutup tutup #otol&
sekrup sekrup hitam. hitam. Solusi T9B. Siap digunakan digunakan seperti yang disedi disediakan akan.. Setela Setelah h ter#uka ter#uka'' sta#il sta#il selama selama #ermin #erminggu ggu88
ST@7 S@L
minggu pada 8>G$. ST@7 S@L3TI@N 2airan tak #er-arna dalam #otol putih
)ode )ode / %+:> %+:> ml per deng dengan an tutu tutup p sekr sekrup up putih putih'' laru laruta tan n asam asam sulf sulfat at en2er en2er #otol&
%,'19 HS@/&. Siap digunakan seperti seperti yang disediakan. disediakan. Setelah ter#uka' ter#uka' sta#il selama / minggu pada 8>G$
TAS SEALITAS SEALITAS 7LASTI) untuk melampirkan strip yang tidak digunakan 7A)ET INSE6T TE97AT SA973L 7LAT 3ntu 3ntuk k menut menutupi upi piri piring ng sela selama ma inku inku#as #asii dan dan men2e men2ega gah h peng penguap uapan an atau atau kontaminasi dari sumur. sumur. BAHAN YANG DIPERLUKAN TAPI TIDAK DISEDIAKAN
Air suling atau deionisasi yang #aru' sarung tangan dan pe-aktu sekali pakai' -adah -adah lim#a lim#ah h yang tepat tepat untuk untuk materi material al yang yang #erpot #erpotens ensii terkont terkontami aminas nasi' i' sistem sistem pengeluaran dan ? atau pipet' tip pipet sekali pakai' (aringan penyerap atau handuk #ersih' inku#ator kering atau air mandi 0D +G$' pem#a2a pelat' pan(ang gelom#ang tungga tunggall /1, nm atau atau dual dual -aelen -aelength gth /1,?=0, /1,?=0, nm' mi2romi2ro-ell ell aspira aspirasi si ? siste sistem m pen2u2ian.
KOLEKSI SPESIMEN, TRANSPORTASI, TRANSPORTASI, DAN PENYIMPANAN
+. )oleksi )oleksi spesimen spesimen tidak tidak diperluka diperlukan n persiapan persiapan khusus khusus dari pasien. pasien. 9engumpu 9engumpulkan lkan spesim spesimen en sesuai sesuai dengan dengan prakti praktik k la#ora la#orator torium ium normal normal.. Baik Baik serum serum segar segar atau atau spesimen plasma dapat digunakan dengan pengu(ian ini. "arah yang dikumpulkan
oleh enipun2ture harus digunakan untuk menggumpal se2ara alami dan lengkap 8 serum ? plasma harus dipisahkan dari #ekuan sedini mungkin untuk menghindari hemolisis hemolisis 6B$. 7era-atan 7era-atan harus diam#il diam#il untuk memastikan memastikan #ah-a spesimen serum (elas dan tidak terkontaminasi oleh mikroorganisme. Setiap materi yang tampak mengartikulasikan dalam spesimen harus dilakukan dengan sentrifugasi #t di 0,,, 679 %putaran per menit& selama , menit pada suhu kamar atau dengan penyaringan. . Spesimen Spesimen plasma plasma yang dikumpulk dikumpulkan an ke dalam E"TA' E"TA' natrium natrium sitrat sitrat atau atau heparin dapat di2i2ipi' tetapi spesimen higly lipaemi2' ikterik' atau hemolitik tidak #oleh digunakan karena mereka dapat mem#erikan hasil yang salah dalam pengu(ian. "p tidak panas menonaktifkan spesimen. Ini dapat menye#a#kan 2eterloration dari analit target. Sampel dengan kontaminasi kontaminasi mikro#a mikro#a yang terlihat tidak #oleh digunakan. 0. WANTAI ANTAI HBsAg ELISA ditu( ditu(ukan ukan HANA HANA atau pengu(ian pengu(ian sampel serum atau atau plasma indiidu. ;angan gunakan gun akan pengu(ian untuk mengu(i sampel mayat' air liur' liur' air ken2ing atau 2airan tu#uh lainnya' atau darah yang dikumpulkan %2ampuran&. /. Transpo ransporta rtasi si dan penyimpa penyimpanan nanJJ simpan simpan spesimen spesimen pada 8>G$. 8>G$. spe2eime spe2eimens ns tidak tidak diperlukan untuk pengu(ian dalam -aktu + minggu harus disimpan #eku %8,G$ atau le#ih rendah& siklus freeze8tha- ganda harus dihindari. 3ntuk pengiriman' samp sampel el haru haruss dike dikema mass dan dan di#e di#eri ri la#e la#ell sesu sesuai ai denga dengan n pera peratu tura ran n loka lokall dan internasional yang ada untuk transportasi sampel klinis dan agen etologi.
