HISTOQUÍMICA BÁSICA CICLO ACADÉ ACADÉ MICO 2014-II
TRICRÓMICA DE MASOON
LICENCIADO: MANFRED RAMÍREZ AGAMA
INTRODUCCION.
ALUMNA:CERVANTES ALUMNA:CERVANTES ALEJO ERIKA 1
Introducción El tricrómic tricrómico o de Masson al igual que otros colorantes tricrómi tricrómicos cos ,es una tinción especial que permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I que se dormán fibras gruesas o haces , diseñados para dar resistencia; también evidencia, aunque en menor intensidad , las fibras reticulare reticulares s y son usadas para diferenciar entre el colágeno y musculo liso en tumores e identificar incrementos en tejidos colagenosos en enfermedades como cirrosis hepática . Es tinción tricrómica tr icrómica más m ás simple ya que ocupa solo dos colorantes colorante s aniónicos después de la tinción tin ción nuclear nucl ear con co n hematoxilina férrica . Se pueden hacer variación utilizando distintos colorantes o soluciones con distintos disti ntos heteropoliácidos. hete ropoliácidos. Se emplean tres colorante para diferenciar el núcleo celular; el citoplasma y las fibras de colágeno
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Fundamento El rol por el ácido fosfomolíbdid fosfomolíbdido o en la tinción selectiva de fibras del tejido conectivo co nectivo , fue investigado probando la hipótesis : el ácido se une al tejido y de este modo conserva la capacidad de unir colorantes , por la formación de enlaces salinos con sus grupos básicos ( el ácidos ) . La reacción del azul de molibdeno demuestran que el ácido fomolídico se une a muchas estructuras las cuales son teñidas selectivamente s electivamente por métodos tricromicos tricromi cos o por la combinación de tinción ácido-base del ácido fosfomolíbdico ,particul ,particularmente armente tejido conectivo . Así las propiedades adquiridas de la tinción por las fibras del tejido conectivo , después del tratamiento con ácidos fosfomolíbdico están probablemente debido a la presencia de este ácido sobre las fibras .El ácido fosfomolídico uno fue desplazado por el colorante , como sugirió zeiger ,desde una reacción de azul de molibdeno de intensidad regulación podría ser aun obtenida después dela tinción con verde claro . A cualquier velocidad el ácido fosfomolíbdico es intercambiado, intercambi ado, probablemente por un anión. Esto obviamente , no ocurre desde un colorante aniónico puro que no tiñe fibra del tejido conectivo después del ácido fosfomolibdico. fosfomolibdic o. Se con concluye que el ácido fosfomolibdi fosfomolibdico co es retenido por el tejido y enlaces por enlaces moleculares de colorantes. Hay varias evidencias de que el enlace entre el ácido fosfomolibdi fosfomolibdico co y el colorante es de naturaleza salina 1. La presencia de grupos catiónicos en el colorante era indispensable después del ácido fosmolíbdico 2. Grupos básicos fuertes producen tinción más intensa débilment e básicos bajando el PH 3. Con colorantes débilmente
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para teñir
Antecedentes históricos históricos MASSON, CLAUDE L .PIERRE ( Nació en 1880 en Dijon; murió en 1959) Patólogo canadiense. Estudio medicina en la universidad del Paris , donde se graduó en 1909 .Continuo su formación en el instituto insti tuto Pasteur en París entre 1909 y 1914. Después de la primera guerra mundial ,la nombraron director del departamento de patología en le universidad de Estrasburgo , ha sido la persona más joven en ser nombrado en este cargo . se vinculó como director del departamento de patología de la universidad de Monterréal en 1927 ,cargo que desempeño desem peño de patología de varios hospitales de la ciudad , entre ellos Nostre N ostre Dame , Hotel Dieu y Saint- Justine .Masson . Masson fue muy conocido por sus trabajos sobre los tumores del cerebro y el sistema nervioso , además de su reconocimiento reconocimient o por el desarrollo de la famosa técnica de coloración tricrómi tricrómica ca , que se convirtió en la estándar de loa laboratorios de patología de la época . También fue autor de un libro de tumores cerebrales (1923) (1 923) y de más de 120 artículos científicos científ icos Da origen a: coloración tricrómi tricrómica ca de Masson
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Tricrómica de Masson Se trata de una técnica para demostración de fibras colágenas 1. Fijación : cualquier fijador es válido , si bien es de elección la solución de Bouin 2. Cortes : en parafina 3. Procedimientos de coloración: a) Desparafinar los cortes en :
Xilol ……………………………………………………………………..10 min
Xilol………………………………………………………………………10 min b) Hidratar los cortes en baños decrecientes de alcohol
Alcohol 100…………… 100……………………………… ……………………………………… ………………………………...5 …………...5 min
Alcohol100……………… Alcohol10 0………………………………… ………………………………… ……………………………….5 ……………….5min min
Alcohol 96……………… 96………………………………… ………………………………… ………………………………. ………………..5 .5 min
Alcohol 96 ……………… ………………………………… …………………………........ ……….................... .........................5 .............5 min
