NUMERACIÓN DE COLIFORMES, DETERMINACIÓN DEL NÚMERO MÁS MÁS PROBABLE (NMP) I.
OBJETIVOS •
Dete Determ rmin inar ar el NMP NMP de coli colifo form rmes es tota totale les s en mues muestr tras as de alimentos.
•
Determinar la numeración de coliformes mediante el método de recuento en placa.
•
Deter Determin minar ar en NMP NMP de colif colifor orme mes s fecal fecales es en muest muestras ras de alimentos.
II .
FUNDAMENTO TE TEÓRICO COLIFORMES Las Las coli colifo form rmes es son son una una fami familia lia de bact bacter eria ias s que que se encu encuen entr tran an comúnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. La presencia de bacterias coliformes en el suministro de agua agua es un indi indica cado dorr de que que el sumi sumini nist strro de agua agua pued puede e esta estarr cont conta amina minado do con con agua guas negr negra as u otro tro tipo tipo de des desecho chos en desc descom ompo posi sici ción ón..
ene enera ralm lmen ente te,,
las las
bact bacter eria ias s
coli colifo forrmes mes
se
encuentran en mayor abundancia en la capa super!cial del agua o en los sedim sediment entos os del fondo fondo.. Los Los colifo coliform rmes es se intro introduc ducen en en gran gran número al medio ambiente por las heces heces de de humanos y animales. Por tal moti"o suele deducirse que la mayor#a de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. $in embargo, e%isten muchos coliformes de "ida libre. La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caracter#sticas bioqu#micas en común e importancia rele"ante como indicadores indicadores de de contaminación contaminación del del agua y los alimentos. &olif &olifor orme mes s signi! signi!ca ca con forma forma de &oli, &oli, re!r re!rién iéndos dose e a la bacter bacteria ia principal
del
grupo,
la
'scher 'sc herich ichia ia
&oli &o li,,
descubierta
por
el
bacteriólogo alem(n )*'+D+ alem(n )*'+D+ -+N -+N '$&*'&* '$&*'&* en en /012 /012..
Caractere !"#$%&'"c# 'l grupo agrupa agrupa a todas todas las bacterias entéricas entéricas que se caracteri3an por tener las siguientes propiedades bioqu#micas4
ser aerobias aerobias o o anaerobias anaerobias facultati"as facultati"as
ser ba baci cilo los sram ram negati"os5 negati"os5
no ser esporógenas
fermentar la lactosa a 67 8& en 90 horas, produciendo (cido l(ctico y gas.
Las bacterias de este género se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero también ampliamente distribuidas en la naturale3a, especialmente en suelos, semillas y "egetales. Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por las heces de humanos y animales. Por tal moti"o suele deducirse que la mayor#a de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. $in embargo, e%isten muchos coliformes de "ida libre.
III.
OBJETIVOS •
Determinar el NMP de coliformes totales en muestras de alimentos.
•
Determinar la numeración de coliformes mediante el método de recuento en placa.
•
Determinar en NMP de coliformes fecales en muestras de alimentos.
IV.
EUIPOS * MATERIALES +. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la . -. . /.
muestra de alimentos. ncubadora de 67:& ; 6<:& Pipetas bacteriológicas de /ml =gu>a de incubación con alambre de nicrón o platino iridio. &aldo "erde brillante bilis lactosa ?&=LD+ @L=A "olúmenes de /ml
en
tubos
de
/72%/7mm
conteniendo
tubos
de
fermentación in"ertidos ?<7%/mmA. 0. agar "ioleta cristalBro>o neutroB bilis ?-@=A o agar 'ND+ o agar Mc &+NC'
V.
