FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO LABORATORIO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
TEMA: ALUMNA: BUITRÓN LLANTOY MARÍA ELENA PROFESOR: BERNAOLA UCHUYA JOSÉ
-2017-
INTRODUCCIÓN Las tinciones hematológicas tienen una finalidad importante por ello es una de primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio. Este procedimiento de coloración nos va a permitir diferenciar los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas. Además, de la morfología y diferenciación de cada uno permite observar patologías en células sanguíneas. Por ende, para el estudio satisfactorio del frotis sanguíneo, es necesario colorearlo para poder observar con mayor facilidad estructuras internas y poder diferenciarlas en el microscopio. En la mayoría de los laboratorios los colorantes más empleados para la tinción hematológica se basa en el de Romanowsky constituido fundamentalmente con la mezcla de eosina (ácido) y azul de metileno (básico). Además se ha incorporado el empleo de derivados por oxidación del azul de metileno que se conoce con el nombre de azures (A, B, C). Son los azures los responsables dela coloración púrpura o rojo de ciertas estructuras. En esta práctica realizaremos la preparación del colorante de Wright. El colorante de Wright es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75%) y azul B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del alcohol metílico. La eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de los diferentes estructuras celulares, de forma que las estructuras que tienen carácter básico fijan la eosina mientras que las estructuras que poseen propiedad ácidas fijan principalmente el azul de metileno. Esto explica que las estructuras basófilos se tiñan de color azul mientras que los componentes acidófilos adquieren un color rosado. La diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmáticas por dichos colorantes permite clasificar y diferenciar a los leucocitos polimorfonucleares.
OBJETIVOS 1. Obtener un frotis sanguíneo bien teñido para poder facilitar la visualización de las células sanguíneas mediante el microscopio óptico y asi poder diferenciar cada tipo de célula. 2. Conocer el fundamento de la coloración de Wright y aprender a preparar el colorante Wright. 3. Aprender y adquirir destreza a teñir los frotis sanguíneos con el colorante Wright.
MARCO TEORICO TINCIONES HEMATOLÓGICAS Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visualizadas microscópicamente con mayor facilidad.
TIPOS DE TINCIONES Atendiendo al nivel de vitalidad de las células que se pretenden colorear, se dividen en tinciones vitales y no vitales. Atendiendo a su frecuencia de realización en el diagnostico hematológico cotidiano, se dividen en tinciones habituales y especiales.
DENOMINACION DE LAS ESTRUCTURAS COLOREADAS Estructuras acidófilas u oxífilas: son aquellas que fijan colorantes de naturaleza ácida.
Estructuras basófilas; son aquellas que fijan colorantes de naturaleza alcalina. La diferente afinidad de ciertas granulaciones citoplasmáticas por el colorante permite clasificar a los leucocitos polimorfonucleares en 3 grupos: • Granulocitos eosinófilo,
en los que la granulación específica contiene
sustancias de carácter básicos que fijan los colorantes ácidos y se tiñen de color rojo- naranja. • Granulocitos basófilos, en los que la granulación específica posee
sustancias de carácter ácido que fijan colorantes básicos y se tiñen de color azul oscuro. • Granulocitos neutrófilos, en los que la granulación específica posee
compuestos de carácter neutro por lo que fijan ambos colorantes simultáneamente, de ahí que se tiñen de color pardo.
COLORANTE WRIGHT Es un tipo de coloración Romanowsky y eso proviene de una modificación de la coloración de Leishman. Los componentes principales de la coloración de Wright es el azul B (un producto de oxidación del aazul de metileno) y la eosina Y.
FUNDAMENTO La naturaleza ácida o básica de las estructuras celulares determina su avidez por los componentes del colorante policromático de Wright. Los ácidos nucleicos se tiñen con azul B que es el básico y la hemoglobina con la eosina Y ya que es ácida. Otras estructuras se tiñen por una combinación de ambos y se denominan neutrófilas.
MATERIALES MICROSCOPIO
COLORANTE WRIGHT
MARCADOR DE PH
PUENTE DE TINCIÓN
AGUA DESTILADA
FROTIS SANGUINEO
PROCEDIMIENTO 1. El primer paso que hicimos en el laboratorio, fue la preparación del colorante y la solución amortiguadora.
