MARCO TEORICO La tinción de Gram es un método que no tiñe igualmente todas las células, es un proceso denominado tinción diferencial. La tinción de este tipo más extensamente utilizada es la tinción de Gram, denominada así por el bacteriólogo danés Hans !ristian Gram, quien la desarrollo. "obre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden di#idirse en dos grupos, Gram positi#as $ Gram negati#as. %ebido a su importancia en taxonomía bacteriana $a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con cierto detalle la tinción de Gram. Las células &'adas al calor sobre un portaob'etos se tiñen primero con una solución de cristal #ioleta (otros colorantes básicos no son tan efecti#os) $ son la#adas después para quitar el exceso de colorante. *n este estado todas las células, tanto las Gram negati#as como las Gram positi#as, están teñidas de azul. *l portaob'etos se cubre entonces con una solución de $odo (+) - $oduro potásico (+). *l ingrediente acti#o es aquí el $odo, el $oduro potásico simplemente !ace soluble el $odo en agua. *l $odo entra en las células $ forma un comple'o insoluble en agua con el cristal #ioleta. %e nue#o tanto las células Gram positi#as como las Gram negati#as se encuentran en la misma situación. "e lle#a a cabo después de la decoloración, usando bien alco!ol o bien acetona, sustancias en las que es soluble el comple'o $odo - cristal #ioleta. /lgunos organismos (Gram positi#os) no se decoloran mientras que otros (Gram negati#os) lo !acen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está, por lo tanto, en la resistencia a la decoloración. %espués de la decoloración las células Gram positi#as son toda#ía azules, pero las Gram negati#as son incoloras. 0ara poner de mani&esto las células Gram negati#as se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color ro'o, como la safranina o la fucsina básica. %espués de la coloración de contraste las células Gram negati#as son ro'as mientras que las Gram positi#as permanecen azules. %eben destacarse dos aspectos cruciales de la tinción de Gram1 2) *l tratamiento con cristal #ioleta debe preceder al tratamiento de $odo. *l $odo por sí solo tiene poca a&nidad con las células. ) La decoloración debe realizarse con poco agua para e#itar que pierdan la tinción las células gram positi#as. *l proceso de decoloración debe ser corto $ es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3inalmente, el carácter de gram positi#o no es siempre un fenómeno del todo o nada. /lgunos organismos son más gram positi#os que otros $ algunos son gram #ariables, es decir, unas #eces gram positi#os $ otras gramnegati#os.
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico. Microorganismos Gram. Positivos Las eubacterias Gram. 0ositi#as son células con una gruesa pared celular de peptidoglucano. *stás células poseen una membrana citoplasmática con fosfolípidos $ proteínas. 0or fuera de la membrana citoplasmática se encuentra la pared celular que está compuesta por una anc!a capa de peptidoglicano. / su #ez, estas cadenas se encuentran unidas entre sí mediante péptidos, que son pequeñas cadenas de aminoácidos que se entrecruzan. *stos puentes peptídico son característicos de las distintas bacterias $ presentan ma$or rigidez cuanto más completo sea el entrecruzamiento. *l peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma $ rigidez a la célula, $ e#ita que la célula estalle en medios !ipotónicos. /l ser porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior $ el mo#imiento de enzimas catalíticas $ productos de secreción !acia el exterior de la célula. Microorganismos Gram Negativos Las eubacterias Gram. 4egati#as son células con una delgada capa de peptidoglicano $ una segunda en#oltura denominada membrana externa. Las células se encuentran en#ueltas por una membrana citoplasmática formada por una bicapa fosfolipídica $ proteínas. 0or encima de esta membrana se encuentra una &na capa de peptidoglicano que se !alla unida a unas lipoproteínas de ancla'e que &'an la membrana externa. El Mordiente1 *l mordiente es una sustancia empleada en tintorería que sir#e para &'ar los colores en los productos textiles. La función del mordiente es fa#orecer la &'ación del colorante en las &bras. *ste término es usado principalmente en la industria textil para designar a aquellas sales metálicas (de aluminio, !ierro, plomo) también sustancias orgánicas (caseína, gluten, alb5mina).6ambién existen mordientes que sir#en para &'ar colorantes en tinciones biológicas de células animales o #egetales. 7ue en esta oportunidad será para los microorganismos como Bacillus sp, Staphylococcus sp, $ E. coli La obser#ación microscópica puede realizarse a partir de una muestra (examen directo) $ se debe tener en cuenta.
2.8 *xamen al 3resco. (9icroorganismos #i#os) "e utiliza normalmente para #er mo#ilidad de las bacterias. *n el caso de !ongos $ protozoos, permite determinar además características morfológicas.
:. 3undamente como la Gram positi#a mantiene el color primario.
La tinción de Gram es una tinción diferencial que permite distinguir bacterias Gram positi#as de Gram negati#as, que es posible gracias a la naturaleza física de sus paredes celulares. *l peptidoglicano no se tiñe propiamente, más bien act5a como una barrera de permeabilidad para e#itar la pérdida de cristal de #ioleta. %urante el proceso las bacterias se tiñen primero con cristal $ luego se trata con $oduro (lugol) para fa#orecer la retención del colorante. uando a continuación se decolaran las bacterias Gram positi#as con etanol o acetona, se cree que el alco!ol contrae los poros de la gruesa capa de peptidoglicano. *n consecuencia, el comple'o colorante8iodo no es eliminado durante la fase de decoloración $ las bacterias Gram positi#as continuaran de color azul. 0or el contrario la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negati#as es mu$ &na, sin tantos enlaces $ con poros de ma$or tamaño, además, también es posible que el tratamiento con alco!ol extraiga su&cientes lípidos de la en#oltura de las células Gram negati#as, como para aumentar su porosidad. 0or estos moti#os, el alco!ol elimina más fácilmente el comple'o cristal #ioleta8$odo de las bacterias Gram negati#as. Bibliografía •
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