PENYIMPANAN DAN STABILITAS
)omponen kit akan tetap sta#il selama tanggal kedalu-arsa yang tertera pada la#el la#el dan paket paket #ila #ila disimp disimpan an antara antara 8>G$' 8>G$' (angan (angan di#ekuk di#ekukan. an. 3ntuk 3ntuk men(am men(amin in kiner(a maksimum WANTAI HBsAg ELISA' selama penyimpanan' lindungi reagen dari kontaminasi dengan mikroorganisme atau #ahan kimia.
TINDAKAN PENCEGAHAN DAN KESELAMATAN
3NT3)
"I3NA)AN
HANA
"A6I
76@ESI@NAL
AN
BE6)3ALII)ASI Tes ELISA adalah -aktu dan suhu yang sensitif. 3ntuk menghindari hasil yang salah' ikuti langkah8langkah prosedur u(i dan (angan mengu#ahnya. +. ;angan ;angan menukar menukar reagen reagen dari #er#agai #er#agai ma2am ma2am atau menggun menggunakan akan reagen reagen dari kit lain yang tersedia se2ara komersial. )omponen8komponen kit ini se2ara tepat 2.
di2o2okkan untuk kiner(a optimal dari pengu(ian. 7astikan semua reagen #erada dalam aliditas yang ditun(ukkan pada kotak kit dan lot yang sama. ;angan pernah menggunakan perumpamaan di luar tanggal
kedalu-arsa yang ter2antum pada la#el atau kotak. 0. LAN LAN)A )AH H )A6E )A6ENA NA 8 LAN LAN)AH )AH )6ITIS )6ITIS #iar #iarka kan n reage reagen n dan dan spes spesim imen en men2apai suhu kamar %+>80, K $& se#elum digunakan. )o2ok reagen dengan 4.
lem#ut se#elum digunakan. )em#alilah ke 8>G$ segera setelah digunakan. unaka unakan n hanya hanya olume olume sampel sampel yang 2ukup 2ukup se#agai se#agaiman manaa ditun( ditun(ukk ukkan an dalam dalam langkah8langkah prosedur. )egagalan untuk melakukannya' dapat menye#a#kan
sensitiitas tes yang rendah. 1. ;angan ;angan menyent menyentuh uh #agian #agian luar #agian #agian luar luar sumur sumur sidik (ari (ari atau goresan goresan dapat mengganggu mengganggu pem#a2aan. pem#a2aan. Saat memerah hasilnya' hasilnya' pastikan pastikan #ah-a #uttom piring piring kering dan tidak ada gelem#ung udara di dalam sumur. =. ;angan #iarka #iarkan n mi2roplate mi2roplate -ells -ells mengerin mengering g setelah setelah langkah langkah pen2u2ian. pen2u2ian. Segeralah Segeralah lan(utkan lan(utkan ke langkah langkah #erikutnya. #erikutnya. Hindari pem#entukan gelem#ung udara saat menam#ahkan reagen. D. Hindar Hindarii u(i langkah8 langkah8lan langkah gkah interups interupsii lama. lama. aki akinka nkan n kondis kondisii ker(a ker(a yang yang sama sama untuk semua dengan #aik. >. )ali#r )ali#rasi asikan kan pipet se2ara se2ara teratur teratur untuk memasti memastikan kan keakurata keakuratan n sampel sampel ? reagen reagen yang dikeluarkan. unakan tip pipet pem#uangan yang #er#eda untuk setiap spesimen dan reagen untuk menghindari kontaminasi silang. 9. akinkan #ah-a suhu inku#asi adalah 0DG$ di dalam inku#ator. inku#ator. +,. Saat Saat menam# menam#ahka ahkan n spesim spesimen' en' (angan (angan menyen menyentuh tuh #agian #agian #a-ah #a-ah sumur sumur dengan dengan u(ung pipet.
