Año del buen servicio al ciudadano Universidad nacional de la amazonia peruana Facultad de farmacia y bioquímica Cátedra de química analítica 2
Informe de práctica N° 05 Cromatografía en capa fina de medicamentos
Docente:
Q.F. Mario Javier de la Cruz Flores
Integrantes: Curto Arévalo Jhudy Stefany Góngora Flores Rafael Guerra Rivas Romel Saboya vela Ibonny Tello Gómez Katherine Hann
Horario de práctica: Miércoles 1.00pm – 5.00pm Fecha de entrega: martes 18 de julio del 2017
Iquitos Loreto Perú 2017
Cromatografía en Capa Fina de Medicamentos CROMATOGRAFÍA La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra, denominada fase estacionaria. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre esas dos fases. Según lo anterior, son posibles varios tipos de cromatografía, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: pueden ser sólido-liquido (capa fina, papel o columna), o bien liquido-liquido o gases - liquido (fase vapor). Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.
Rf El símbolo Rf significa “Relación de frentes”, es una relación de distancias, y se expresa como el cociente entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el disolvente hasta el frente del eluyente:
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra: tipo de adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la
placa, temperatura, vapor de saturación, etc. Tiene una reproducibilidad de ±20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa. El eluyente (fase móvil) ascenderá por capilaridad por la placa y arrastrará los componentes en forma diferenciada a lo largo de ésta, produciendo “manchas” de los componentes. El grado de elución de lassustancias dependerá tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado.
Gel de sílice. Es una forma granular y porosa de dióxido de silicio, hecho a partir de silicato sódico. Es un gel sólido y duro, de aspecto cristalino, poroso, inerte, no tóxico e inodoro. Su fórmula molecular es SiO2.nH2O, casi insoluble en agua y en cualquier otro disolvente. Es químicamente estable, sólo reacciona con ácido fluorhídrico y con álcali.
El gel de sílice, también conocido como Silicagel, es un producto absorbente que puede diferenciar la adsorción de diferentes moléculas, actuando como un adsorbente selectivo en procesos de cromatografía, tanto en columna como en placa fina. El gel de sílice está catalogado como el de mayor capacidad de absorción de los que se conocen actualmente, y bajo diferentes métodos de fabricación, se pueden conseguir diferentes tipos de gel de sílice con diversas estructuras de poro, pudiendo llegar a absorber hasta un 40% de su propio peso en agua, por lo que es usado también para reducir la humedad en espacios cerrados.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo "manchas" de los componentes.
En la cromatografía en capa fina (ccf), el grado de elución de las sustancias depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte rígido, qué pueden ser placas de vidrio, aluminio o poliéster. Los tamaños de la placa para ccf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2 cm.
Objetivos:
Aplicar cromatografía de capa fina a medicamentos. Conocer el sistema de cromatografía de capa estacionaria, fase móvil, muestra.
fina:
Materiales y reactivos: Muestra a analizar: Paracetamol 500mg
20 tb de paracetamol de 500 mg Tabletas de referencia de paracetamol Papel aluminio Mortero 4 frascos de laboratorio de 50ml con tapa rosca 4 frascos de laboratorio de 25ml con tapa rosca 4 frascos de laboratorio de 100ml con tapa rosca 130 ml de metanol Micropipeta de 1000µl con tips 4 viales de 10ml con tapa rosca Pipeta de 1ml 20 ml de tolueno 20 ml de acetona 5 ml de ácido acético glacial Hornilla eléctrica Lámpara UV 254 nm Placas cromatográficas recubiertas con gel de sílice 60F 254 Pinzas Tijeras Papel filtro Cámara de desarrollo para cromatografía de capa fina (frasco) Lápiz Marcador
fase
Microcapilares de 2µl de capacidad Vaso de precipitado de 250 ml Agua destilada Termómetro
Procedimiento: I.
Preparación de la solución madre del estándar:
a) Para la preparación de la solución madre del estándar se requiere una tableta de referencia de 500 mg de paracetamol, la que se tritura antes de realizar la extracción. El procedimiento preciso es el siguiente: envuelva una tableta en el papel aluminio y tritúrela con el pistilo hasta obtener un polvo fino. Transfiera todos los sólidos en un frasco de laboratorio de 50 ml y enjuague los residuos de solido con 25 ml de metanol. Cierre el frasco y agítelo por 3 minutos hasta que se haya disuelto el sólido. Deje que repose la solución por 5 minutos hasta que los residuos insolubles se sedimenten bajo del líquido claro del sobrenadante. b) Para las disoluciones subsiguientes, mezcle 1 ml del líquido claro sobrenadante con 3 ml de metanol en un vial de 10 ml. cierre el vial y agítelo. Identifique el vial como solución madre del estándar de paracetamol. La solución madre debe contener 5mg de total de droga por ml. prepare una solución para cada prueba.
II.
Preparación de la solución estándar de trabajo al 100% (límite superior de trabajo)
Pipetee 1 ml de la solución madre del estándar clara en un vial de 10 ml y añada 3 ml de metanol. Cierre el vial y agítelo. Esta solución debe contiene 1.25 mg de la droga total por ml y se la identificara como solución estándar de trabajo de paracetamol al 100% . La solución estándar de trabajo representa un producto de buena calidad conteniendo 100% de paracetamol.
III.
