Descripción: La observación de bacterias vivas o muertas con microscopía óptica, puede realizarse por diferentes procedimientos como son la observación directa de microorganismos o con el tratamiento utilizando...
INFORME DE MICROBIOLOGIA
Microbiologia - Informe 3-COLORACIONE
descripción de algunos tipos de parásitos y sus ciclos de vidaDescripción completa
analisis microbiologico del agua filtracion por membranaDescripción completa
analisis microbiologico del agua filtracion por membranaDescripción completa
Descripción: MATERIAL DE LABORATORIO DE MICRO BIOLOGÍA, DESINFECCIÓN, ESTERILIZACIÓN
Descripción completa
informe de microbiologia general
informe microbiologiaDescripción completa
descripción de laboratorio
Microbiologia - Informe 3-COLORACIONE
Descripción completa
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Técnicas Técnicas de Gram de bacterias bacterias Daniel Castillo, Linda Luz Florez, Dirols Lopez, Jorge Isaac Maldonado Universidad del tl!ntico "#$%&$
Resumen
En esta informe podemos leer los pasos que se realizó en el laboratorio por el grupo de microbiolog microbiología ía #2 como pudimos identificar identificar y visualizar visualizar las bacterias bacterias obtenidas a partir partir de un cultivo bacteriano en una caja Petri atreves de la metodología de tensión de gram y después observadas al microscopio. %)ristian
OBJETIVOS
.
!dquirir de destreza en en la la té técnica de de
con
base
en
la
aplica aplicació ción n de esta esta técnic técnicaa las bacteri bacterias as "ram positivas de las "ram negativas. $.
que
desarrolló la técnica en ++&. 0e utiliza
celu celula larr iferenciar
*+, +,$-$+/( +/(
tanto para poder referirse referirse a la morfología morfología
coloración "ram 2.
"ram
%onocer lo los di diferentes ca campos de de
bact bacter eria iana na((
como como para para pode poder r
realiz realizar ar una primer primeraa apro1im apro1imaci ación ón a la diferenciación bacteriana( considerndose bacterias grampositivas a las que se visual visualiza izan n de color color morado morado(( y bacteri bacterias as
aplicación de esta técnica
gram negativas a las que se visualizan de
&.
color rosa( rojo o grosella.
!plicar la té técnica con con dif diferentes
reac reacti tivos vos obse observ rvand ando o los los resu result ltad ados os y
3n microorgan microorganismo ismo gram positivo positivo debe
diferencias.
presentar una pared celular sana. El
Introducción
mismo microorganismo( si sufre da4o de la pared por una u otra causa( se vuelve gram negativo. Esto indica la importancia
'a tinción de "ram o coloración de "ram
de la pared para la retención o el escape
es un tipo de tinción diferencial empleado
del del colo colora rant nte. e. 3na 3na posi posibl blee teor teoría ía del
en bacteriología para la visualización de
mecanismo de tinción es la siguiente5
bacterias( sobre todo en muestras clínicas. ebe su nombre nombre al bacter bacteriól iólogo ogo danés danés
El
colorante
bsico
entra
al
En la zona isoeléctrica característica de
microorganismo( donde forma con el
cada especie es muy escasa la tendencia a
yodo una laca insoluble en agua. El
retener cualquier colorante.
alco)ol o la acetona empleados para aclarar( des)idrata las paredes de los microorganismos gram positivos( tratados con mordiente( y forma una barrera que la laca no puede atravesar. En las células
Parece estar bien demostrado que las proteínas de las bacterias no son simples( sino ms bien una débil combinación de sustancias proteínicas con otras lipoideas o grasas.
gram negativas( los lípidos de la pared *ms abundantes que en las células gram positivas/
se
disuelven
por
este
tratamiento( lo que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo. !lgunos autores objetan esta teoría( pero es indudable la importancia general de la
'a
materia
grasa
e1traída
de
los
microorganismos gram positivos difiere de la obtenida de los microorganismos gram negativos(
en que
la
primera
contiene una proporción muc)o mayor de cidos no saturados que muestren gran afinidad por los agentes o1idantes. 6odos
pared celular.
los mordientes *como el yodo/ empleados 'os
microorganismos
pueden
)acerse
gram
gram positivos negativos
al
aumentar la acidez.
en la coloración gram son o1idantes7 su efecto( en general( consiste en dar a la sustancia o1idada un carcter ms cido.