++. Saat Saat menguku mengukurr dengan dengan pem#a2 pem#a2aa pelat' pelat' detenni detennine ne a#sor# a#sor#ans ansii pada /1,nm atau atau pada /1, ? =0,nm. Aktiitas tas enzima enzimatik tik dari dari H6782o H6782on(u n(ugat gatee mungki mungkin n terpen terpengar garuh uh dari dari de#u dan 12. Aktii #ahan kimia reaktif dan zat seperti natrium hipoklorit' asam' alkali' dll. Tidak mempengaruhi penetapan kadar dalam kehadiran zat8zat ini. +0. ;ika peralatan peralatan sepenuhnya sepenuhnya otomatis' otomatis' selama selama inku#asi' inku#asi' (angan tutup pelat dengan penutup pelat. 9enyadap sisa8sisa di dalam piring setelah di2u2i' (uga #isa dihilangkan. +/. Semua spesimen dari asal manusia dapat dianggap #erpotensi menular. menular. )epatuhan yang ketat terhadap peraturan L7 %ood La#oratory 7ra2ti2e& dapat memastikan keamanan pri#adi. +1. +1. 7E6I 7E6IN NA ATAN AN #aha #ahan n dari dari asal asal manu manusi siaa mungk mungkin in tela telah h digu diguna nakan kan dala dalam m persiapan kontrol negatif dari kit. Bahan8#ahan ini telah diu(i dengan alat tes dengan kiner(a yang diterima dan ditemukan negatif untuk anti#odi terhadap HI! H$! H$!' T7 dan dan HBsA HBsAg. g. Namu Namun' n' tida tidak k ada ada meto metode de anal analit itik ik yang yang dapa dapatt mengasumsikan #ah-a agen infeksi pada spesimen atau reagen tidak ada sama sekali. @leh karena itu' tangani pereaksi dan spesimen dengan sangat hati8hati seaka seakan n mamp mampu u menu menula lark rkan an penya penyaki kitt infe infeks ksi. i. Boi Boine ne #era #erasa sall seru serum m tela telah h digunakan untuk mensta#ilkan kontrol negatif ard positif. Boine serum al#umin %BSA& dan fetal 2alf sera %$S& #erasal dari he-an dari area geografis #e#as BSE ? TSE. +=. +=. ;anga ;angan n makan makan'' minu minum' m' mero meroko kok' k' atau atau oles oleska kan n kosme kosmeti tik k di la#o la#ora rato tori rium um pengu(ian. ;angan pernah menyemprotkan larutan melalui mulut. +D. Bahan Bahan kimia kimia harus harus ditangani ditangani dan di#uan di#uang g hanya hanya sesuai sesuai dengan L7 saat ini 18.
%ood La#oratory 7ra2ti2es& dan peraturan lokal atau nasional. 3(ung pipet' strip ial' dan kontainer spesimen harus dikumpulkan dan diautoklaf selama tidak kurang dari (am pada suhu ++G$ atau dio#ati dengan natrium hipok hipoklo lori ritt +,M +,M sela selama ma 0, meni menitt untu untuk k dide dideko kont ntam amin inas asii se#el se#elum um lang langkah kah pelepasan lainnya. Larutan yang mengandung natrium hipoklorit TI"A) 7E6N 7E6NAH AH diau diauto tokl klaf af.. )eam )eaman anan an #aha #ahan n Lem# Lem#ar ar data data %9S" %9S"S& S& ters tersed edia ia atas atas permintaan
+<. +<. Be#e Be#era rapa pa reage reagen n dapa dapatt menye menye#a #a#ka #kan n toks toksis isit itas as'' irra irradi dias asi' i' luka luka #akar #akar'' atau atau memiliki efek karsinogenik se#agai #ahan #aku. )ontak dengan kulit dan mukosa harus dihindari tetapi tidak ter#atas pada reagenst' stop solution' 2hromogens' dan #uffer pen2u2i. ,. ,. Laru Laruta tan n #erh #erhen enti ti ,'1 ,'1 9 HS@ HS@/ / adal adalah ah asam asam.. una unaka kan n deng dengan an hati hati8h 8hat ati. i. Bersihkan tumpahan segera dan #ersihkan dengan air (ika #ersentuhan dengan kulit atau mata. +. 7ro2linT9 7ro2linT9 0,, ,'+M digunakan se#agai penga-et' penga-et' dapat menye#a#kan sensasi sensasi kulit. Bersihkan tumpahan segera atau 2u2i dengan air (ika #ersentuhan dengan kulit atau mata. Indika Indikasi si kerusa kerusakan kan ketida ketidakst ksta#i a#ilan lan dari dari reagen reagen'' nilai nilai kontro kontroll posit positif if atau atau negati negatif' f' yang #erada #erada di luar luar rentan rentang g kendali kendali mutu mutu yang ditun( ditun(ukka ukkan' n' merupa merupakan kan indi indika kato torr kemung kemungki kina nan n keru kerusa saka kan n reage reagen n dan ? atau atau kesa kesala laha han n opera operato torr atau atau peralatan. "alam hal ha l demikian' hasilnya harus dianggap tidak alid dan d an sampel harus diu( diu(ii ulan ulang. g. "ala "alam m kasu kasuss hasi hasill yang yang keli keliru ru kons konsta tan n dan dan pem# pem#ur uruk ukan an atau atau ketidaksta#ilan yang ter#ukti dari reagen' segera ganti reagen dengan yang #aru atau hu#ungi dukungan teknis -antai untuk #antuan le#ih lan(ut.
