Instituto Politécnico Nacional Nacional de Ciencias Biológicas
Escuela
Práctica 8 Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina y de determinación de colesterol en yema de huevo.
Bioquímica General Sección 1. Introducción
Los lípidos son un tipo de biomolécula que se distingue por su solubilidad característica, son insolubles en agua y solubles en disolventes orgánicos no polares, éstos se clasifican en dos grupos principales: simples y compuestos. Los lípidos simples más importantes son el colesterol y los ácidos grasos, dentro de los lípidos complejos se pueden mencionar los fosfolípidos y los triglicéridos. El colesterol es una grasa presente en todas las células del organismo. Se presenta en altas concentraciones en la medula espinal, páncreas y cerbero pero se sintetiza principalmente en el hígado y en el intestino delgado. El colesterol se puede encontrar también en una yema de huevo en una cantidad alrededor de 250 mg. En general, los lípidos llevan a cabo tres funciones biológicas: las moléculas de lípidos bajo la forma de bicapas lipídicas son componentes esenciales de las membranas biológicas, si estos contienen cadenas hidrocarbonadas sirven como depósitos de energía y muchos acontecimientos de señalización intracelular e intercelular involucran moléculas de lípidos.
Objetivos
Separar los fosfolípidos de la yema de huevo por medio de la cromatografía en capa fina. Determinar la concentración de colesterol en la yema de huevo por el método de Lieberman-Burchard.
Resultados
Imagen 1. Placas de la cromatografía en capa fina.
Gráficas
Concentración 0.5 0.4 Absorben 0.3cia 0.2 0.1 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.1 0.11 Grafica 1. Curva tipo para la concentración de colesterol
Discusión de resultados Tabla 1. Reactivos para la identificación de fosfolípidos.
Reactivo Molibdato Bismuto Ninhidrina Yodo
Fosfolípidos identificados Fosfolípidos en general Con colina Con grupos amino libres Con dobles enlaces
A una muestra de yema de huevo se le realizó una cromatografía en capa fina, para identificar con un reactivo específico distintos tipos de fosfolípidos presentes en la misma, la tabla 1 indica el tipo de fosfolípido revelado por cada uno. Según las manchas del cromatograma, se esperaría según la literatura que el reactivo de bismuto identificará a la fosfatidil colina y la esfingomielina, el reactivo de ninhidrina identificaría al fosfatidil etanol-amina y fosfatidil serina mientras que el yodo revelaría a la esfingomielina y trioleína por tener las características estructurales que revelan los reactivos antes mencionados (ver anexo 1). Se determinó la concentración de colesterol en media yema de huevo usando la reacción de LiebermanBurchard, donde el anhídrido acético provoca la condensación del grupo OH del colesterol y en conjunto con el ácido sulfúrico, genera un compuesto coloreado verde azulado. Para calcular la concentración de colesterol en una muestra de 5 µL se interpolo la absorbencia de esta muestra en la curva tipo trazada de absorbencia contra diferentes concentraciones de colesterol. La absorbencia de la muestra fue de 0.281, lo que corresponde a una concentración de colesterol de 0.05 mg (grafica 1) lo que corresponde a 115.99 mg de colesterol en media yema de huevo. Dicho resultado difiere en 7.76% menos que el esperado debido a errores en la preparación de la solución de yema de huevo.
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Práctica 8 Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina y de determinación de colesterol en yema de huevo.
Bioquímica General Sección 1. Conclusiones
Los fosfolípidos separados de la yema de huevo por medio de la cromatografía en capa fina contienen grupos con colina, amino libres y dobles enlaces. Una yema de huevo contiene aproximadamente 240 mg de colesterol.
Bibliografía 1. 2.
Campbell M., Farrell S., Bioquímica, cuarta edición, Editorial Thomson, México, 2004, pág. 221. Yañez J., Villar J., Dislipemias, lipoidosis, lipodistrofias y obesidad, Universidad de Sevilla, España, 2002, págs. 97-103.
Anexo 1 Fosfolipido
Estructura
Fosfatidil serina
Fosfatidil colina Fosfatidilcolin a
Fosfatidil etanol-amina Fosfatidil etanol-amina
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Bioquímica General Sección 1.
Esfingomielina Esfingomiel ina
Isolecitin a
Isolecitina
Colesterol
Colesterol