'os microorganismos gram negativos
Esto
pueden
microorganismo
)acerse
gram
positivos
al
aumenta
la
afinidad
por
los
de
un
colorantes
aumentar la alcalinidad.
bsicos.
'os microorganismos de reacción positiva
El cambio de respuesta a la coloración de
a los colorantes cidos pueden )acerse
"ram con el tiempo es propio( sobre todo(
gram
de los microorganismos débilmente gram
negativos
por
aumentar
la
alcalinidad. 'os microorganismos de reacción positiva a los colorantes bsicos pueden )acerse gram negativos por aumentar la acidez.
positivos cultivados en los medios que contengan
sustancias
capaces
de
fermentar( y cuya reacción se vuelve cida en el curso del desarrollo.
Bacterias resistentes a la tinción de
aislamientos bacterianos realizados en los
Gram
cultivos. 0i se observan mayor n;mero de
'as siguientes bacterias de naturaleza gram
positiva
se
ti4en
como
gram
formas bacterianas que las aisladas )ay que reconsiderar los medios de cultivos empleados así como la atmósfera de
negativas5
incubación. ! partir de la tinción de "ram pueden 8ycobacterias *estn encapsuladas/.
distinguirse varios morfotipos distintos5
8ycoplasmas *no tienen pared/.
'os cocos son de forma esférica. Pueden
9ormas ' *pérdida ocasional de la pared/.
aparecer aislados después de la división
Protoplastos y esferoplastos *eliminación total
y
parcial
de
la
pared(
celular *micrococos/( aparecer por pares *diplococos/(
formar
cadenas
*estreptococos/( o agruparse de manera
respectivamente/.
irregular *estafilococos/.
'os bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena *estreptobacilos/ o en empalizada. Utilidades
En el anlisis de muestras clínicas suele
6ambién
pueden
distinguirse
los
ser un estudio fundamental por cumplir
espirales( que se clasifican en espirilos *si
varias funciones5
son de forma rígida/ o espiroquetas *si son blandas y onduladas/. 0i por el contrario( poseen forma de
:dentificación preliminar de la bacteria
curvados/ entonces se los designa vibrios.
causal de una infección. Fundamentos
3tilidad
como
control
calidad
del
de
diferenciación
de
gram positivo gram negativo
aislamiento bacteriano. 'os morfotipos bacterianos identificados en la tinción de "ram se deben de corresponder con
'os fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias gram positivas y
material que confiere su rigidez a la pared
gram negativas
celular bacteriana( y las gram positivas lo poseen en muc)a mayor proporción que las gram negativas.
'a pared celular de las bacterias gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano( adems de dos clases de
'a diferencia que se observa en la
cidos teitoicos5 anclado en la cara interna
resistencia a la decoloración se debe a que
de la pared celular y unido a la membrana
la membrana e1terna de las bacterias
plasmtica(
cido
gram negativas es soluble en solventes
lipoteicoico( y ms en la superficie( el
orgnicos( como por ejemplo la mezcla de
cido teicoico que est anclado solamente
alco)ol>acetona.
en el peptidoglicano *también conocido
peptidoglucano que posee es demasiado
como mureína/.
delgada como para poder retener el
se
encuentra
el
'a
capa
de
complejo de cristal violeta>yodo que se formó previamente( y por lo tanto este Por
el
contrario(
la
capa
de
peptidoglucano de las bacterias gram negativas es delgada( y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica e1terior *de composición distinta a la interna/ por medio de lipoproteínas. 6iene una capa delgada de peptidoglicano unida a
una
membrana
e1terior
por
lipoproteínas. 'a membrana e1terior est )ec)a
de
proteína(
fosfolípido
y
lipopolisacrido.