76@SE"36 6eagen persiapanJ #iarkan reagen men2apai suhu kamar %+>80,G2&. periksa konsentrat konsentrat pem#asuhan 2u2ian untuk ke#eradaan kristal garam. ;ika kristal telah ter#entuk' selesaikan dengan peringatan pada kristal 0DG2 larut. "ilule the -ash #uffer %,F& seperti yang ditun(ukkan dalam instruksi untuk men2u2i. unakan air suling atau deionisasi dan hanya mem#ersihkan pem#uluh untuk men2airkan #uffer. Semua reagen lain siap digunakan seperti yang disediakan +. 7ersiapanJ 7ersiapanJ tandai tandai tiga tiga sumur se#agai se#agai kontrol kontrol negatif negatif %misaln %misalnya ya B+' $+' "+&' "+&' dua sumur se#agai kontrol positif %misalnya E+' +& dan satu sumur %misalnya A+' #aik sampel maupun H678kon(ugat harus ditam#ahkan ke dalam sumur kosong &.
;ika ;ika hasil hasilnya nya akan akan ditent ditentuka ukan n dengan dengan menggun menggunaka akan n pem#a2a pem#a2a pelat pelat pan(an pan(ang g gelo gelom# m#an ang g
gand ganda' a' pers persya yara rata tan n
untu untuk k
meng menggu guna naka kan n
sumu sumurr koso kosong ng #isa #isa
dihilangkan. unakan hanya (umlah strip yang diperlukan untuk tes. . 9enam 9enam#ah #ahka kan n samp sampel elJJ tam# tam#ahk ahkan an 1, l kont kontro roll posit positif if'' kontr kontrol ol nega negati tif' f' dan dan spesim spesimen en ke dalam dalam sumur sumur masing masing8ma 8masin sing g ke2uali ke2uali yang kosong' kosong' perhat perhatika ikanJ nJ gunakan u(ung pipet pem#uangan terpisah untuk setiap spesimen' kontrol negatif' kontrol positif untuk menghindari kontaminasi silang. $ampur dengan mengetuk piring dengan lem#ut. 0. 9enam#ahkan 9enam#ahkan H6782on( H6782on(ugateJ ugateJ tam#ahkan tam#ahkan 1, l H6782o(ugat H6782o(ugatee ke dalam dalam masing8 masing8 masing (uga ke2uali yang kosong dan aduk dengan mengetuk pelat dengan lem#ut /. Inku#as Inku#asiJ iJ di atas piring piring dengan dengan penutup penutup pelat pelat dan diinku#as diinku#asii selama selama =, menit menit pada suhu 0DG2. 1. 9en2u2 9en2u2iJ iJ pada akhir inku#as inku#asi' i' lepaskan lepaskan dan #uang penutup penutup pelat. pelat. $u2i $u2i masing masing88 masing dengan #aik 1 kali dengan pen2u2i pen2u2i yang dien2erkan. Setiap kali memungkinka memungkinkan n mi2ro-ell mi2ro-ell untuk #erendam #erendam selama selama 0,8=, detik. Setelah Setelah siklus siklus pendaratan terakhir' matikan piring ke kertas atau handuk doan dan ketuk untuk menghilangkan sisa8sisanya. =. 9e-ar 9e-arna naiJ iJ tam#a tam#ahka hkan n 1, l laru laruta tan n 2hro 2hromo moge gen n A dan dan 1, l 2hro 2hromo moge gen n B ke masing8masing lu#ang induksi kosong. Inku#asi lempeng di 0D G2 selama +1 menit menghindari 2ahaya. 6eaksi enzimatik mengu#ah larutan kromogen dan H6782on(ugate menghasilkan -arna #iru pada kontrol positif dan sampel positif HBsAg. D. 9engh 9enghen enti tika kan n reak reaksi siJJ mengg menggun unaka akan n pipet pipet mult multis isal alur uran an atau atau se2a se2ara ra manua manual' l' tam#ahkan 1, l larutan #erhenti ke setiap sumur dan aduk dengan lem#ut' -arna kuning kuning yang intens intensif if #erkem #erkem#ang #ang dalam dalam kontrol kontrol positi positiff dan HBsAg' HBsAg' sampel sampel sumur positif >. 9engukur 9engukur a#sor#ansiJ a#sor#ansiJ kali#rasi kali#rasikan kan pem#a2a pem#a2a pelat dengan dengan sumur sumur kosong kosong dan #a2a #a2a a#sor#ansi pada /1, nm. ;ika instrumen filter ganda digunakan' atur pan(ang
