Hbsag Elisa

Laporan Imunoserologi

Pemeriksaan HBaAg Metode ELISA

Oleh

:

Kelompok 3 Luh Put Putu u Suc Suciiana Ca Candra Dewi

P07 P073!0 !03037

"ust#ari $adurani "iri

P073!0303%

&i 'ade (uni (uni )risna )risna Dewi

P073!030!

&i Putu 'eri Kusumawati

P073!030!3

I Putu *andem +rista Putra

P073!030!,

"st "st +# +#u )a )ari Di-a Di-a Prad Pradn# n#aa Dewi Dewi

P07 P073! 3!0 030 30!7 !7

'arissah )hamrin

P073!030!%

K.'.&)./I+& K.S.+)+& /1I POLI).K&IK K.S.+)+& D.&P+S+/ $2/2S+& +&+LIS K.S.+) K .S.+)+& +& 0,

Titles you can't find anywhere else

Try Scribd FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions! Start Free Trial Cancel Anytime.





Pemeriksaan HBsAg metode ELISA

ari ari4t 4tang anggal gal

: Sa5t Sa5tu6 u6 , Des Desem em5e 5err 0, 0,

I. Tujuan

2ntuk menentukan secara kuantitati adan#a epatitis * Surace +ntigen 8*S+g9 di dalam serum atau plasma pasien II. Metode ode

'etode #ang digunakan #aitu .LIS+ 8 en#me;linked immunosor5ent assa#9 III.Prinsip

+nti5o +nti5od# d# ganda ganda idase 8/P9 se5agai larutan kon?ugat1 Selama pemeriksaan6 adan#a *s+g dalam spesimen akan 5ereaksi dengan anti5o anti5odi;a di;anti nti5od 5odii terse5 terse5ut ut untuk untuk mem5en mem5entuk tuk komple kompleks ks imun imun

anti5odi; /P=1 Setelah materi #ang tidak terikat tercuci selama pemeriksaan6 su5strat ditam5ahkan ditam5ahkan untuk menun?ukkan menun?ukkan hasil tes1 'unculn#a 'unculn#a warna 5iru di sumur sumur mikrotite mikrotiter r mengindikasikan *s+g reakti1 )idak adan#a warna menun?ukkan hasil non reakti di spesimen1 IV. IV. Dasa Dasarr teo teori ri

Pen#akit hepatitis * dise5a5kan oleh ineksi -irus hepatitis * 8@*91 @irus ini men#erang sel hati dengan melekat pada reseptor spesiik di mem5ran hepatosit dan melakukan penetrasi ke dalam sitoplasma hepar1 Per?alanan klinis dan diagnosis ineksi @* @* dita ditand ndai ai denga dengan n peme pemeri riks ksaa aan n sero serolo logi gi terh terhad adap ap anti antige gen n dan dan anti anti5od 5odii #ang #ang ter5entuk ter5entuk dan 5eredar 5eredar di sirkulasi sirkulasi11 Penanda serologi #ang pertama pertama kali dapat dideteksi dideteksi #aitu *s+g #ang muncul  minggu se5elum tim5ul ge?ala1 8/ina6 dkk16 00A9