Por lo tanto( ambos tipos de bacterias se ti4en diferencialmente debido a estas
complejo
se
escapa(
la
coloración azul-violcea. Por el contrario( las bacterias gram positivas( al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos( no son susceptibles a la acción del solvente orgnico(
sino
que
este
act;a
des)idratando los poros( cerrndolos( lo que impide que pueda escaparse el complejo
cristal
violeta>yodo(
y
manteniendo la coloración azul-violeta.
Factores !ue alteran la tinción de Gram
diferencias constitutivas de su pared. 'a clave es el peptidoglicano( ya que es el
perdiéndose
Edad de la bacteria.
Errores del operador.
iniciamos la tinción agregamos el !gregar azul violeta y esperamos un minuto( a
3so de antibióticos
continuación( enjuagamos la muestra con ! pesar de la gran utilidad de la tinción de "ram( este método debe ser valorado con precaución( ya que la reacción puede variar seg;n la edad de las células *cultivos
viejos
positivas
pueden
de
bacterias
perder
capas
gram de
peptidoglicanos y te4irse como gram negativos/ y la técnica empleada *al decolorar por un tiempo muy prolongado
agua( posteriormente se agregó lugol( se esperó un minuto y se enjuago( al cabo rato agregamos el alco)ol acetona y esperamos de 2? a $? segundos en ese momento se da la decoloración de las "@!8 *-/ ( enjuagamos la muestra con agua y por ultimo agregamos la fucsina( por ;ltimo se procedió a observar las muestras en el microscopio.
se puede correr el riesgo que bacterias gram positivas se ti4an como gram negativas/. Por esta situación( junto a la muestra
muestra de bacterias ya presentes en el laboratorio( primero tomamos la muestra y con el asa ya esterilizado realizamos un &' Aista
??1
de muestra
frotis usando una solución salina en el
Imagen
porta
preparada con tinción de gram
objetos(
después
esperamos
apro1imadamente , min después ya secada la muestra realizamos la fijación tomamos
el
porta
objetos(
se
pasó
rpidamente por el mec)ero )asta que se fijara la muestra. espués dada la fijación
En la imagen se muestra que se lograron colorear algunas colonias de bacterias( dado a su coloración rosa( se deduce que eran bacterias gram negativas
las que se lograron te4ir y gracias a la
0e logró comprobar que la tinción de
tinción se lograron diferenciar colonias de
gram es un método de tinción adecuado
coccos( estafiloccos( de manera separada
para diferenciar bacterias y conocer su
esparcidas por toda la muestra.
identidad( las muestras obtenidas fue gram
negativas
dado
a
su
color
característico violeta( de esta forma se logró identificar de manera prctica las morfologías de las muestras desconocidas preparadas( en la primera se lograron notar colonias de estafilococos y en la muestra 2( clonias de estretobacilos y algunos
vibrios
vistos
de
manera
diferencial. Imagen (' 8uestra ??1 preparada con
B:B':C"@!9:!
tinción de gram 0e
encontró
una
muestra
bastante
&'
Brock, (2016). Biologia de los microorganismos (12 ed., Vol., pp. 1-28). Mexico, mexico: Pearson eduacaion.
('
Bergey( avid D.7 Dolt( o)n ".7 Frieg( Goel @.7 0neat)( Peter D. !. *&/5 BergeyHs manual of determinative bacteriology. 'ippincott Iilliams J IilKins( novena edición( &. :0BG ?L+$-??L?$-M.
colorada de color violeta( se deduce de una que las bacterias que se encontraron son
gram
bacteriana
negativas(
la
morfología
que se puede notar que gran
parte de la muestra son bacilos en diferentes
formas
y
colonias
como
estreptobacilos y di bacilos en la muestra( se pueden notar algunos vibrios en la muestra( se deduce por la curvatura característica de ellos en forma inclinada.