Preparación de la solución estándar de trabajo al 800% (límite inferior de trabajo)
Pipetee 1 ml de la solución madre del estándar clara en un vial de 10 ml y añada 4 ml de metanol. Cierre el vial y agítelo. Esta solución debe contiene 1.0 mg de la droga total por ml y se la identificara como solución estándar de trabajo de paracetamol al 80% . La
solución estándar de trabajo representa un producto de poca calidad conteniendo 80% de paracetamol. Para nuestro trabajo este nivel de la droga representa el límite inferior aceptable para un determinado producto.
IV.
Preparación de la solución madre de la muestra, cuyo producto declara una concentración de 100 mg de paracetamol por unidad: Para la preparación se la solución madre de la muestra se requiere una tableta entera del producto apropiado que se encuentre en el mercado. El procedimiento preciso es el siguiente: envuelva una tableta en el papel aluminio y tritúrela con el pistilo hasta obtener un polvo fino. Transfiera todos los sólidos en un frasco de laboratorio de 25 ml y enjuague los residuos de solido con 20 ml de metanol. Cierre el frasco y agítelo por 3 minutos hasta que se haya disuelto el sólido. Deje que repose la solución por 5 minutos hasta que los residuos insolubles se sedimenten bajo del líquido claro del sobrenadante. Esta solución debe contiene 5 mg de la droga total por ml. el frasco se la identificara como solución madre de la muestra de paracetamol. Prepare una solución nueva para cada prueba.
V.
Preparación de la solución madre de la muestra, cuyo producto declara una concentración de 300 mg de paracetamol por unidad:
a) Envuelva una tableta en el papel aluminio y tritúrela con el pistilo hasta obtener un polvo fino. Transfiera todos los sólidos en un frasco de laboratorio de 25 ml y enjuague los residuos de solido con 15 ml de metanol. Cierre el frasco y agítelo por 3 minutos hasta que se haya disuelto el sólido. Deje que repose la solución por 5 minutos hasta que los residuos insolubles se sedimenten bajo del líquido claro del sobrenadante. b) Para las disoluciones subsiguientes, mezcle 1 ml del líquido claro sobrenadante con 3 ml de metanol en un vial de 10 ml. cierre el vial y agítelo. Identifique el vial como solución madre de la muestra de paracetamol. La solución madre debe contener 5mg de total de droga por ml. prepare una solución para cada prueba.
VI.
Preparación de la solución madre de la muestra, cuyo producto declara una concentración de 500 mg de paracetamol por unidad:
c) Envuelva una tableta en el papel aluminio y tritúrela con el pistilo hasta obtener un polvo fino. Transfiera todos los sólidos en un
frasco de laboratorio de 50 ml y enjuague los residuos de solido con 25 ml de metanol. Cierre el frasco y agítelo por 3 minutos hasta que se haya disuelto el sólido. Deje que repose la solución por 5 minutos hasta que los residuos insolubles se sedimenten bajo del líquido claro del sobrenadante. d) Para las disoluciones subsiguientes, mezcle 1 ml del líquido claro sobrenadante con 3 ml de metanol en un vial de 10 ml. cierre el vial y agítelo. Identifique el vial como solución madre de la muestra de paracetamol. La solución madre debe contener 5mg de total de droga por ml. prepare una solución para cada prueba.
VII.
Preparación de la solución de trabajo de la muestra:
Pipetee 1 ml de la solución madre clara en un vial de 10 ml y añada 3 ml de metanol. Cierre el vial y agítelo. Esta solución debe contiene 1.0 mg de la droga total por ml y se la identificara como solución de trabajo de la muestra de paracetamol . La concentración esperada en la solución va a ser de 1.25 mg/ml y debe ser equivalente a la concentración de paracetamol del estándar de concentración alta.
VIII.
Aplicación de la prueba:
Marque una línea (línea de inicio) paralela a una distancia de 1.5 cm del extremo inferior de la placa cromatográfica y aplique con las pipetas microcapilares 2microlitros (µl) de la solución de la prueba y del estándar como se demuestra en la fotografía. Se puede hacer hasta 5 manchas en la placa cromatográfica. Compruebe la uniformidad de las manchas usando una luz UV de 254 nm. Todas las manchas deben ser circulares y estar localizadas a distancias iguales sobre la línea de inicio. La intensidad de ellas puede diferir pero sus diámetros no. La diferencia en la intensidad se debe a la diferente cantidad de los residuos de las tabletas o de las capsulas, o a la diferente concentración de la droga en la solución de muestra. Una diferencia en el tamaño de la mancha es evidencia de una mala aplicación. Repita de nuevo el procedimiento si no se logra una aplicación homogénea.
IX.
Desarrollo:
Pipetee 10 ml de tolueno en la cámara de desarrollo para CCF. Añade 10 ml de acetona y 10 gotas de ácido acético glacial. Cierre el recipiente y mezcle cuidadosamente. Cubra las paredes del recipiente con papel filtro y espere 15 minutos para asegurarla saturación de la cámara con los vapores del solvente. Coloque con cuidados la placa cargada en el
frasco. Cierre el frasco y desarrolle la placa cromatográfica hasta que el solvente haya alcanzado las 3 cuartas partes de la longitud de la placa cromatográfica, siendo el tiempo de desarrollo d aproximado 15 minutos. Remueva la placa cromatográfica de la cámara, marque el frente del solvente y deje que el resto del solvente se evapore usando la hornilla eléctrica si fuese necesario.
X.
Detección:
Seque los residuos del solvente y observe la placa cromatografía con una luz ultravioleta de 254 nm. Inspeccione la placa cromatográfica después con la coloración con yodo.