metode .n#me Immunoassa# 8.I+96 .n#me Linked Immunoassa# 8.LIS+96 .n#me Linked Blouroscent +ssa# 8.LB+96 Immunochromatograph# )est 8IC)9 atau rapid test6 /adio /adio Immunoa Immunoassa ssa# # 8/I+96 8/I+96 dan Chemilu Chemilumi mines nescent cent 'icrop 'icropart articl iclee Immunoa Immunoassa ssa# # 8C'I+91 Sedangkan untuk mendeteksi D&+ -irus dapat digunakan PC/1 8/ina6 dkk16 00A9 .LIS+ adalah suatu singkatan 5ahasa Inggris #ang dise5ut dengan : 8.n#me; linked linked immunosor immunosor5ent 5ent assa#9 assa#9 atau penetapan kadar immunosor5en immunosor5en taut;enim taut;enim #ang merupakan suatu u?i serologis1 )eknik .LIS+ pertama kali diperkenalkan pada tahun %7 oleh Peter Perlmann dan .-a .ng-all1 'enggunakan teknik .LIS+ dalam 5idang imunologi imunologi untuk menganalis menganalisis is interaksi interaksi antara antigen dan anti5odi di dalam suatu sampel6 sampel6 dimana dimana intera interaksi ksi terse5 terse5ut ut ditand ditandai ai dengan dengan menggu menggunaka nakan n suatu suatu enim enim #ang #ang 5erungsi se5agai pelapor4signal1 Selan?utn#a digunakan se5agai u?i kualitati untuk mengetahui ke5eradaan suatu anti5odi4antigen dengan menggunakan anti5odi4antigen spesiik1 )eknik .LIS+ ?uga dapat diaplikasikan dalam u?i kuantitati untuk mengukur kada kadarr

ant anti5odi 5odi4a 4ant ntiigen gen

spekt pektro rootom otomet eter er

dan dan

#ang ang deng dengan an

diu? diu?ii car cara

deng dengan an

mengg enggun unak akan an

menen enenttukan ukan

?um ?umlah

alat alat

5ant 5antu u

pena penam m5aha 5ahan n

5eru 5erupa pa kada kadar r

anti5odi4antigen6 sehingga dapat di5uat suatu kur-a standard antara kadar anti5od# atau antigen #ang dapat dihitung 5erdasarkan a5sor5ansin#a18 Ichwan6 0!9 .LIS+ dianggap dianggap pemeriksaan pemeriksaan #ang memiliki memiliki spesiit spesiitas as dan sensitii sensitiitas tas #ang tinggi tinggi #ang #ang mampu mampu menun? menun?ang ang diagnos diagnosaa klinis klinis hepati hepatitis tis *1 .LIS+ .LIS+ 8 .I+ 9 di5agi di5agi men?adi dua macam #aitu homogenous .I+ dan heterogenous .I+1 omogenous .I+ 5erguna untuk pemeriksaan 5ahan o5at;o5atan6 hormon dan lain;lain1 Sedangkan heterogenous .I+ 5erguna untuk pemeriksaan 5ahan #ang memiliki 5erat molekul 5esar misaln#a misaln#a antigen dan anti5odi1 anti5odi1 Pemeriksaan Pemeriksaan parameter parameter petanda serologis serologis hepatitis * termasuk dalam kelompok kedua #aitu heterogenous .I+1 +da tiga tahapan penting dalam u?i .LIS+ #aitu : 1 Pela Pelapi pisa san n 8 coat coatin ing g 9 denga dengan n anti antige gen n atau atau anti5od anti5odii pada pada plate plate 8 Phas Phasee padat padat 91 Pelapisan dengan dengan antigen untuk penentuan anti5odi untuk penentuan antigen1





31 Penam5ahan Penam5ahan detektor detektor #ang 5erungsi 5erungsi untuk untuk mendeteks mendeteksii ikatan +g +g  +5 #ang #ang ter?adi1 ter?adi1 +da dua detektor #ang digunakan #aitu : a1 Penam5ahan

kon?ugat

#aitu

antigen

atau

anti5odi

5erla5el enim6 misaln#a orse /adish Pero>idase

#ang

8 /PO91 +lkaline

Phosphatase62rease6"lukose;O>idase8"OP9 dan lain;lain1 51 Penam5ahan Penam5ah an warna warna

pada

su5strat reaksi1 reaksi1

#ang 'isaln# 'isaln#aa

5erungsi )'*

8)et 8)etra ra

mem5eri

peru5ahan

'eth#l 'eth#l *enidi *enidine6 ne6 O;

)oluidine6 )oluidine6 OPD6 +*)S dan lain;lain1 .LIS .LIS+ + send sendir irii terd terdir irii dari dari 5e5e 5e5era rapa pa macam macam meto metode de dian dianta tara ran# n#aa .LIS .LIS+ + kompetiti kompetiti66 .LIS+ dou5le dou5le sandwich sandwich antigen antigen atau anti5odi dan indirect indirect .LIS+ #ang ketigan#a memiliki prinsip dasar reaksi #ang sama #aitu reaksi +g ; +51 8Baial6 09 V.