PREPARACIÓN DEL COLORANTE WRIGHT Reactivos Colorante de Wright…...................... 0,3 gr Glicerina………………….………… ..…. 3ml Metanol………………………………. 100 ml
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN AMORTIGUADORA TAMPONADA Hidróxido de sodio
3,76 g
Agua destilada c.s.p
1000 cc
Nota: el PH debe ser 7.2
PROCEDIMIENTO: 2. Disolver en el mortero el colorante de Wright con el glicerol, una vez disuelto se adiciona el metanol. .
Metanol o etanol (alcohol) sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos
FIG1: Mezclamos y disolvemos el colorante Wright con el glicerol
3. Luego lo trasvasamos a un frasco oscuro (color caramelo) mediante método de filtración.
Fig 2: Usando la técnica de filtración trasvasamos el colorante de Wright preparado con la ayuda del embudo de filtración y el papel filtro.
4. Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20 minutos.
Fig3: Frotis sanguíneo frescos
5. Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colorante de Wright, dejándolo por espacio de x minutos
Fig4: Frotis sanguíneo dispuestos en el puente de tinción
Fig5: Vertiendo el colorante Wright a los frotis sanguíneos
6. Posteriormente, se añade solución amortiguadora tamponada en partes iguales soplando ligeramente con la pipeta hasta obtener un brillo metálico, dejándolo por x minutos.
Agua destilada actúa como una solución amortiguadora tamponada manteniendo el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes celulares.
Fig6: En este caso se añadió como tampón agua destilada, previamente se midio el PH para verificar si se podía utilizar.
NOTA: Para comprobar la calidad de colorante realizamos el procedimiento en diferentes tiempos T’ colorante
T’ Solución
Wright
amortiguadora
2’
3’
2’
4’
2’
5’
3’
3’
3
4’
3’
5’
7. Finalmente,
lavar los frotis teñidos con agua destilada o agua
corriente hasta eliminar los restos de colorante y se dejó secar por x minutos
Fig7: Dejando los frotis sanguíneos teñidos secar por x minutos
8. Observar las preparaciones al microscopio óptico para comprobar la calidad de la tinción. El frotis que se pudo visualizar las células sanguíneas con buenas características fue el que se uso 3 minutos con el colorante 5 minutos con agua destilada.
Fig8: Observando en el microscopios las láminas y comprobando la calidad de tinción.
CONCLUSIONES. 1. En definitiva, el uso de las tinciones hematológicas nos ayuda para poder mejorar la visualización de las estructuras celulares con el uso del microscopio 2. Entendiendo el fundamento podemos comprobar que a diferencia de las otras tinciones hematológicas, en la tinción con Wright ya no necesita el paso previo de fijación ya que el etanol es un componente de la misma coloración que va a permitir fijar el frotis hacia el portaobjetos. 3. Los pasos descritos son esenciales para realizar una buena coloración, Esta técnica de coloración es la más usada para poder visualizar las células sanguinas y lo realizaremos habitualmente, así adquiriremos destreza que es el objetivo de la práctica.
BIBLIOGRAFIA 1. Tinción
de
Wright
–
Practica
nº2
[en
linea]
http://wiki.fisiologia.me/images/4/40/Pr%C3%A1ctica2carlamarco.pdf 2. Martínez. Cuadernos de práctica de hematología 2014 [en linea] http://deliamm96cuadernopracticashema14.blogspot.pe/2014/11/practica -tincion-de-wright.html 3. Practica guiada 2017.
ACTIVIDADES Comente sobre la coloración de Romanowsky. Fundamente Una tinción Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como la eosina Y. Se utiliza para preparar frotis para análisis sanguíneos como base de diversos colorantes, como los de Wright, Giemsa o Leishman. La tinción de la muestra permite distinguir la forma, tamaño y contorno de los hematíes, leucocitos, plaquetas, el núcleo, citoplasma y granulaciones de las distintas células ya que adquieren diferentes colores: azul, púrpura, rosa o salmón. Esta separación por colores es el llamado efecto Romanowsky, que tiñe de púrpura a los núcleos y gránulos neutrofílicos y de color rosa a los eritrocitos. Los ácidos nucleicos, las proteínas y el citoplasma se tiñen de azul, delatando a los posibles parásitos
