ESCUELA POLITECNICA DEL EJÉRCITO INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA INFORME DE LABORATORIO
Nombre: Luis Alberto Loyola Materia: Microbiología Fecha: 12/04/2012
Practica N°: 2
1. TEMA: Preparación de frotis bacteriano y tinción simple 2. INTRODUCCIÓN 2.1.JUSTIFICACIÓN: 2.1. JUSTIFICACIÓN: Mediante la tinción simple de bacterias y el exámen de las mismas en el microscopio sirve de pauta para observar algunos detalles de su morfología, disposición y sus características de tinción a partir de un cultivo bacteriano, además ayuda al uso de técnicas complementarias de cultivo o de estudio bioquímico.
2.2. HIPÓTESIS: La forma de las bacterias difiere de unas e species a otras pero resulta poco variada.
2.3. OBJETIVOS: 2.3.1. GENERAL
Identificar la morfología de las bacterias y su agrupación mediante tinción simple.
2.3.2. ESPECIFICOS
Realizar un frotis bacteriano a partir del cultivo respectivo. Fijar las bacterias al portaobjetos portaobjetos por el método del calor. Efectuar la tinción simple de bacterias. Observar e identificar las bacterias en el microscopio.
3. MARCO TEORICO: Las bacterias son vegetales unicelulares pertenecientes a los procariotas que se caracterizan por presentar pared celular, ribosomas del tipo 70s y carecer de núcleo verdadero. En forma general todas las procariotas presentan en su estructura pared celular, membrana citoplasmática, citoplasma, material nuclear y estructuras externas facultativas como: fimbrias o pili, flagelos y capsula. Las bacterias pueden diferenciarse en tres formas fundamentales: esférica (cocos), cilíndrica recta (bacilos) y cilindra curvada (espirilos). Las bacterias al dividirse, células hijas pueden quedarse unidas o muy próximas dando lugar a agrupaciones para completar completar su estudio morfológico. La morfología y agrupaciones típicas de las bacterias se observan solo cuando las células son jóvenes. En los cultivos viejos viejos o cuando las bacterias están sometidas sometidas a condiciones desfavorables desfavorables surgen las llamadas formas de involución, los cocos se hinchan, los bacilos se curvan y las estructuras internas desaparecen. (García, 1994)
4. MATERIALES Y MÉTODOS: 4.1.MATERIALES Cultivo de bacterias, portaobjetos, asa bacteriológica, mechero, agua destilada, marcador indeleble, tinte (violeta cristal), mechero, microscopio, aceite de inmersión, papel filtro.
4.2.MÉTODOS Preparación del frotis
Lave el portaobjeto con agua y jabón, séquelo bien y límpielo con etanol al 70%. Marque un extremo del portaobjeto con la que va a trabajar e identifique con sus iniciales y la fecha. Coloque una pequeña gota de agua en e l centro del portaobjeto. Encienda el mechero, la llama debe ser azul y de tamaño mediano. Coja el asa como si fuera el lápiz colóquela perpendicularmente en la llama de l mechero. Después de esterilizar el asa coja el tubo de cultivo bacteriano en la otra mano y retire el tubo solamente quedándose con la tapa en el dedo meñique de la mano que sostiene el asa. Flamee la boca del tubo por pocos segundos e inserte el asa estéril en el tubo de manera que no tope el vidrio. Tome la muestra deslizando el asa sobre el crecimiento bacteriano con cuidado para no dañar el medio de cultivo. Retire el asa cargada sin que tope las paredes del tubo y deposite la muestra sobre la gota de agua en el portaobjeto. Mézclela bien y extiéndela de manera que se forme una película delgada sobre la superficie. Seque el frotis al aire tomando la placa con el pulgar y el índice en un extremo y moviendo la mano horizontalmente. Cuando esté totalmente seca, fije la preparación pasando brevemente el portaobjeto (con la muestra hacia arriba) 4 o 5 ve ces por la llama. Retire la tinción
Tinción Simple
Cubra el frotis con uno de los colorantes (violeta cristal) y espere un minuto. Lave suavemente con agua de la llave Seque con papel filtro presionando sobre el objeto y observe al microscopio.