Alat dan baan an

a1 +lat 1 Sumu Sumurr mik mikro roti tite ter r 1 'ikro kropipet 31 )ip !1 Inku5at 5ator ,1 .lis .lisaa reade eader r A1 .lis .lisaa wash washer er 51 Sampel 1 Sampel Sampel seru serum m pasie pasien n

c1 /eagen 1 .n# .n#m m Con? Con?ug ugat atee 1 Posi Positi ti Cont Contro roll 31 &ega &egati ti Cont Contro roll !1 Samp Sampel el dill dillue uent nt ,1 Color + dan * A1 Stop Stop Solu Soluttion 71 ash *u *uer

VI. !ara "erja a1 Pem5 Pem5uat uatan an a ash *u *uer er 1 a ash sh 5uer 5uer pekat pekat dicampurkan dicampurkan dengan dengan aEuadest aEuadest per5andi per5andingan ngan 8:%9 8:%9 1 Campuran Campuran #ang #ang sudah ?adi disimpan disimpan pada suhu ruang selam selamaa seminggu seminggu 51 Prosedur Pemeriksaan 1 Semua reagen dan specim specimen en dikondis dikondisikan ikan pada suhu ruang 1 Siapkan Siapkan nomor #ang #ang di5utuhkan di5utuhkan untuk untuk sumur6 sumur6 #ang #ang terdiri terdiri dari  sumur 5lanko6 5lanko6

 sumur control positi6  sumur untuk control negati dan  sumur untuk setiap specimen1 )ulis nomor seri untuk control dan specimen pada kolom1 31 Spesimen Spesimen diluents diluents ditam5ahka ditam5ahkan n se5an#ak se5an#ak 0Fl pada pada masing;ma masing;masing sing sumur sumur !1 Spesimen6 Spesimen6 control control negati-e6 negati-e6 control control positi positi ditam5ahka ditam5ahkan n se5an#ak se5an#ak 00Fl sesuai sesuai





%1 Setiap Setiap sumur sumur dicuci dicuci dengan wash 5uer 5uer dengan dengan prosedur prosedur : Penc Pencuci ucian an #ang #ang dila dilaku kuka kan n haru haruss sesu sesuai ai denga dengan n petu petun? n?uk uk apa5i apa5ila la ada • •

pencucian #ang tidak sempurna maka akan mempengaruhi hasil1 Semua isi sumur dimasukkan pada la5u cuci1 Kemudian ditam5hakan wash

5uer 3,04le5ih1 Pastikan tidak ada cairan di dalam da lam tip dan setelah pemipetan terakhir1 • 01 Color +  * dimasukkan pada setiap sumur sumur se5an#ak ,0Fl 1 Plate diinku5asi diinku5asi pada water5ath4inc water5ath4incu5ator u5ator 37o G 30 menit 1 entikan reaksi dengan penam5ahan penam5ahan ,0Fl stopping solotion solotion disetiap sumur 31 +5sor5ansi setiap sumur sumur di5aca pada J !,0nm  J A30nm !1 Perhit Perhitung ungan an Single wa-e length 8J!,0nm9 • OD  OD!,0  OD*C!,0  sampel  control •