PROCEDIMIENTO NUMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES
+. Preparar las muestras de alimento de acuerdo al procedimiento recomendado. . Pipetear /ml de cEu de las diluciones del homogeni3ado de alimento en tubos de caldo "erde brillante bilis lactosa ?caldo @L=A utili3ando tres tubos por dilución. -. ncubar los tubos a 67:& ; 6<:& por F9B 90 horas
. =notar los tubos que muestren producción de gas ?prueba presunti"aA /. De cada tubo que contiene gas, aislar sobre placas con agarB"ioleta cristalBro>o neutroBbilis ?-@=A o agar 'ND+. 0. ncubar los tubos a 67:& ; 6<:& por F9B 90 horas 1. &on!rmar la presencia de bacterias coliformes por4 a. la formación de colonias, ro>o oscuro con di(metro mayor de 7mm en agar -@=. !. La formación de colonias ro>as rodeadas halo en agar 'ND+. 0. =notar el número de tubos con!rmados. eferirse a la tabla del NMP para e%presar el resultado.
NUMERACIÓN
DE
COLIFORMES
DE
OR23EN FECAL I.
EUIPOS
*
MATERIALES /.
=sa
F.
inoculación. @aGo de agua, regulado
6.
de
a
99
?HEB 2./8&A Pipetas bacteriológicas
de 7ml 9. &aldo "erde brillante bilis lactosa ?caldo @L=A, "olúmenes de /2ml en tubos de /72%/7mm. &onteniendo tubos de fermentación in"ertidos ?<7%/2mmA. 7. &aldo triptosa, "olúmenes de /ml en tubos de /72%/7mm. 1. eacti"o de C+-=&$.
II.
PROCEDIMIENTO /. $eleccionar los tubos de caldo "erde brillante bilis lactosa ?caldo @L=A que muestren formación de gas en prueba presunti"a. F. nocular una a3ada de cada tubo gas positi"o a un tubo de caldo @L= y un tubo de caldo triptosado. 6. ncubar los tubos a 99 ?HEB 2./8&A 9. Después de F9 horas de incubación, efectuar la prueba de indol en los tubos con caldo triptosa. 7. &ontrolar la formación de gas en los tubos con caldo @L= después de F9 y 90 horas de incubación. 1. Los culti"os que muestran producción de gas en caldo @L= y formación del indol en caldo triptosa son positi"os para coliformes fecales.
<. eferirse a la tabla de NMP para e%presar el resultado.
NUMERACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES POR EL M4TODO DE RECUENTO EN PLACA I.
MATERIALES +. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la . -. . /.
II.
muestra. ncubadora a 97B6<8&. Pipetas bacteriológicas de /ml. @aGo de agua regulada a 99B 918&, para temperar el agar. =gar -ioleta &ristal o>o Negro @ilis ?-@=A
PROCEDIMIENTO /. Prepara la muestra por el procedimiento recomendado para la preparación de dilución de muestra. F. )ransferir /ml de cada dilución de la muestra a una placa de Petri estéril. 6. =dicionar a cada placa de Petri, /2B/7ml de agar "ioleta cristal ro>o bilis temperado a 99B 918&. 9. Me3clar el contenido de las placas mediante mo"imientos de "ai"én y rotación de cada placa. De>ar solidi!car la me3cla 7 a /2 minutos, luego distribuir un adicional de /2ml de medio de plaqueado como doble capa, cubriendo completamente la super!cie de medio solidi!cado e que inhibir( la formación de colonias en la super!cie. 7. n"ertir e incubar las placas durante F9 horas a 67B6<8&. únicamente las colonias ro>o oscuro que midan 2.7mm o m(s de di(metro en la placa, que tengan entre F2 y F22 colonias, se consideran bacterias coliformes. $i es posible seleccionar para el recuento solamente aquellas placas no con m(s de /72 colonias de estas colonias. Multiplicar el número de colonias por dilución para obtener el número de bacterias coliformes por gramo o ml de muestra.
aA &alculados a partir de los datos de Man ?/I<7A bA 'n cada ni"el de dilución, inocular /ml en cada uno de tres tubos de medio.