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5. RESULTADOS::
En la imagen 1. Se observan cocos agrupados en racimos, estafilococos. En la imagen 2. Se observan bacilos agrupados en cadenas, estreptobacilos.
6. DISCUSIÓN: Las bacterias en cuanto a su forma pueden diferir de especie a especie notablemente, sin embargo resulta poco variada. (García, 1994) Las técnicas de coloración son muy importantes para la identificación de la morfología bacteriana, en la observación de la imagen 1 se puede diferenciar claramente colonias de bacterias de forma redonda (cocos), llegan a formar racimos (estafilococos). En la imagen 2 se observa formas muy diferentes en cuanto a la imagen 1 ya que estos tienen una forma alargada (bacilos) agrupados en cadenas (estreptobacilos). (Fuller, 20 07) Cabe mencionar que la morfología de las bacterias y las agrupaciones que forman se logran observar cuando las células son jóvenes, y la observación de las muestras en la imagen 1 y 2 reflejan lo mencionado anteriormente ya que de otro modo si fueran cultivos viejos estos presentan formas de involución. (García, 1994)
7. CONCLUSIONES:
La observación de bacterias al microscopio se dificulta por la falta de contraste, por ello es imprescindible teñirlas con el uso de algún colorante. Las bacterias difieren en cuanto a especies pero su morfología es poco variada Las bacterias presentan básicamente tres formas distintas: cocos, bacilos y espirilos.
8. RECOMENDACIONES
Tome las precauciones necesarias para la esterilización correcta de los materiales a utilizar. Seque bien la muestra en el portaobjeto al aire libre o cerca del me chero. Al fijar la muestra bacteriana flamee tan solo de 4 a 5 veces ya que si lo hace demás puede alterar la estructura de las bacterias.
9. BIBLIOGRAFÍA:
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Murray, P., Rosenthal, K., Pfallaer, M. (2009). Microbiología Médica (6 Ed.). España. GEA Consultoría Editorial. a García, P., M, Fernández., Paredes, F. (1994). Microbiología clínica practica (2 Ed.). Cádiz. Servicio Publicaciones UCA a Fuller, J. (2007). Instrumentación quirúrgica. (4 Ed.). España. Editorial Médica Panamericana S.A.
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ANEXOS Cuestionario 1. Nombre varias estructuras bacterianas que no puedan ser vistas con técnicas de tinción simple. Pared celular, ácidos nucleicos.
2. Enumere los pasos de la preparación del frotis bacteriano que evitan la contaminación del cultivo, de la muestra y de la persona que lo realiza
Coja el asa como si fuera el lápiz colóquela perpendicularmente en la llama de l mechero. Después de esterilizar el asa coja el tubo de cultivo bacteriano en la otra mano y retire el tubo solamente quedándose con la tapa en el dedo meñique de la mano que sostiene el asa. Flamee la boca del tubo por pocos segundos e inserte el asa estéril en el tubo de manera que no tope el vidrio. Tome la muestra deslizando el asa sobre el crecimiento bacteriano con cuidado para no dañar el medio de cultivo. Retire el asa cargada sin que tope las paredes del tubo y deposite la muestra sobre la gota de agua en el portaobjeto. Coloque nuevamente el asa perpendicularmente en la llama para e sterilizarlo.
3. ¿Qué pasaría si no se fijan las bacterias al portaobjetos antes de ser teñidas? En el caso de no fijar las bacterias al portaobjetos, al momento de ser teñidas y posteriormente al lavar con agua para retirar el colorante se perdería toda la muestra por no e star fijada.
4. Explique los fundamentos de la tinción simple La principal dificultad de observar las células bacterianas al microscopio es la ausencia de contraste entre la célula y el medio que la rodea, por lo tanto el método más simple para aumentar su contraste es el uso de colorantes es decir, tinción simple.
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