Dual wa-e length 8JA30nm9 OD  OD!,04A30

VII. VII. Interpr Interpreta etasi si asil asil Hasil pemeriksaan #alid jika $ 1 &ila &ilaii OD 5lan 5lanko ko kura kurang ng dari dari 010 0100 0 8 sumu sumurr dari dari kont kontro roll 5lan 5lanko ko han# han#aa 5eri 5erisi si

kromogen dan stop solution9 1 &ilai &ilai OD kontro kontro negat negati i harus harus sama sama atau atau kurang kurang dari dari 8≤9 01001 Dieliminasi kontrol negati dengan nilai OD le5ih 5esar dari 8>9 01001 $ika  nilai keluar dari 5atas6 pemeriksaan in-alid dan harus di ulangi1 31 &ilai &ilai OD kontro kontroll posit positi i sama sama atau atau le5ih le5ih 5esar 5esar 8≥9 01,001 $ika nilai OD kurang dari 01,006 pemeriksaan in-alid dan harus di ulangi1 Peritungan kontrol $ &ilai cut;o : CO &C> 1 6 &C> : nilai a5sor5ansi rata;rata kontrol negati-e 8?ika &C> ≤ 010, 6 &C> harus dihitung 010,9 Interpretasi asil $ 1 Spesimen Spesimen dengan dengan a5sor5ansi a5sor5ansi kurang kurang dari 89 89 nilai nilai cut;o cut;o din#ata din#atakan kan negati1 negati1 1 Spes Spesim imen en deng dengan an nila nilaii a5so a5sor5 r5ans ansii le5i le5ih h 5esa 5esarr atau atau sama sama deng dengan an 8≥9 nilai cut;o din#atakan positi1





"am5ar sumur mikrotiter 



+

*

C

D

.

B

"



asil pemeriksaan *s+g .lisa Sumur

+ * C D . B "   " B .

&ama sampel

*lanko Kontrol positi Kontrol positi Kontrol negati Kontrol negati &i &#oman Lasia

Suhaili

Indra Pradani Sulaiman

Kode sampel4$enis kelamin ; ; ; ; ; 4P

asil pemeriksaan

334L

31A3

013! 317 1%%A 01A0 0 1! 7 31A%7

1A

Pem5acaan a5sor5ansi dilakukan pada single wa-elength #aitu !,0nm sehingga : • &ilai OD kontrol positi

•

a1 OD  OD!,0  OD*C!,0  317  013!  310%3

51 OD  OD!,0  OD*C!,0  1%%A  013!  1HA

&ilai OD kontrol negati a1 OD  OD!,0  OD*C!,0  317  013!  310%3

51 OD  OD!,0  OD*C!,0  1%%A  013!  1HA







kontami kontaminas nasii pada saat saat pencuc pencucian ian dengan dengan .lisa .lisa washer washer sehing sehingga ga pemeri pemeriksa ksaan an tidak tidak diulang dan dianggap -alid1 *erikut merupakan perhitungan kontrol : Cut;o • &C>  CO  &C> 1 6  01,3,, 1 6  1!,, *erdasarkan *erdasarkan nilai cut;o cut;o 6 nilai sampel #ang diperiksa diperiksa dari B sampai . mele5ihi mele5ihi nilai cut;o sehingga sampel terse5ut din#atakan positi atau reakti terdapat *s+g1 I%. Pembaasan Pembaasan %. "e "esi simp mpul ulan an *erdasarkan *erdasarkan pemeriksaan pemeriksaan *s+g metode .lisa .lisa terhadap terhadap sampel sampel MM1 Didapatkan

hasil positi terdapat *s+g1 %I. Da&tar pustaka

Ichwan Ichwan11 0!1 0!1 Teknik Teknik Elisa Pemeriksaan Pemeriksaan Kuantitat Kuantitatif if Mannan Binding Binding Lectin (MBL) Pada

Plasma

Darah1 Darah1

Online1

http:44openwetware1org4images4archi-e4a4aa40!0,3H3N )eknik.lisa8Ichwan+lams#ahLu5is91pd /ina6 dkk16 00A1 Faktor 00A1 Faktor Risiko Heatitis B ada Tenaga Tenaga Kesehatan Kota Pekan!aru" Online1 http:44?ournal1k1unpad1ac1id4inde>1php4mk54article4-iewBile4!,4pd07 Baial1

01 Per!andingan

Pre#alensi H!sag Positif Pada Penderita

$ang $ang

Hbsag Elisa

Recommend Documents