gelom#ang referensi pada =0, nm. Hitung nilai 2ut8off dan ealuasi hasilnya. %$atatanJ #a2a a#sor#ansi dalam +, menit setelah menghentikan reaksi& INST63)SI 3NT3) 9EN$3$I +. 7rosed 7rosedur ur pen2u2ian pen2u2ian yang #aik sangat sangat penting penting untuk untuk mendapa mendapatka tkan n data data analit analitis is yang tepat dan tepat . @leh @leh karena karena itu' direkom direkomend endasi asikan kan untuk menggunak menggunakan an mesin pen2u2i pen2u2i piring piring ELISA #erkualitas #aik' yang dipelihara pada tingkat kiner(a pen2u2ian ter#aik. Se2ara umum' tidak kurang dari 1 siklus pen2u2ian otomatis se#esar 01,8/,, Ol ? -oll 2ukup untuk menghindari reaksi positif palsu dan latar #elakang yang tinggi. 0. 3ntuk menghin menghindari dari kontami kontaminasi nasi silang silang dari dari lempeng lempeng dengan spesim spesimen en atau H678 H678 kon(ugat' setelah inku#asi (angan mem#uang isi dari sumur tetapi #iarkan mesin pen2u2i piring menghirupnya se2ara otomatis. /. akinkan akinkan #ah-a saluran saluran pen2u2i pen2u2i 2airan 2airan pen2u2i piring piring mikro mikro tidak terhalang terhalangii atau terkontami terkontaminasi nasi dan olume pen2u2ian pen2u2ian #ulus yang 2ukup di#erikan di#erikan setiap setiap kali ke dalam sumur 1. "alam "alam kasus pen2u2 pen2u2ian ian manual' manual' kami menyar menyaranka ankan n untuk melakuka melakukan n 1 siklus siklus pen2u2ian' mengeluarkan 01,8/,, 01, 8/,, Ol ? -ell dan menghirup 2airan terse#ut selama 1 kali. kali. ;ika ;ika hasi hasill #uru #uruk k %lat %latar ar #elak #elakan ang g ting tinggi gi&& diam diamat ati' i' ting tingka katk tkan an sikl siklus us pen2u2ian atau perendaman per sumur =. "alam "alam hal apapun' apapun' 2airan 2airan yang yang disedot disedot keluar keluar strip strip harus diperl diperlaku akukan kan dengan dengan larutan sodium hypo2hlorite pada konsentrasi akhir '1M selama / (am' se#elum mereka ter#uang dengan 2ara yang tepat. D. 7em#as 7em#asuh uh pen2u2i pen2u2i yang pekat harus harus dien2erk dien2erkan an +J , se#elum se#elum digunakan digunakan.. ;ika kurang dari seluruh piring digunakan' propare olume proporsional larutan
KONTROL KUALITAS KUALITAS DAN PERHITUNGAN HASIL
Setiap lempeng harus dipertim#angkan se2ara terpisah ketika menghitung dan menafsirkan hasil pengu(ian' terlepas dari (umlah lempeng #ersamaan. Hasilnya dihitung dengan menghu#ungkan masing8masing spesimen serapan %A& nilai ke nilai
2ut8off %$.@.& dari pelat. ;ika pem#a2aan 2ut8off didasarkan pada pem#a2a plat filter tunggal' hasilnya harus dihitung dengan mengurangkan nilai kosong A dari nilai laporan 2etak spesimen dan kontrol. ;ika pem#a2aan didasarkan pada pem#a2a plat filter ganda' (angan kurangi nilai kosong A dari nilai laporan 2etak.
SPESIMEN DAN KONTROL
7erhitungan nilai $ut8off %$.@.& P N2 Q .+ %N2 C nilai a#sor#ansi rata8rata untuk tiga kontrol negatif&. 7entingJ (ika nilai rata8rata A dari kontrol negatif le#ih rendah dari& .,1' am#illah se#agai ,',1.
)ontrol kualitas %u(i alidasi&J hasil tes alid (ika kriteria kontrol kualitas terpenuhi. "ian(u "ian(urka rkan n agar agar setiap setiap la#ola la#olator torium ium harus harus mem#ua mem#uatt sistem sistem kualita kualitass yang yang sesuai sesuai dengan #ahan kontrol kualitas similarto atau se2ara idenikal dengan sampel pasien yang dianalisis.
Nilai dari sumur kosong' yang hanya #erisi $hromogen dan solusi #erhenti' adalah R,',>, pada /1, nm.