Para calcular en NMP de las diluciones mayores que las que se seGalan multiplicar el NMP por el factor de dilución apropiado de /2,/22,/222 , etc. Por e>emplo , si se han seleccionado tubos pro"enientes de las diluciones /2BF,/2B6, /2B9, multiplicar por /2 , si de las diluciones /2B6, /2B9, /2B7 multiplicar por /22 .
VI.
RESULTADOS NUMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES NE3ATIVO &olor "erde botella , translucido, no hay gas en la campana
POSITIVO &olor
"erde
oli"o,
opaco
o
turbio, si hay presencia de gas en la campana. Grupo 1
2 = positivo 1 = positivo
Grupo 2 4
=
hay
gas
positivo
translucido 3 = gas positivo translucido 5y6 = no hay gas
'n / ML. *ay F/22. F/22 coliformes, es una leche no contaminada, la calidad es bastante buena.
VII.
CONCLUSIONES •
'stas bacterias se elimina con tratamiento térmico a 12 ; 17:& aunque es muy ba>o y se puede aumentar la temperatura.
•
&oliforme lactosa positi"a ocurre la fermentación y se obtiene &+ F es decir el medio de culti"o esta dentro y "a a salir en forma de gases quiere decir que la reacción es positi"a y si no ocurre nada la reacción es negati"a.
•
&uando hablamos de coliformes totales nos referimos a casi todas su familia como lactosa positi"o se le denomina con el nombre de coliforme.
VIII.
RECOMENDACIONES •
$e recomienda traba>ar con 6 muestras consecuti"as y con
•
esos "alores se encuentra el resultado. )ener buena limpie3a en los baGos especialmente ya que estos se dispersen r(pidamente, produciendo diarrea, es la bacteria
• •
con la que constantemente estamos tratando en todo sentido. 'sterili3ar el ambiente. $e necesario traba>ar con M'&C es m(s *+M+'N'= en caldo caldo brilla.
I5.
CUESTIONARIO +.67P#r $%8 e "'9#rta:te ete ":;"ca;#r '"cr#!"#<=>"c# 9ara e?a<%ar
"ca ;e 9r#;%ct# a<"'e:t"c"#@ La Microbiolog#a de =limentos es la rama de la Microbiolog#a que se ocupa entre otros aspectos del estudio de los microorganismos que pueden afectar la calidad sanitaria de los alimentos y el agua. 'l (rea de la microbiolog#a de los alimentos es basta y comple>a, pues incluye adem(s las caracter#sticas generales de estos microorganismos, su ecolog#a, su resistencia al medioambiente, su capacidad para sobre"i"ir y desarrollarse en los alimentos, las consecuencias de este desarrollo y los factores que inJuyen en este proceso.
La Microbiolog#a de =limentos se relaciona con la microbiolog#a médica,
la "eterinaria,
la "irolog#a,
la parasitolog#a,
la genética,
la bioqu#mica, la tecnolog#a de los alimentos, la epidemiolog#a. 's importante en el diseGo y aplicación del sistema de an(lisis de peligro y puntos cr#ticos de control, esencial para garanti3ar la inocuidad de los alimentos, en el estudio de brotes de enfermedades asociadas al consumo de alimentos, en el diseGo y e"aluación de técnicas modernas de an(lisis, en el estudio de los procesos que tiene lugar durante el deterioro de los alimentos y en la fabricación de aquellos que hacen uso de microorganismos.
.67%8 "'9#rta:c"a t"e:e 9ara e?a<%ar "ca ;e< %e<# ;e< a>%a@ 'l agua no debe presentar ningún tipo de riesgo que pueda causar irritación qu#mica, into%icación o infección microbiológica que sea per>udicial
a
la
salud
humana
?-==$,
/II1A.