Lavar con agua corriente …………………………………………………5 min c) Colorear con la solución Bowin 56 o - 60 o ……… 1 hora a estufa
d)
e)
f) g)
Lavar con agua corriente amarilla hasta que desaparezca el color amarillo Colorear con hematoxilina de Irum………………….. ………….......10 min Lavar con agua corriente ………………………………………………….10 min Lavar con agua destilada Colorear con solución Briebrich -Scarlet Fucsina ácida ………...5 min Lavar con agua destilada Colorear con la solución ácido Fosfotungstico acuoso 5 %............ %....................15 ........15 min Colorear con la solución verde luz………………………………….... luz…………………………………...... 20 min
Lavar con agua destilada
Lavar con solución de acética al 1% ……………………………….……..4 min
h)
Pasar por agua corriente Deshidratar en baños crecientes de alcohol etílico
Alcohol 96……………… 96………………………………… ………………………………… ………………………………… …………………...5min ...5min
Alcohol 96……………… 96………………………………… ………………………………… ………………………………. ………………........5 .......5 min
Alcohol 100....... 100.................... ......................... ......................... ........................ ........................... ........................... .......................5 ............5 min
Alcohol 100…………… 100……………………………… ………………………………… …………………………………… ……………………...5 ...5 min i)Diafinar i) Diafinar empleando xilol y montar j) Resultados :
Núcleos ………………………………………………………………..azul negruzco
Citoplasma ,queratina ,queratina,, fibras musculares rojo
Colágeno y retícula …………………………………………………….azul o verde
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Tinción tricrómica
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Método de Masson – Fontana Introducción La melanina (de mélas, negro) es un pigmento pardo negruzco, intracelular. Al microscopio de luz se presenta en forma de gránulos pequeños. El color varía del amarillo am arillo pardusco al café o negro La melanina puede demostrarse mediante reacciones histoquímicas. la más usadas están basadas en el poder de reductor de la melanina , así en el método de Fontana -Masson la melanina reduce el nitrato de plata que se precipita sobre los gránulos del pigmento dando una coloración negra .
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Hallazgos Patológicos El estudio histológico mostro la presencia de una proliferación neoplásica de densidad moderada constituida por células de aspecto epitelial epiteli al , formando estructuras tubo papilares que remedaban rem edaban la arquitectura arq uitectura del tubo neural primitivo (figura 3) . En la superficie luminal (interna) de los túbulos no se observan cilios ni blefaroblastos . Bajo la superficie externa del epitelio se observa una membrana limitante eosinófila (figura 4). las células mostraban una morfología cuboidea o cilíndrica , los núcleos eran ovales , perpendiculares a las superficies luminal y externa, con cromatina en grumos . Ocasionalmente se observan figuras mitóticas, próximas a la superficie luminal de los túbulos (figura 5). En amplias zonas , las células mostraban la presencia de un pigmento parduzco intracitoplasmático ( figura 5 y 6 ) , positivo con la tinción de Masson - Fontana . Entremezclados Entr emezclados con las estructuras tubulopapilares se observan nidos solidos de células indiferenciadas . El estudio imunohistoquímico revelo positividad de las células para enolasa, sinaptofisina, cito queratinas y proteínas S -100
Figura 3
Figura 4
Figura 6
Figura 5
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Tinción de MASSON – FONT FONTANA ANA a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) l)
Desparafinar hasta el agua destilada Colorear con solución Gram …………………………………………………… …………………………… …………………………10 …10 minutos Lavar en agua destilada………………… destilada………………………………………… ……………………… ……………….. 30 3 0 minutos Colorear con solución fontana –Masson ( microondas pot40, 30 segundos ) Lavar en agua estilada Virar en cloruro de oro 0.1% …………………………………… …………… ……………………… …………………..4 …………………..4minutos minutos Tiosulfato de sodio 5%.......... 5%....................... .......................... ........................ ......................... ........................... ...................... ......... 2 minutos Lavar en agua corriente 3 minutos Safanida………………………………………………… Safanid a………………………………………………………………………………… ……………………………… 1 minuto Lavar en agua destilada Deshidratar ,aclarar y montar Resultados: gránulos de melanina negros
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Bibliografías 1.
http://es.scribd.com/doc/203518378/TINCION-TRICROMICA-DE-MASSON-PARA-
2.
COLAGENA-Y-FIBRAS-MUSCULARES-docx http://dic.idiomamedico.net/coloraci%C3%B3n_tricr%C3%B3mica_de_Masson
3.
http://es.scribd.com/doc/58251756/Tincion-Tricromica
4.
http://escuela.med.puc.cl/publ/patologiageneral/patol_026.html http://histofotos.com/protocolos-de-tincion/54-deteccion-de-pigmentos/117-
5.
fontana-masson.html 6.
http://conganat.uninet.edu/IVCVHAP/POSTER-E/101/
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