Nilai A dari kontrol positif harus ,'>,, pada /1,?=0, nm atau pada /1, nm setelah #lanking.
Nilai A dari kontrol negatif harus ,'+,, pada /1, ? =0,nm atau pada /1,nm setelah #lanking.
;ika salah satu dari kontrol Negatif Se#uah nilai tidak memenuhi kriteria kontrol )ualitas' itu harus di#uang dan nilai rata8rata dihitung lagi menggunakan dua nilai yang yang ters tersis isa. a. ;ika ;ika le#i le#ih h dari dari satu satu kont kontro roll Nega Negati tiff Suat Suatu u nila nilaii tida tidak k meme memenu nuhi hi spesifikasi )ontrol )ualitas 6nge' pengu(ian tidak alid dan harus diulang.
$ontohJ )ontrol kualitas
Blank kosong NilaiJ A+ P ,',1 pada /1,nm %$atatanJ #lanking hanya diperlukan saat mem#a2a dengan filter tunggal pada /1,nm&. Tidak adaJ
B+
$+
"+
)ontrol negatif Nilai setelah pengosonganJ
,',,
,',+
,',+=
Tidak adaJ
E+
+
Nilai kontrol positif A setelah setelah mengosongkanJ
./+
.0=<
Semua nilai kontrol A #erada dalam rentang kendali mutu yang ditentukan 7erhitungan 7erhitungan N2J
P ,.,+= %N2 le#ih rendah dari ,',1' (adi am#illah am#illah
se#agai ,',1& 7erhitungan 2ut8offJ %$.@& P ,',1 Q '+ P ,'+,1
INTERPRETASI INTERPRETASI HASIL
Hasil negatif %A ? $. R+&. Spesimen yang mem#erikan a#sor#ansi kurang dari nilai 2ut8of 2ut8offf adalah adalah negati negatiff untuk untuk pengu( pengu(ian ian ini' ini' yang menun( menun(ukka ukkan n #ah-a #ah-a untuk untuk antigen irus hepatitis B sura2e telah dideteksi dengan WANTAI HBsAg ELIS' oleh karena itu pasien mungkin tidak menular dan tidak ada tanda8tanda infeksi.
Hasil positif %A ? $.@ +&J spesimen mem#erikan a#sor#ansi sama atau le#ih #esar dari nilai 2uy8off dianggap a-alnya reaktif' yang menun(ukkan #ah-a antige antigen n permuk permukaan aan irus irus hepati hepatitis tis B mungki mungkin n telah telah terdet terdeteks eksii menggun menggunakan akan WANTAI ANTAI H#sAg ELISA. Semua spesimen yang a-alnya a -alnya reaktif harus diu(i ulang dalam duplikat menggunakan WANTAI H#sAg ELISA se#elum interpretasi hasil u(i akhir. Spesimen yang #erulang reaktif dapat dianggap positif untuk antigen permukaan irus hepatitis B dengan WANT WANTAI AI H#sAg ELISA.
Borderline %A ? $.@ P ,<8+.+&J spesimen dengan a#sor#ansi untuk rasio 2ut8off antara ,'< dan +'+ dianggap #atas dan pengu(ian ulang dari spesimen ini dalam duplikat diperlukan untuk mengkonfirmasi hasil a-al.
Tindak lan(ut' konfirmasi dan tam#ahan men2i2ipi spesimen positif dengan sistem sistem analit analitik ik lainnya lainnya %misal %misalnya nya 7$6& 7$6& diperl diperlukan ukan.. "iagnos "iagnosis is klinis klinis tidak tidak #oleh #oleh ditetapkan #erdasarkan hasil tes tunggal.' Harus mengintegrasikan data dan temuan klinis dan la#olatorium lainnya.
HASIL AWAL INTERPRETASI DAN IKUTI –UP SEMUA REAKTIF INOVASI ATAU SAMPEL BORDERLINE
3langi dalam rangkap dua Interpretasi
IN" P tidak dapat ditafsirkan
;ika' setelah pengu(ian ulang sampel yang pada a-alnya reaktif' kedua sumur adalah hasil negatif %A ? $.@ R,.<&' sampel ini harus dianggap se#agai positif yang tidak dapat ditim#ang ulang %atau positif palsu& dan di2atat se#agai negatif. Seperti halnya #anyak tes ELISA yang sangat sensitif' hasil positif palsu dapat ter(adi karena alasan hemat' yang se#agian #esar terkait dengan' tetapi tidak ter#atas' langkah men2u2i yang tidak memadai. 3ntuk informasi le#ih lan(ut mengenai -antai ELISA 7eme2ahan 9asalah' silakan lihat 4ELISA dan panduan mengatasi masalah*.