Debido a estas condiciones, en el caso de los microorganismos patógenos no e%iste un l#mite inferior tolerable5 por lo que el agua destinada al consumo, la preparación de alimentos y bebidas o la higiene personal no debe contener ningún agente patógeno para los seres humanos. 'sto se puede conseguir seleccionando fuentes de agua de buena calidad, tratando y descontaminando e!ca3mente el agua contaminada con heces de seres humanos o de animales u otras sustancias y protegiéndola para que no haya contaminación durante la distribución al usuario. ?+M$, /II7A.
Los microorganismos en general, son encontrados comúnmente en el agua, suelo y aire. La cantidad de ellos, presentes en cualquiera de estos medios, depende de una serie de factores tales como4 humedad,
temperatura
y
nutrientes.
?&=&''$,
/II2A.
'l peligro m(s común y difundido, relati"o al agua de consumo humano es el de su contaminación microbiana con aguas ser"idas y e%cretas del hombre y de los animales.Para controlar los peligros se aplican criterios ?gu#as y est(ndaresA para normar la calidad de las aguas5 éstos establecen requisitos que deben satisfacer las aguas para que puedan ser destinadas al consumo humano sin que afecten
su salud. 'l cumplimiento de los requisitos de calidad sanitaria debe reducir en forma signi!cati"a los riesgos de contraer enfermedades infectocontagiosas ?N*'M, &K@=, /IIFA. $in embargo, si los requisitos de calidad sanitaria no son los adecuados, carecer(n de importancia para proteger y controlar la calidad del agua y su aplicación no cumplir( con los ob>eti"os pre"istos.
-.67%8 ":;"ca
.6Ut"<"a:;# 7$%8 !%e:a 9rct"ca ;e 'a:%act%ra e 9#;r&a e?"tar e< a%'e:t# ;e< NMP ;e c#<"#r'e t#ta
nstalaciones f#sicas nstalaciones sanitarias Mane>o de desechos &aracteri3ación de agua &ontrol de plagas
)ener
en cuenta todos los requisitos para un buen
proceso
pr(ctico en un laboratorio o empresa industrial. 'sto con el !n de obtener
buenos resultados que no per>udiquen la salud de los
seres humanos y la institución tenga un buen prestigio higiénico.
I.
BIBLIO3RAF2A /.B @ourgeois &.M. Microbiolog#a =limentaria. 'ditorial &ontinental $.=./II7. F.Bra3ier ,.&. Microbiolog#a de los alimentos .'d. =cribia . 'spaGa F222. 6.B Mossel.D.Microbiolog#a de los alimentos. 'd. =cribia. 'spaGa F222. 9.BD&+ Manual de medios de culti"o. 'd. Difco. 7.BM'&C. Manual de medios de culti"o 'd. Merc, =lemania. 1.BMinisterio de $alud D'$= . Manual de =n(lisis Microbiológico de =limentos. <.B=+B+NKB Manuales para el control de calidad de =limentos para la agricultura y la =limentación. oma.
II.
ANE5OS
)abla de NMP para e%presar resultados.
D"<%c"=
D"<%c"=
D"<%c"=
NMP
: +6+
: +6
: +6-
9#r >.
+ + + + -
/ 2 2 / F 2 2 / / F 2 2 / / F F F 6 6 6
2 2 / 2 2 2 / 2 / 2 2 / 2 / 2 / F 2 / F
6 9 < < // I /9 /7 F2 F/ F6 92 92 <2 I2 /72 F/2 F22 722 //22
G
/ / / / F / 6 6 2 7 9 /2 /2 F2 F2 62 72 O/22 /22 F22
/G
F6 F0 67 61 99 02 0F 07 << 02 /<< F62 FI2 6<2 7F2 112 0F2 /I22 6622 1922
/ / F F 9 F 6 7 0 0 < /2 F2 F2 62 72 02 F22 F22 /22
/< F/ F< 60 67 60 90 72 1/ 16 /FI /02 F/2 F02 6I2 1/2 192 /922 F922 /022
