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MICROBIOLOGÍA Tinción Ziehl Neelsen

ESTUDIANTE AGOSTO, 2014

OBJETIVOS

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Identifica las Bacterias Alcohol Acido resistentes (BAAR), como las del genero mycobacterium, utilizando la tinción de Ziehl-Neelsen.

INTRODUCCIÓN La tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica t écnica de tinción diferencial que se basa en que las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos(ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-acido, despuésde la tinción con colorantes básicos. Las micobacterias absorben loscolorantes solo muy lentamente debido a la elevada  proporción de ceras ceras ylípidos en la pared pared celular. Para acelerar la absorción del colorante fuscina fuscina y así la formación del complejo micolatofusina en la pared celular, se calientala solución de fuscina fenicada aplicada sobre el preparado normalmentehasta la formación de vapores. Una vez que las micobacterias han absorbidoel colorante, difícilmente lo ceden a pesar del tratamiento con solucióndecolorante alcohol-ácido clorhídrico. Por esto se denominan bacilos alcoholacido resistente o BARR y aparecen en el preparado microscópico teñidasde rojo, mientras que todos los microorganismos mi croorganismos no resistentes a los ácidosse tiñen de acuerdo con la contratinción.1Esta tinción tiene interés desde el punto de vista del diagnóstico clínicopuesto clínicopuesto que algunos microorganismos patógenos ácido-alcohol resistentes,tales como Mycobacterimum tuberculosis son patógenos muy importantespara los humanos. 3. MATERIAL Y REACTIVOS.Microscopio Portaobjetos Mechero de alcohol    

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Frascos lavadores

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Baja lengua Hisopos

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PROCEDIMIENTO: (ver anexo 1) 1. Se fija los portaobjetos al calor con la muestra. 2. Se cubre el frotis con el reactivo de colorante de carbolfuscina y secalienta con suavidad hasta la aparición de vapores durante 1 minuto mediante flameo por debajo de la rejilla de sostén con un mechero de gas. 3. Se deja actuar el colorante sobre el portaobjetos durante 4-5minutos,sin calentar. 4. Se lavan los frotis con agua destilada y se los inclina para eliminar elexceso de agua. 5. Se decoloran con acido alcohol al 3,0 % durante 2 minutos. Se lavan los frotis con agua destilada y se los inclina para escurrir el resto deagua. 6. Se cubren los frotis con reactivo de azul de metileno durante 1minuto. 7. Se lavan con agua destilada y se dejan secar al aire. 8. Se examinan con aceite de inmersión en búsqueda de BAAR.5

INTERPRETACION DE RESULTADOS En esta práctica no encontramos bacilos puesto que la muestra no era esputo por lo tanto vimos los siguiente :

Muestra

Que deberiamos haber visto :

CUESTIONARIO Pasos

Metodo

Ac. Ol Resist

No Ac Ol Resist

Colorante básico

 

rosado

rosado

rosado rosado

n Sin color azul

Fenicada Mordiente Decolorante Colorante de contraste

-   

Azul de metileno