;ika setelah pengu(ian ulang dalam rangkap dua' satu atau kedua sumur adalah hasil positif' hasil akhir dari tes ELISA ini harus di2atat se#agai #erulang kali reaktif. reaktif. Spesimen yang #erulang #erulang reaktif reaktif dapat dianggap positif untuk antigen antigen permukaan irus hepatitis B dan oleh karena itu pasien mungkin terinfeksi dengan HB! dan unit darah harus di#uang.
Setelah mengu(i ulang indupli2ates' sampel dengan nilai dekat dengan nilai $ut8 off harus ditafsirkan dengan 2oution dan dianggap se#agai *#orderline* zona sampel' atau tidak dapat ditafsirkan untuk -aktu pengu(ian.
KARAKTERISTIK KINERJA Spes Spesif ifis isit itas as
klin klinis is: :
Spes Spesif ifit itas as
klin klinis is
dari dari
ditentu ditentukan kan oleh panel
sampel sampel yang diperoleh diperoleh dari
sehat sehat
yang yang
dan dan
beru berula lang ng
300 300 yang yang
pasie pasien n
diko dikonf nfir irma masi si
tidak tidak
terd terdiag iagnos nosis is. .
posi positi tif f
deng dengan an
peme pemeri riks ksaa aan n 2500 2500 Sampe Sampel l
uji uji
donor donor dan dan
refe refere rens nsi i
ini ini darah darah
sampe sampel l tida tidak k
dimasukkan dalam perhitungan spesifisitas.
;umlah "onatur 0 pasien
Sampel 1,, 0,,
8
C
dikonf onfirmasi
kekhususan
positif
///
positif 1=
10
salah <<.>>M
D0
D
=
<<'=/M
+ )epekaan klinis . Sensitiitas klinis dari -antai HBsAg ELISA dihitung oleh panel sampel yang diperoleh dari =D, hepatitis dengan ri-ayat klinis yang #aik #erdasarkan penilaian referensi untuk deleksi H#sAg' H#eAg' anti8H#e' dan anti8HB2' Tes Tes HBsAg ELISA ELISA #erli #erlisen sensi si diguna digunakan kan se#agai se#agai se#uah se#uah u(i 2omfir 2omfirmat matory ory.. Hasil Hasil ealuas ealuasii di#eri di#erikan kan di #a-ah #a-ah ini. ini. Hasil Hasil yang yang dipero diperoleh leh di la#ora la#orator torium ium indii indiidu du mungki mungkin n #er#eda. Spesifisitas Anality2alJ Tidak ada reaktiitas silang yang diamati dengan sampel dari pasien yang terinfeksi HA!' H$!' HI!' $9! dan T7. Tidak ada gangguan dari faktor rheumatoid hingga ,,, 3 ? ml yang diamati. Tidak ada efek kait dosis tinggi hingga konsentrasi HBsAg ,,,,,ng ? ml yang diamati selama pengu(ian klinis. Spesimen rosen telah diu(i (uga untuk memeriksa gangguan karena pengumpulan dan kekokohan Sensitiitas titik akhir analitis %#atas deteksi le#ih rendah&J
Sensitiit Sensitiitas as pengu(ian pengu(ian telah dihitung dengan menggunakan menggunakan standar referensi referensi yang di#erikan dari la#oratorium ru(ukan untuk produk imunologi di #a-ah kementerian kesehatan' $ina. Alat tes ini menun(ukkan sensitiitas pada 2ut8off ,'1 ng ? ml %adr& dan ,'1 ng ? ml %ad-' %ad-' ay&
BATASAN
Hasi Hasill
pos positi itif
har harus diko dikonf nfiirmas rmasii
deng dengan an
metod etodee
lain ain
yang yang
terse ersedi diaa
dan dan
diinterpretasikan #ersama dengan informasi klinis pasien. Antigen mungkin tidak terdeteksi selama tahap a-al penyakit. @leh karena itu' hasil negati negatiff yang dipero diperoleh leh dengan dengan WANTAI ANTAI HBsAg HBsAg ELISA ELISA hanya hanya indika indikasi si #ah-a #ah-a sampel tidak mengandung tingkat antigen permukaan irus hepatitis B yang dapat didet didetek eksi si dan dan seti setiap ap hasi hasill nega negati tiff tida tidak k #oleh #oleh dian diangg ggap ap se#a se#agai gai #ukti #ukti yang yang meyaki meyakinkan nkan #ah-a #ah-a indii indiidu du terse# terse#ut ut tidak tidak terinf terinfeks eksii HB! atau atau unit unit darah darah tidak tidak terinfeksi BH!. ;ika' setelah pengu(ian ulang sampel yang pada a-alnya reaktif' hasil u(i negatif' sampel ini harus dianggap tidak dapat diulang %positif palsu& dan ditafsirkan se#agai negati negatif. f. Seperti Seperti #anyak #anyak tes ELISA ELISA yang yang sangat sangat sensit sensitif' if' hasil hasil posit positif if palsu palsu dapat dapat ter(adi ter(adi duo tu #e#erapa alasan' yang se#agian se#agian #esar terkait terkait tetapi tidak tidak ter#atas ter#atas pada langka langkah h pen2u2i pen2u2ian an yang yang tidak tidak memada memadai. i. 3ntuk 3ntuk inform informasi asi le#ih le#ih lan(ut lan(ut mengen mengenai ai -antai -antai ELISA ELISA trou#l trou#lesh eshoot oothin hing' g' silaka silakan n lihat lihat *ELISA *ELISAss dan peme2a peme2ah h masala masalah* h* -antai' atau hu#ungi dukungan teknis -antai untuk #antuan le#ih lan(ut. )esa )esala laha han n assa assay y yang yang pali paling ng umum umum adala adalahJ hJ meng menggun gunak akan an kit kit di luar luar tang tangga gall kadalu-arsa' prosedur pen2u2ian yang #uruk' reagen yang terkontaminasi' operasi yang yang tidak tidak sesuai sesuai dengan dengan perala peralatan tan la#ora la#orator torium ium'' kesala kesalahan han -aktu' -aktu' penggun penggunaan aan spesimen atau reagen yang sangat mengalami hemolisis' operasi yang tidak sesuai dengan peralatan la#oratorium' la#oratorium' kesalahan -aktu' penggunaan spesimen yang sangat mengalami hemolisis atau spesimen yang mengandung fi#rin' spesimen serum yang tidak digumpalkan. 7realensi marker akan memengaruhi nilai prediksi pengu(ian.
3(i ini tidak dapat digunakan untuk mengu(i mengu(i plasma plasma yang dikumpulkan %2ampuran&. %2ampuran&. WANTAI HBsAg ELISA telah diealuasi hanya dengan spesimen serum atau plasma indiidu. WANTAI HBsAg ELISA adalah u(i kualitatif dan hasilnya tidak dapat digunakan untuk mengukur konsensus antigen.
"ATA6 ISI
+. Steens Steens'' $. E.' 7. E Taylo Taylorr' dan 9. ;. Tong. +<>>. +<>>. Hepati Hepatiti tiss irus irus dan penyaki penyakitt hati. Alam 6. 6iss' Ne- ork' N.. +/. Steens' $. E.' 7. E Taylor' dan 9. ;. Tong' 7.T.Toy' .N.!yas' 7' !.Nair . ;..W;..W-ies iessma sman' n' dan S. )rugm )rugman. an. +<>D. +<>D. !aksin aksin hepati hepatitis tis B ragi8r ragi8reko ekom#i m#inan. nan. )hasiat dengan hepatitis B imunue glu#olin dalam pen2egahan perinatal hepatitis B. 7enularan irus. ;A9A 1DJ =+8=+=. +/0. Steens' $. E.' 7 Toy 7. E Taylor' T. Lee' dan H.. 9enyalak. +<<. 7rospek untuk pengendalian infeksi irus hepatitis BJ implikasi aksinasi masa kanak8kanak dan perlindungan (angka pan(ang. 7ediatri2s <, %suppl.&J +D,8+D0 0. Hurie' Hurie' 9.B.' E.E.9as E.E.9ast' t' dan ;.7. ;.7. "ais "ais +<<. Horisont Horisontal al penularan penularan infeksi infeksi irus hepatitis B ke anak8anak kelahiran AS dari pengungsi Hmong. 7edia2tri2s >,. !aksin !aksin Hepatitis BJ demonstrasi demonstrasi keman(uran keman(uran dalam u(i 2o#a terkontrol pada populasi populasi #erisiko #erisiko tinggi di AS. N. Engl. ;. 9ed. 0,0J >008>/+. 1. Bhatnagar Bhatnagar'' 7. 7. ).' E. 7apas' 7apas' H. E. Blum. ". 6. 9ili2h' 9ili2h' "' Nite2ki Nite2ki'' 9.;. )arels' )arels' dan . N. !yas. +<>. 6espon imun terhadap analog peptida sintetis dari antigen permukaan hepatitis B spesifik untuk determinan. 7ro2. Nati.A2ad. S2i. 3SA 3S A D
